叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备

目的：研究叶酸受体（folatereceptor，FR）在血液肿瘤细胞表达的特点，合成叶酸-聚乙烯亚胺（FA—PEI）聚合物，探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性。方法：用实时荧光定量PCR（realtimePCR）法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562／A02、U266细胞株上的表达；利用叶酸（FA）活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）的支链氨基反应，合成FA-PEI共聚物；用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化；用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱（1HNMR）法验证交联是否成功。结果：α、β、γ3种FR在K562、K562／A02、U2663种细胞株上均表达，其中，α-FR的表达占优势，较β-FR和γ-FR表达量高；紫外分光光度计扫描图谱在365nm处出现叶酸的特征性吸收峰；核磁共振（1HNMR）示：在2．5～3．2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移，在6．5～9．0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号。结论：FR在K562、K562／A02、U2663种细胞株上均有较高表达；FA—PEI偶联成功，为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据。

恶性血液病患者父母生活质量的调查

目的调查研究恶性血液病患者父母的生活质量。方法应用生活质量综合评定问卷对84名恶性血液病患者的父母与40名正常人的父母对照进行评定。结果恶性血液病患者父母的总体生活质量较正常对照组差,其中以心理健康、躯体健康和社会功能健康对生活质量的影响最大。结论恶性血液病患者父母的生活质量较正常对照组差,在临床工作中应对患者父母进行相应的护理干预,提高患者父母的生活质量。

2022年非小细胞肺癌重要临床研究纵览与解读

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)研究在肿瘤学个体化治疗中一直处于领先地位,无论是围术期、局部晚期或晚期NSCLC都陆续有重磅的研究成果报导。值得强调的是,保持创新性对进一步改善肺癌个性化治疗具有非常重要的意义,如何做好临床试验和转化研究、甚至将二者更好的结合是目前亟待思考的问题。本文简要综述了2022年发表的重磅转化研究成果、改变临床实践的临床试验结果以及具有重要影响的肺癌研究进展。

走向治愈:肺癌的长生存之道2023

歌词曰:我们的未来不是梦,这句话恰如肺癌患者的现状。肺癌作为全球致死率排名第一的恶性肿瘤^([1]),严重危害着人类的健康,是全球肿瘤医生希望攻克的难题。在中国,肺癌代表着更为沉重的疾病负担。2022年预估中国肺癌新发病例约为870 982例,死亡病例约为766 898例^([2])。幸运的是,近10年间肺癌的治疗格局发生了翻天覆地的变化,近两年先后公布的多项Ⅲ期临床研究的长期随访结果,让越来越多的非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者看到了长生存乃至治愈的曙光。

少见驱动变异在非小细胞肺癌中的研究进展与挑战

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中约有40%携带常见的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)敏感突变(19外显子缺失突变或21外显子L858R点突变)[1-2],另约有20%~30%左右的患者携带明确可靶向治疗的少见或罕见驱动变异[3-14]。如何定义为“少见”、“罕见”目前尚无统一的标准,文献通常将检出率<5%的变异定义为“少见”,对“罕见”的标准尚无明确定义[15-16]。NSCLC中少见驱动变异虽然单独检出率低,但总体比例并不低,加之庞大的NSCLC患者基数,提高检出率、提升研发效率、规范诊疗策略对少见驱动变异的精准、规范全程管理具有重要意义。

免疫检查点抑制剂在晚期肺癌治疗中的临床价值

近年来免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICI)的临床应用是肺癌治疗手段和药物发展的一个重大突破,提高了晚期肺癌患者的生存率。虽然可供选择药物和治疗模式越来越多,临床治疗也迎来了新的挑战。本文基于中国胸部肿瘤研究协作组评分(Chinese Thoracic Oncology Group,CTONG评分)系统,结合ICI药物的特性,从有效性、安全性、生存质量和补偿方面,考量药物在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)初始治疗中的临床价值,使治疗方案的制定和选择更适合免疫治疗的患者,实现最大化的生存获益。同时也为制药公司未来新药物和适应证的研究与开发提供导向。

经外周静脉置入中心静脉导管带管出院患者居家维护模式的建立与效果评价

目的探讨经外周静脉置入中心静脉导管（PICC）带管出院患者居家维护的方法及可行性。方法成立专门小组,对血液科住院置管、家住偏远地区、出院后不方便到医院维护、有居家维护需求的52例患者,从置管开始,对患者进行自我管理健康教育,对家庭维护者采用＂讲、看、练、考＂四步法进行导管维护知识培训,制定PICC带管患者家庭维护指导手册,维护材料选择少量独立包装的无菌物品,患者出院后,护士至少每周1次电话追踪随访,建立联系热线等。结果 52例患者出院间歇期为15~45 d,平均（21±5.6）d,导管留置时间95--370 d,平均（185.12±14.93）d,患者导管维护的依从性达到98.1%,导管相关并发症发生率为9.6%。结论家住偏远地区、出院后不方便到医院维护的PICC带管出院患者,按居家维护模式执行,患者在家维护是可行的。

TRGV及预后相关趋化因子/受体基因在T细胞淋巴瘤中的表达变化

目的分析非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血中T细胞受体γ(TCR γ)亚家族可变区Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(TRGVⅠ、Ⅱ、Ⅲ)基因和预后相关趋化因子及其受体基因(CCL20、CCR6、CCL17、CCL22以及CCR4)的表达情况,探讨γδ T细胞与趋化因子/受体表达的相关性及其与疾病转归的相关性。方法收集27例非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血样本,同时收集9例健康志愿者外周血样本作为对照。采用荧光实时定量PCR检测T细胞淋巴瘤患者以及正常人外周血中TRGVⅠ~Ⅲ亚家族基因以及CCL20/CCR6、CCL17/CCL22/CCR4基因的表达水平。结果初发组、难治复发组和缓解组的TRGVⅠ~Ⅲ亚家族的表达水平与正常组相比均有不同程度的增高,且TRGV亚家族表达模式发生改变。初发组和难治复发组的CCL22和CCR4的表达水平显著高于正常组,而CCL17表达水平显著低于正常组。初发、缓解和难治复发组的患者外周血中TRGV各亚家族基因与各趋化因子及受体基因表达水平的相关性模式也发生改变。初发组和难治复发组存在低表达的TRGVⅡ亚家族,治疗缓解后TRGVⅡ亚家族的表达升高。结论 TRGVⅡ亚家族可能是抗T细胞淋巴瘤的T细胞功能亚群,可能与疾病的发病和转归相关。T细胞淋巴瘤中高表达水平的CCL22/CCR4,可能与疾病的发病有关。

系统性红斑狼疮患者血清脂质水平异常的临床研究

目的探讨初治系统性红斑狼疮(SLE)患者血清脂质(血脂)水平异常的发生率和危险因素,以及抗狼疮规范化治疗对SLE患者血脂异常的治疗作用。方法对初治SLE患者58例及同期健康体检者58例进行回顾性研究,所有SLE患者接受糖皮质激素+环磷酰胺+羟氯喹规范化治疗。观察初治SLE患者血脂异常发生率,以及治疗前和治疗后第3、6、12个月各指标血脂水平的变化,探讨初治SLE患者血脂异常的危险因素。结果(1)与健康对照组相比,初治SLE患者的血清TG水平增高,LDL水平增高,HDL水平降低。(2)58例初治SLE患者中有50例发生血脂异常(86.21%),其中低HDL血症34例(58.62%),高TG血症30例(51.72%),高LDL血症15例(25.86%),高TC血症10例(17.24%)。(3)高TC血症患者在四个时点的TC差异有统计学意义;高TG血症患者在四个时点的TG差异有统计学意义;低HDL血症患者在四个时点的HDL差异有统计学意义;高LDL血症患者在四个时点的LDL差异有统计学意义。(4)ESR>20mm/h、蛋白尿阳性、SLICC≥1分和抗Sm抗体阳性是高TG血症的独立危险因素;IgG>16g/L、SLEDAI≥5分和抗SSA抗体阳性是低HDL血症的独立危险因素;IgG>16g/L和抗U1RNP抗体阳性是高LDL血症的独立危险因素。结论(1)初治SLE患者存在明显脂质代谢紊乱,表现为TG、LDL水平增高,HDL水平降低。(2)糖皮质激素+环磷酰胺+羟氯喹的规范化治疗对SLE患者的血脂异常有明显调控作用;(3)ESR>20mm/h、尿蛋白阳性、SLEDAI≥5分、SLICC≥1分、IgG>16g/L、抗Sm抗体阳性、抗SSA抗体阳性和抗URNP抗体阳性是SLE患者并发血脂异常的独立危险因素。

白消安-氟达拉滨预处理方案对异基因造血干细胞移植后肝静脉闭塞症的影响

目的:探讨白消安(BU)联合氟达拉滨(Flud)预处理方案在无任何预防措施情况下对异基因造血干细胞移植后肝静脉闭塞症(HVOD)的影响。方法:分析以Bu-Flud为预处理方案的122例异基因造血干细胞移植(al-lo-HSCT)患者的临床资料,其中42例用小质量分数肝素预防HVOD,而80例则不予任何药物预防,并观察了两组HVOD发生情况。结果:两组均未发生HVOD,包括非亲缘供者移植和HLA单倍体相合供者移植,有乙型肝炎病史者,移植前转氨酶水平和总胆红素水平增高者。结论:以Bu-Flud为预处理方案的allo-HSCT患者,即使无HVOD预防也是安全的。

地西他滨对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察去甲基化药物地西他滨(DAC)对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响。用台盼蓝染色法检测DAC对NB4及K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同浓度DAC作用后细胞周期的变化和CD11b的表达水平;瑞氏染色法观察药物作用后细胞形态变化;DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡。结果表明,DAC显著抑制NB4及K562细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性,DAC作用NB4及K562细胞72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.113μmol/L和0.138μmol/L;不同浓度DAC作用72 h后,0.15μmol/L DAC处理组两种细胞株G0/G1期细胞比例均显著增高,而S期细胞比例降低(P<0.05);两种细胞株的髓系分化抗原CD11b表达水平均升高(P<0.05);两种细胞株经不同浓度DAC处理48 h后,0.15μmol/L DAC处理组均出现典型的凋亡梯形DNA条带。结论:DAC抑制NB4及K562细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡;DAC对NB4细胞作用更明显。

尼古丁对人脐带间充质干细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨尼古丁对人脐带间充质干细胞(MSCs)一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、活性氧(ROS)、线粒体膜电位及细胞因子生成的影响。方法:尼古丁作用MSCs后,硝酸还原酶法测NO的释放情况;分光光度计法测NOS和iNOS活性;流式细胞技术测ROS及线粒体膜电位的变化;ELISA法测培养上清液中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平的变化。结果:在24 h和36 h,NO水平随尼古丁浓度上升而增加(P<0.05),但在48 h,0.8 g/L与1.0 g/L组,NO水平低于对照组;NOS和iNOS活性随尼古丁浓度上升而逐渐增加;尼古丁可增加MSCs的ROS水平,并降低线粒体膜电位;在尼古丁作用下,MSCs分泌SDF-1、TGF-β1、IGF-I及bFGF水平下降,ICAM-1、MMP-9及TIMP-1表达均上升。结论:尼古丁通过增加NO、NOS、iNOS和ROS水平,降低线粒体膜电位,使SDF-1、TGF-β1、IGF-I及bFGF分泌下降,ICAM-1、MMP-9及TIMP-1表达上升,可能影响MSCs的增殖、黏附、迁移等特性。

6-姜酚诱导K562细胞凋亡的差异蛋白表达

目的:建立白血病细胞的蛋白质二维凝胶电泳图谱,结合质谱技术鉴定,分析6-姜酚诱导K562细胞凋亡的差异表达蛋白。方法:6-姜酚作用K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,2D-DIGE提取细胞总蛋白,SDS凝胶扫描成像,用ImagineMaster2DPlatinum6.0软件分析差异蛋白质点,利用基质辅助激光解析即串联飞行时间质谱对候选表达差异蛋白作质谱鉴定和功能分类。结果:6-姜酚能显著抑制K562细胞增殖,其作用呈时间及剂量依赖性,24、48、72h的IC50值分别为22.86、15.75、11.18μg/mL。鉴定42个差异表达蛋白,发现35个非重复性差异,其中19个高表达,16个低表达。结论:用蛋白质组学方法筛查出与姜酚抗白血病相关的多种蛋白质,涉及氧化应激反应、细胞周期调节、细胞凋亡信号转导、蛋白质生物合成及糖代谢等。

不同疾病状态下类风湿关节炎患者外周血和关节液A20基因表达水平的改变特点

目的分析A20和NF-κB基因在类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中的表达水平及治疗前后表达水平的变化,探讨A20在RA炎症发生发展的作用。方法利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测RA患者外周血和关节液中单个核细胞A20和NF-κB基因表达水平以及RA患者治疗前(疾病活动期)和治疗后3个月外周血单个核细胞(PBMCs)A20和NF-κB基因表达水平。结果 1)疾病活动期54例RA患者PBMCs中A20表达水平(6.52±5.85)明显低于健康对照组(34.47±26.55,P<0.001),NF-κB表达水平(1.55±2.02)高于健康对照组(0.59±0.16,P=0.046);2)14例RA患者PBMCs中A20(8.07±6.25)和NF-κB(7.11±19.01)与关节液单个核细胞A20(7.74±5.74)和NF-κB(0.76±0.24)表达水平差异无统计学意义(P>0.05);3)19例RA患者治疗后3月病情明显缓解,治疗后PBMCs中A20表达水平(10.18±13.22)较治疗前(2.32±1.87)明显升高(P=0.019),但治疗后外周血A20表达水平仍然明显低于健康对照组(P<0.001);NF-κB表达水平在治疗前后无明显变化(P=0.403)。结论 RA患者外周血A20表达水平明显降低,并与NF-κB表达水平上调相对应,而RA疾病缓解后,A20表达水平有所恢复。RA患者关节液中A20和NF-κB表达水平与患者外周血中A20和NF-κB相似。

ITP中T细胞活化信号分子c-Cbl和Cbl-b的表达变化

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健康成人作为对照.结果:ITP组Cbl-b的表达水平(中位数为0.091%)与健康成人组Cbl-b的表达水平(中位数为0.366%)相比,明显降低(P<0.001);而c-Cbl基因在ITP组中的表达水平(中位数为0.372%)与健康成人组的表达水平(中位数为0.298%)相比没有统计学差异,但c-Cbl基因在ITP女性患者样本中的表达水平(中位数为0.236%)明显低于男性患者样本c-Cbl的表达水平(中位数为0.479%)(P=0.039).结论:ITP患者外周血中Cbl-b表达下调,可能是其T细胞免疫异常活化的原因之一.

CML病人外周血T细胞CD3基因表达模式变化

在我们前期研究发现慢性髓系白血病(CML)病人中T细胞受体信号传导分子CD3ζ基因表达下调的基础上,本研究进一步分析病人外周血中全部4种CD3γδεζ基因的表达模式特点,以深入了解病人的T细胞免疫中信号转导的变化。利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测17例初诊慢性期CML病人外周血单个核细胞中CD3γ、δ、ε和ζ链的表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算CD3分子各亚单位的相对mRNA表达量,以17例健康成人外周血作为对照。结果表明:CML中CD3γ、δ、ε基因表达水平分别为2.344%,0.515%和3.516%(中位数),与健康对照组比较(3.093%,0.853%和2.302%)并没有显著性差异(p=0.072,p=0.190,p=0.615),而CML中CD3ζ链基因的表达水平(0.395%)则明显低于健康对照组(1.538%)(p<0.001)。在CML中4种CD3分子表达水平模式依次为CD3ε>CD3γ>CD3δ>CD3ζ,而对照组中则为CD3γ>CD3ε>CD3ζ>CD3δ。结论:本研究首先提供了CML病人中CD3各基因表达模式情况,显示以CD3ζ为主的TCR信号分子的表达缺陷,4种CD3链分子的表达水平模式也发生变化。

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响(英文)

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性。小檗碱处理后72h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰。结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值。

姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜活性成分姜酚及其衍生物姜酚肟对慢性粒细胞系K562细胞的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖活性的影响,PI单染检测其对K562细胞周期的影响,Annexin V-PI双染检测早期细胞凋亡,Hochest 33258染色观察细胞形态学的变化。结果:(1)姜酚作用于K562细胞48、72 h后,显著抑制K562细胞增殖,48 h的IC50值为15.75μg/mL,且具有时间及剂量依赖性。姜酚肟的抑制作用亦有时间及剂量依赖性,但较姜酚抑制作用弱。(2)姜酚15μg/mL组细胞周期阻滞于S期,姜酚肟作用组细胞周期与对照组比较无明显差异(P>0.05)。(3)姜酚和姜酚肟作用48 h后出现早期凋亡群,姜酚各浓度组间的早期凋亡率差异显著(P>0.05),随着药物浓度的增加凋亡率升高。(4)荧光显微间观察出现少量的细胞胞核固缩,核边集,出现凋亡小体。结论:姜酚和姜酚肟对K562细胞有显著的抑制作用,姜酚较姜酚肟抑制作用强,姜酚的抑制机制可能与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关,姜酚肟的抑制机制可能与诱导细胞凋亡有关。

增殖细胞核抗原siRNA序列的设计、合成与筛选

目的:设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA)siRNA。方法:总结以往提出的siRNA设计原则的基础上,设计4条PCNAsiRNA,体外转录合成PCNAsiRNA;并作用于3种肿瘤细胞,WST-8法检测细胞增殖活性,筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列;RT-PCR检测细胞PCNA mRNA水平;免疫细胞化学方法检测PCNA蛋白表达水平。结果:4条PCNA siRNA中,有3条序列(No.2、No.4、No.3)的siRNA能有效抑制3种肿瘤细胞的增殖;其中No.2、No.4作用效果最优,以50 nmol/L浓度作用48 h,对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62%以上,No.2、No.4 PCNAsiRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNA siRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖,其适宜作用浓度为50 nmol/L,适宜作用时间为48 h。