安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究

目的研究安儿宁颗粒单次给药和3个月重复给药对幼年大鼠的毒性影响,评估安儿宁颗粒对临床儿童患者的长期使用安全性。方法20只幼年大鼠(3~4周龄),按最大给药量法,单次给予安儿宁颗粒240 g生药/kg体重的剂量,观察大鼠的毒性反应和死亡情况;200只幼年大鼠(3~4周龄)按体重均衡随机分为溶媒对照组、唐古特乌头组、安儿宁颗粒低、中、高剂量组,每组40只,雌雄各半,分别灌胃给予纯水、唐古特乌头5.5 g生药/kg体重、安儿宁颗粒3、11、40 g生药/kg体重,每天1次,连续91 d,于给药中期(给药1.5个月)、停药(给药3个月)和恢复期结束(停药后4周)分别抽样剖检大鼠40只(每组10只,雌雄各半)、80只(每组20只,雌雄各半)和40只(每组10只,雌雄各半),检测体重、摄食、血液学、血清生化学、凝血、尿液、眼科及组织病理学等相关指标。结果幼年大鼠单次经口给予最大给药量的安儿宁颗粒,未见明显急性毒性;重复经口给予安儿宁颗粒91 d,仅见高剂量雄鼠摄食量减少和体重增长减缓、唐古特乌头组和给药组雄鼠中性粒细胞和单核细胞数、血清白蛋白均可逆性升高,AST、Na+、Cl-可逆性下降,其余指标均未见显著毒性反应。结论安儿宁颗粒对幼年大鼠无显著毒性反应。相对安全剂量为40 g生药/kg体重,未观察到有害作用(NOAEL)剂量为11 g生药/kg体重。

灵芝及灵芝孢子粉的毒理学与安全性评价研究进展

本文对灵芝及灵芝孢子粉的概况、灵芝孢子粉的去壁和破壁技术、灵芝孢子粉的鉴定方法进行了梳理,并重点对灵芝孢子粉毒理学各项研究(包括急性毒性、遗传毒性、重复给药毒性、幼龄动物毒性研究等)进行整理归纳,现有文献表明灵芝及灵芝孢子粉在上述毒理学试验中安全性良好,无明显毒性。

人脐带间充质干细胞单次静脉注射NOG小鼠组织分布及其分析方法学研究

目的建立并验证小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法学,研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)单次静脉注射后在重度免疫缺陷NOG小鼠体内的组织分布情况。方法建立小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法,进行标准曲线与线性范围、准确度与精密度、稳定性等方法学验证。取NOG小鼠36只,雌雄各半,单次静脉注射给予HUCMSCs 3.5×10^(7)cells/kg,于6、12、24、72 h、1周、2周各取6只小鼠麻醉,采集血液(EDTA抗凝)后解剖,取肺、肾、心脏、肝、大脑、脊髓、胃、小肠、脂肪、皮肤、脾、睾丸(子宫、卵巢)提取DNA,用已验证的小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法测定各组织中HUCMSCs的分布情况。另选取NOG小鼠18只,雌雄各半,分为对照组6只、给药组12只,分别静脉注射0.9%氯化钠注射液、HUCMSCs 3.5×10^(7)cells/kg,给药期间观察小鼠急性毒性反应情况,给药组于给药后72 h、2、4周各取4只动物剖检观察脏器组织大体观情况,取肺组织石蜡切片采用免疫组化法检测线粒体蛋白表达,分析HUCMSCs在肺组织中的定植情况。结果建立的小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法各考察指标均符合验证标准;NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后,主要分布于肺和血液中(给药后1周内),肺组织浓度高于血液,肺组织、血液中HUCMSCs浓度分别在6~24 h、6~72 h之内维持相对平稳水平,之后随时间推移下降,其他组织各采样点均未测得HUCMSCs分布;定植结果显示静脉注射HUCMSCs后72 h可在肺部检测到其存在,2周和4周时则未检测到;单次静脉注射HUCMSCs后NOG小鼠未见明显急性毒性反应。结论建立的HUCMSCs小鼠组织中分布分析方法可靠、可行;NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后主要于给药后1周内分布于肺和血液,72 h主要定植于肺组织;单次静脉注射HUCMSCs具有良好的安全性。

天台乌药对TNBS诱导的溃疡性结肠炎模型大鼠的抗炎作用研究

目的探究天台乌药对TNBS诱导的溃疡性结肠炎模型大鼠的抗炎作用。方法36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、乌药醇提物低、中、高剂量组。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)50%乙醇溶液灌肠建立UC大鼠模型。造模同时开始灌胃给予天台乌药醇提物干预9 d,实验期间通过观测大鼠体重、便血等疾病症状表现及结肠组织病变程度等指标评价乌药给药后的药效作用;通过检测大鼠结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、血清中IL-6、TNF-α含量及外周血中Treg等淋巴细胞亚群比例等指标初步探讨其可能机制。结果与模型对照组比较,天台乌药各剂量组大鼠疾病症状及结肠组织病变均有所减轻;外周血中Treg占辅助性T细胞比例均有所升高;结直肠重量及单位长度重量显著降低(P<0.05)。天台乌药中剂量组结直肠长度显著增加(P<0.05)。天台乌药各剂量组大鼠血清中IL-6含量均显著降低(P<0.01);天台乌药低、中剂量组大鼠血清中TNF-α含量及结肠组织中MPO活性均显著降低(P<0.05)。结论天台乌药能够改善TNBS诱导的UC模型大鼠的疾病症状及组织病理学改变,具有良好的抗UC作用。乌药的抗UC作用可能与其降低IL-6等炎性细胞因子含量有关,具体机制仍有待进一步研究。

基于TGF-β1/Smad信号通路初步探讨虎杖醇提物对腺嘌呤诱导小鼠肾间质纤维化的改善作用

目的研究虎杖醇提物(ethanolic extract of Polygonum cuspidatum,PCE)对小鼠肾间质纤维化的保护作用及其潜在分子机制。方法将50只雄性C57BL/6N小鼠随机分为5组(n=10):正常对照组、模型组、虎杖醇提物低、中、高(75、150、300 mg/kg)剂量组。除正常对照组外,其他各组灌胃腺嘌呤构建肾间质纤维化模型,虎杖醇提物低、中、高剂量组同时灌胃给予不同剂量的虎杖醇提物混悬液。各组经灌胃给药42 d后用生化试剂盒测定血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,通过苏木精伊红染色和Masson三色染色分别观察小鼠肾组织病理学变化及胶原沉积情况,采用Western Blot法检测小鼠肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad6、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen I)的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组小鼠BUN、Scr水平显著增高(P<0.01)。肾组织病理学HE染色可见肾小管结构破坏,炎细胞浸润肾间质,完整的健存肾单位明显减少;Masson染色可见胶原纤维蓝色阳性染色面积明显增多。肾组织TGF-β1的表达明显增多(P<0.01),而TGF-β/Smad通路的负调节因子Smad6的表达显著下调(P<0.01)。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)标志蛋白之一α-SMA、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白之一Collagen I的表达明显增加(P<0.01)。与模型组相比,虎杖醇提物各给药组BUN、Scr水平以及肾组织TGF-β1、α-SMA及Collagen I的蛋白表达水平呈剂量依赖性降低,Smad6的表达水平呈剂量依赖性升高。肾组织的病理改变及纤维沉积面积均有不同程度的改善。结论虎杖醇提物能减轻腺嘌呤诱导的小鼠肾功能损伤,改善肾间质纤维化,其机制与干预TGF-β1/Smad信号通路,抑制EMT及ECM蛋白沉积有关。

猕猴进行遥测系统植入子植入手术的经验体会

目的探讨猕猴应用遥测技术进行植入子在植入手术围手术期内遇到的各类状况以及处理措施。方法对本机构8例猕猴的植入子植入手术过程中出现的问题进行归类、分析和总结。对出现的术前麻醉与备皮、给药困难,术中出血量、麻醉程度,术后切口淤肿、动物自主破坏缝线或植入子导线等问题分析产生原因,提出预防或解决方法并予以实施,通过手术前后体质量、体温、血常规、生化指标的检测结果确认无感染或炎症等不良预后,通过检测术后心血管系统各指标并与猴白昼基础值进行比较确认术后生理状态良好。结果通过标准化的手术过程与完善的应对异常的预案,成功实施了植入子植入手术,手术成功进行并且术后恢复良好,受术猴的体质量、血常规、生化、心电、呼吸、血压、体温等指标显示手术前后基本无差别。结论通过猕猴遥测系统植入子植入手术实例,成功实施猴应用遥测系统的手术流程,提高了遥测动物模型建模的成功率,对国内机构使用植入式遥测系统建立大动物模型在安全药理学研究的应用中起到一定的借鉴作用。

LC-MS测定大鼠脑脊液与血浆中西达本胺浓度及其药动学研究

目的建立快速检测SD大鼠脑脊液和血浆中西达本胺浓度的LC-MS测定方法,并应用于大鼠静脉注射西达本胺后的脑脊液和血浆中药动学研究。方法对建立的检测大鼠脑脊液和血浆中西达本胺浓度的LC-MS分析方法进行专属性、精密度、准确性、基质效应及稳定性等考察验证。♂SD大鼠12只,分为2组,每组6只,分别静脉注射给予西达本胺3,6 mg·kg^(-1)剂量,于给药后0.083,0.25,0.5,1,1.5,2,3 h采集脑脊液和血浆,采用LC-MS测定大鼠脑脊液和血浆中西达本胺的浓度变化,并利用DAS药动学软件拟合脑脊液和血浆中AUC、C_(max)、T_(max)、t_(1/2)等主要药动学参数,计算血脑屏障透过率。结果方法学研究显示,大鼠脑脊液中西达本胺线性范围为0.2~64 ng·mL^(-1)(r=0.999 0,定量下限为0.2 ng·mL^(-1)),血浆中西达本胺的线性范围为2~1 000 ng·mL^(-1)(r=0.999 1,定量下限为2 ng·mL^(-1)),脑脊液和血浆中西达本胺的日内精密度、日间精密度、准确度均符合方法学验证要求。大鼠药动学研究显示,大鼠静脉注射给予西达本胺3,6 mg·kg^(-1)剂量后,脑脊液中的AUC_(0-t)分别为16.01,32.09 ng^(-1)·mL^(-1)·h,C_(max)分别为17.58,28.37 ng·mL^(-1),t_(1/2)分别为1.14,1.23 h;血浆的AUC_(0-t)分别为2 570.11,4 537.63 ng^(-1)·mL^(-1)·h,C_(max)分别为4 366.54,9 103.97 ng·mL^(-1),t_(1/2)分别为0.83,0.77 h。2组西达本胺的平均血脑屏障透过率分别为0.62%和0.72%。结论本研究建立了简便、迅速、灵敏的检测大鼠脑脊液和血浆中西达本胺浓度的分析方法,并成功应用于大鼠药动学研究,静脉注射西达本胺能够有效地透过血脑屏障,可以实现直接作用于脑部肿瘤的目的。

乌药调节胆固醇逆转运抗高脂血症作用研究

明确乌药醇提物对高脂饮食诱导的高脂血症模型大鼠血脂水平的改善作用,初步从胆固醇逆转运角度探讨其可能的作用机制。SD大鼠分为正常组、模型组、阿托伐他汀组以及乌药醇提物(LREE)高、中、低剂量组,除正常组外,其余各组采用高脂饮食喂养建立高脂血症大鼠模型;造模成功后,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予纯水,连续5周。全自动生化仪测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-c)水平及丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;酶比色法测定大鼠肝脏TC,TG,总胆汁酸(total bile acid,TBA)和粪便中TC,TBA含量;HE染色法观察肝组织病变;免疫组化法检测小肠三磷酸结合盒转运体G8(ATP-binding cassette G8,ABCG8)表达;Western blot和免疫组化法检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ/α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma/aerfa,PPARγ/α)、肝X受体-α(liver X receptor-α,LXRα)、三磷酸结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)、清道夫受体B类Ⅰ型(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)表达。结果显示,LREE能有效降低血清和肝脏TC,TG水平及血清LDL-c水平和AST活性,提高HDL-c水平,但对ALT活性和肝指数未有显著性改善;HE染色结果表明,LREE能够减轻肝脏脂质沉积,减少炎性细胞浸润;此外,LREE能增加粪便TC和TBA含量,上调小肠ABCG8和肝脏PPARγ/α,SR-BⅠ,LXRα,ABCA1蛋白表达。提示,LREE对高脂饮食诱导的高脂血症具有改善作用,该作用可能与调节胆固醇逆转运(RCT),促进胆固醇向肝脏内转运及向胆汁酸的转化,以及胆固醇和胆汁酸的肠道排泄有关,RCT可能是LREE抗高脂血症的潜在机制。