大鼠骨髓间充质干细胞经低氧诱导因子-1α基因转染后的生物学特性

目的评价大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）经低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染后的生物学特性。方法将构建好的HIF-la基因表达载体（pcDNA3．1-HIF—1α）运用电穿孔法转染入第3代BMSCs中得到稳定表达HIF-1α的BMSCs（BMSCs-HIF-1α细胞）。以单纯BMSCs和电转染pcDNA3．1的BMSCs（BMSCs-pcDNA3．1细胞）作为对照。采用免疫细胞化学法鉴定HIF-1α基因表达载体是否转染成功；低氧培养后，采用Westernblot法测定HIF-1α表达；流式细胞术对转染后细胞进行周期与凋亡的检测，记录G，期、G2期和S期细胞比例，计算增殖指数（PI）；MTT法绘制细胞生长曲线，记录细胞数目。结果BMSCs-HIF-1α细胞核内充满蓝紫色深染颗粒，其余两种细胞未见深染颗粒。与BMSCs和BMSCs-pcDNA3．1细胞比较，BMSCs—HIF-1α细胞HIF-1α表达上调，细胞凋亡率降低，S期和G2期细胞比例和PI升高，G．期细胞比例降低，细胞数目增多（P〈0．05）。BMSCs和BMSCs—pcDNA3．1细胞上述各指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HIF-1α基因成功转染人大鼠BMSCs。

HIF—1α基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果

目的评价低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因修饰骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果。方法成年健康雄性SD大鼠135只，2月龄，体重200～300g，采用随机数字表法，将其分为4组：假手术组（S组，n=20）、缺血再灌注组（I／R组，n=20）、BMSCs组（n=20）和HIF-1α基因修饰BMSCs组（HIF-1α—BMSCs组，n=75）。采用阻断腹主动脉45min行再灌注的方法制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型，于术后3h时HIF-1α—BMSCs组鞘内注射HIF-1α修饰的BMSCs1×10^6个／5脚，BMSCs组给予BMSCs 1×10^6个／5脚。分别于治疗后1、3、7、14、28d时进行BBB运动等级评分，然后取k。；脊髓组织，测定HIF—lamRNA及其蛋白表达。结果与S组比较，I／R组治疗后1、3、7、14、28d时BBB运动等级评分降低，BMSCs组和HIF-1α—BMSCs组治疗后1、3、7、14d时BBB运动等级评分降低（P〈0．05）；与I／R组比较，BMSCs组和HIF-1α—BMSCs组治疗后3、7、14、28d时BBB运动等级评分升高，脊髓组织HIF-1αmRNA及其蛋白表达上调（P〈0．05）；与BMSCs组比较，HIF-1α—BMSCs组治疗后3、7、14d时BBB运动等级评分升高，脊髓组织HIF-1αmRNA及其蛋白表达上调（P〈0．05）。结论HIF-1α基因修饰BMSCs移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果较好。