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黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究
被引量:
2
1
作者
杨婉莹
温硕洋
+4 位作者
邓小娟
叶明强
夏庆友
曹阳
黄亚东
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期391-398,共8页
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSα...
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后,进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品,除Drs-lI外,其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。
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关键词
黑腹果蝇
抗真菌肽
Drosomycin
同系物
表达
蛋白纯化
下载PDF
职称材料
昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定
被引量:
2
2
作者
桑延霞
邓小娟
+4 位作者
杨婉莹
刘文权
王文献
黄亚东
曹阳
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期842-849,共8页
【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drosomycin-like C(Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效...
【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drosomycin-like C(Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达,对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin基因(Drs)及其同系物基因Drs-lC和Thanatin基因分别与酵母分泌型表达载体pPICZαA重组,构建成重组表达质粒pPICZαA-Drs、pPICZαA-Drs-lC和pPICZαA Thanatin。利用电转化将重组质粒转化毕赤酵母GS115,经表型筛选和PCR鉴定获得的重组毕赤酵母转化子,在甲醇诱导下进行抗真菌肽的分泌表达。【结果】3种抗真菌肽基因的酵母表达产物对6个供试真菌中的5个有明显的抑制作用,Thanatin同时对供试细菌有抗菌活性。【结论】Drs、Drs-lC和Thanatin抗真菌肽基因成功地转化毕赤酵母,并实现其分泌型表达。
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关键词
昆虫
抗真菌肽
毕赤酵母
分泌型表达
抗真菌活性鉴定
下载PDF
职称材料
题名
黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究
被引量:
2
1
作者
杨婉莹
温硕洋
邓小娟
叶明强
夏庆友
曹阳
黄亚东
机构
华
南
农业
大学
动物科学学院蚕丝科学系
华
南
农业
大学
资源环境学院昆虫学系
西
南
大学
蚕学与
生物技术
学院农业部蚕桑学重点实验室
曁南大学医药生物技术研究开发中心
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期391-398,共8页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2005CB121000)
国家自然科学基金项目(30370716)
+1 种基金
广东省自然科学基金项目(010294)(032256)(04020553)
广东省科学技术计划重点项目(2003C104042)
文摘
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后,进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品,除Drs-lI外,其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。
关键词
黑腹果蝇
抗真菌肽
Drosomycin
同系物
表达
蛋白纯化
Keywords
Drosophila melanogaster
Antifungal peptide
Drosomycin
Isoforms
Expression
Protein purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定
被引量:
2
2
作者
桑延霞
邓小娟
杨婉莹
刘文权
王文献
黄亚东
曹阳
机构
华
南
农业
大学
动物科学学院蚕丝科学系
西
南
大学
农业部蚕桑学重点实验室重庆
华
南
农业
大学
资源环境学院昆虫学系
曁南大学医药生物技术研究开发中心
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期842-849,共8页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2005CB121000)
广东省科学技术计划重点项目(2003C104042)
+1 种基金
广东省自然科学基金资助项目(032256
04020553)
文摘
【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drosomycin-like C(Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达,对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin基因(Drs)及其同系物基因Drs-lC和Thanatin基因分别与酵母分泌型表达载体pPICZαA重组,构建成重组表达质粒pPICZαA-Drs、pPICZαA-Drs-lC和pPICZαA Thanatin。利用电转化将重组质粒转化毕赤酵母GS115,经表型筛选和PCR鉴定获得的重组毕赤酵母转化子,在甲醇诱导下进行抗真菌肽的分泌表达。【结果】3种抗真菌肽基因的酵母表达产物对6个供试真菌中的5个有明显的抑制作用,Thanatin同时对供试细菌有抗菌活性。【结论】Drs、Drs-lC和Thanatin抗真菌肽基因成功地转化毕赤酵母,并实现其分泌型表达。
关键词
昆虫
抗真菌肽
毕赤酵母
分泌型表达
抗真菌活性鉴定
Keywords
Insect
Antimicrobial peptides
Pichia pastoris
Secretive expression
Antifungal activity assay
分类号
Q963 [生物学—昆虫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究
杨婉莹
温硕洋
邓小娟
叶明强
夏庆友
曹阳
黄亚东
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
下载PDF
职称材料
2
昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定
桑延霞
邓小娟
杨婉莹
刘文权
王文献
黄亚东
曹阳
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
下载PDF
职称材料
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