人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）和白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）在培养液中的质量浓度。兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液（DMEM＋人AECs培养液）培养48h，采用实时定量聚合酶链反应（QRT—PCR）法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞（UVECs），并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液，划痕法和细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响。分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50txg／L的bFGF，CCK8法检测各培养液中人UVECs的增生情况。在原子力显微镜（AFM）下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响。结果人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs。与无血清DMEM组相比，人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA（1．00＋0．22VS．2．98_＋0．46）及bFGFmRNA（1．00＋0．36VS．2．55-＋0．48）的表达均明显下降，差异均有统计学意义（p_-0．001、0．002）；培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度（A）值明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），人UVECs的迁移率下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱，细胞间连接及伪足减少。ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为（70．41±0．68）Ixg／L，IL-1Ra的质量浓度为（153．56±0．36）-s／L，无血清DMEM组中未检出。结论人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达，抑制血管内皮细胞的增生和迁移，细胞结构和功能改变，这可能是其抑制CNV的机制之一。

对眼化学烧伤分期和分度之商榷

结合近年来研究进展,我们对眼化学烧伤进行了新的分期和分度。新的分期和分度更有利于临床治疗、预后评估和不同研究结果之对比。

丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法培养人成纤维细胞，以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定。取传3代后对数生长期细胞以5×10^3个／孔的密度接种于96孔板，将不同质量浓度0、50、100、200、300、400mg／LMMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h，用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测培养细胞的活力，应用Annexin V—FICT／碘化丙啶（PI）法检测细胞凋亡的情况；利用原子力显微镜（AFM）观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变；检测细胞上清液中丙二醛（MDA）的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度；检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶（LDH）含量以评估细胞膜的通透性变化；用Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化。结果组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出，波形蛋白检测呈阳性反应。用MMC处理培养细胞12h后，人成纤维细胞的活力减弱，MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性。0、50、100、200、300mg／LMMC处理组细胞凋亡百分比分别为4．2％、4．2％、5．4％、19．3％和25．8％。AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常，不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组，且均随着MMC质量浓度的增加，LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加，组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测表明，培养细胞内游离钙离子增多。结论MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变，其作用呈剂量依赖性，细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一。