RT-PCR鉴别鸡新城疫病毒强弱毒株检测方法的建立

通过比对分析NCBI数据库中新城疫病毒(NDV)不同毒株V蛋白基因序列,设计2对引物,并优化试验条件,建立一种快速鉴别NDV强弱毒株的RT-PCR诊断方法。结果显示,用2对引物对NDV强毒可扩增出703 bp和456 bp的特异性片段,而对NDV弱毒只能扩增出703 bp的特异性片段;特异性试验结果表明该方法对IBDV、IBV和ILTV的检测均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强弱毒株最小RNA检出量为均为0.01 ng/μL,敏感性高于当前通用检测引物。所建方法具有高灵敏性、强特异性、准确快速等优点,可用于临床新城疫强弱毒的快速检测及新城疫的监测。

致牛腹泻4种细菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

随着规模化和集约化养牛业的不断发展,多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展,对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要。根据沙门氏菌的ivnA基因、大肠埃希氏菌的23S rRNA基因、产气荚膜梭菌的plc基因以及志贺氏菌的ipaH基因的保守区域建立了可同时检测这4种细菌的多重荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行了研究。结果显示,建立的标准曲线线性关系良好;优化后的检测方法仅可特异性扩增出4种目标细菌;对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌和产气荚膜梭菌的最低检出限分别为9.4×10~1copies/μL、1.2×10~2copies/μL、9.1×10~1copies/μL和1.4×10~3copies/μL,该方法的灵敏性高于普通单项PCR检测方法10倍;批内、批间差异均小于5%。用此方法检测人工感染病料,每份病料均检测出对应攻毒细菌的荧光信号。以上结果表明,所建立的多重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于致牛腹泻细菌的实验室检测。