转染过表达miR-101的BMSCs对大鼠矽肺纤维化的抑制作用

目的探究转染过表达miR-101的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠矽肺纤维化的抑制作用。方法选取40只健康雄性大鼠随机分为4组,每组均10只,分别为对照组、SiO_(2)模型组、BMSCs治疗组、miR-101 BMSCs治疗组。另选取15只3周龄SD雌性大鼠,分离培养BMSCs,传至第3代用于后续实验。采用慢病毒载体(LV-rno-mir-101a)构建稳转的过表达miR-101BMSCs,培养至转染最佳效率备用。SiO_(2)模型组、BMSCs治疗组、miR-101 BMSCs治疗组采用非暴露式气管插管一次性注入灭菌NaCl与SiO_(2)粉尘混悬液构建矽肺大鼠模型。造模后24 h内,BMSCs治疗组、miR-101 BMSCs治疗组分别尾静脉注射BMSCs与DMEM悬液1.0 ml(2×10^(6)/L)、miR-101 BMSCs与DMEM悬液1.0 ml(2×10^(6)/L)干预抑制,所有大鼠于治疗第14天取材。HE染色观察大鼠肺组织形态学改变,免疫印迹法检测TNF-α、IL-6、Beclin-1、LC3、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白定量表达水平。结果LV-rno-mir-101a成功构建并稳转miR-101 BMSCs,于转染72 h后,采用荧光显微镜细胞计数,其转染效率达90%以上,满足本实验需要。SiO_(2)模型组较对照组大鼠自噬激活、炎细胞浸润、胶原沉积等病理改变显著增强(P<0.05),BMSCs治疗组和miR-101 BMSCs治疗组较SiO_(2)模型组大鼠自噬和炎细胞浸润均减弱(P<0.05),miR-101BMSCs治疗组较BMSCs治疗组自噬、炎细胞浸润和胶原沉积等状态改善更为显著(P<0.05)。结论外源性转染过表达miR-101 BMSCs比单纯BMSCs移植对抑制矽肺大鼠纤维化效果更为突出,能明显抑制自噬激活,改善肺组织炎症反应及纤维化程度,为矽肺的基因治疗提供了实验室依据,有待临床实验进一步验证。