基于BOPPPS教学模式的医学院校动物生物学课堂教学探索

杭州医学院生物技术专业教学团队经过两年的动物生物学课堂教学探索和实践,在紧密联系医学院校生物技术专业人才培养方案的基础上,改革传统的“以教为主”的教学模式,引入“以学为主”的BOPPPS教学模式,极大地调动了课堂教学中学生的积极性和主动性,提高了医学院校动物生物学课程课堂教学的有效性和教学质量,提升了人才培养质量。

基于课程思政融入的线上线下混合式教学应用与评价——以临床血液学检验技术课程为例

医学检验技术专业旨在培养具备良好的职业素养和职业能力,掌握医学检验基本理论,有扎实的专业技能和一定创新能力的高素质应用型医学检验技术人才。习近平总书记在2016年召开的全国高校思想政治工作会议上,强调高校思想政治工作关系高校培养什么样的人、如何培养人以及为谁培养人的根本问题,指出要把思想政治工作贯穿教育教学全过程^([1])。这意味着将高校思想政治教育从思想政治理论课延伸拓展到所有课程中。

3D生物打印前列腺癌模型用于唑来膦酸药敏试验

目的 探讨3D生物打印模型用于唑来膦酸对PC-3前列腺癌细胞药敏试验的可行性。方法 使用3D生物打印技术构建PC-3前列腺癌3D模型,采用唑来膦酸进行药敏试验。使用钙黄绿素-AM/碘化丙啶溶液对前列腺癌模型进行Live/Dead染色测试支架内前列腺癌细胞存活生长情况。采用ELISA法测定培养上清液中人基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、人基质金属蛋白酶9 (MMP-9)蛋白分泌变化。并均与2D培养条件下进行比较。结果 通过3D生物打印技术构建PC-3前列腺癌模型,细胞多层包埋在海藻酸钠/明胶支架内。结果表明,随着加入唑来膦酸浓度的升高,PC-3细胞存活率呈下降趋势。在3D培养条件下对PC-3前列腺癌细胞的整体药物敏感性显著低于2D培养。即与2D培养相比,随着唑来膦酸浓度的升高,3D细胞培养的整体耐药性显著增加,细胞培养上清液MMP-2和MMP-9蛋白分泌的下降速度明显更慢。结论 相比于2D培养,使用3D生物打印技术构建的前列腺癌模型,可能更好地模拟体内前列腺癌肿瘤微环境,以提高临床前药物研究的预测能力,改善药物临床转化。

艰难梭菌毒素B2型蛋白重组表达及活性分析

目的 构建艰难梭菌高毒力株2型毒素B(TcdB2)的枯草芽胞杆菌工程株,获得高效表达的生物活性TcdB2蛋白。方法 以ST1/RT027型菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得TcdB2全长基因片段,构建到PHT01载体中,转化枯草芽胞杆菌WB800N菌株,进行原核表达获得TcdB2全长蛋白,进一步通过细胞毒性试验验证重组TcdB2的生物活性。结果 成功构建了高效表达TcdB2的枯草芽胞杆菌工程株,并获得具有细胞毒性的重组蛋白TcdB2。结论 具有生物活性的重组TcdB2蛋白,为进一步研究艰难梭菌高毒力株的致病机制和作为疫苗候选靶标等奠定了基础。

免疫检查点CD276蛋白参与肿瘤发生发展作用机制的研究进展

免疫检查点CD276,B7分子家族成员,可与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)等信号通路相互作用,调控肿瘤能量代谢,抑制免疫细胞抗肿瘤活性,促肿瘤血管新生,帮助肿瘤免疫逃逸与肿瘤转移。CD276与肿瘤干性及化学治疗耐药密切相关。迄今若干以CD276为靶点的抗体类药物及细胞治疗方法已经进入临床试验。CD276还可作为肿瘤标志物用于肿瘤的诊断和分型。CD276的调控机制有非编码RNA、转录因子介导的转录水平调控,甲基化、糖基化等介导的翻译后修饰水平调控。

3D打印乳腺癌模型及白藜芦醇与华蟾素药敏试验

目的:探讨三维(3D)生物打印MDA-MB-231乳腺癌细胞模型及其用于2种中药白藜芦醇与华蟾素药敏试验的可行性。方法:通过3D生物打印构建3D乳腺癌模型,采用该模型进行白藜芦醇、华蟾素药敏试验,并与二维(2D)培养比较。结果:在3D/2D培养下,随着这2种中药浓度的升高,乳腺癌细胞存活率成下降趋势;这2种中药在3D培养下对乳腺癌细胞的药敏性均显著低于2D培养。结论:使用3D生物打印技术构建的3D乳腺癌模型,可能更好地模拟体内乳腺癌肿瘤微环境,以提高临床前药物的预测能力,改善药物临床转化。

肝再生磷酸酶2的促癌机制及其抑制剂的研究进展

肝再生磷酸酶2(phosphatase of regenerating liver 2,PRL2)属于肝再生磷酸酶家族,在人体各个组织器官中广泛表达。PRL2异常高表达与肿瘤的发生发展和临床预后密切相关,是多种癌症的潜在治疗靶点。研究表明PRL2通过两种机制发挥促癌作用:一是依赖假磷酸酶活性,主要与镁离子转运体CNNM3结合;二是凭借磷酸酶活性,使底物分子PTEN等去磷酸化。因此,阻断PRL2与CNNM3结合或抑制PRL2磷酸酶活性有望成为新的抗癌策略。现综述了PRL2与不同癌症的联系、其促癌分子机制和抑制剂的最新研究进展。

WBSCR22基因调控人恶性肿瘤细胞铁死亡的研究

目的研究WBSCR22是否参与调控细胞铁死亡。方法设计合成靶向人WBSCR22基因的siRNA(siWBSCR22),瞬时转染敲低WBSCR22 mRNA;RT-qPCR、Western blotting分别检测WBSCR22 mRNA、蛋白表达水平;铁死亡诱导剂Erastin、RSL3单独或联合抗氧化剂NAC、坏死抑制剂NSA、凋亡抑制剂ZVAD-FMK、自噬抑制剂3-MA作用于人结直肠癌细胞系HCT116和RKO、人肺癌细胞系H460、人肝癌细胞系SMMC7721,CCK8法检测细胞死亡率;丙二醛法、菲罗嗪法分别检测细胞脂质过氧化水平、Fe^(2+)浓度。结果siWBSCR22瞬时转染显著降低WBSCR22 mRNA及蛋白水平;WBSCR22敲低显著促进Erastin、RSL3诱导的HCT116、RKO、H460、SMMC7721细胞铁死亡;加入NAC后显著降低Erastin、RSL3诱导的WBSCR22敲低细胞铁死亡,而加入NSA、ZVAD-FMK、3-MA对Erastin、RSL3诱导的WBSCR22敲低细胞铁死亡无影响;Erastin、RSL3诱导后细胞内的Fe^(2+)浓度无明显变化,脂质过氧化水平显著增加。结论WBSCR22基因参与调控肿瘤细胞铁死亡。

艰难梭菌疫苗临床试验的研究现状及挑战

艰难梭菌(Clostridiodes difficile,C.difficile)是全球最常见引起抗生素相关腹泻(antibiotic-associated diarrhea,ADD)的病因。近年来,随着具有高抗药性和高毒力菌株的出现,造成多次艰难梭菌感染全球流行。艰难梭菌感染发病率、复发率和死亡率在全球范围内呈上升趋势,为临床治疗带来极大挑战。致病性菌株主要产生两种同源性糖基化毒素A和B,会造成从腹泻到高致死的中毒型巨结肠等症状。鉴于艰难梭菌感染造成的恶性后果,疾病的预防仍然是值得探索的重要途径。目前尚无获得使用许可的艰难梭菌疫苗,因此本文对艰难梭菌疫苗临床试验的研究现状及面临的挑战作一综述。

基于流感病毒M2蛋白胞外区的双层蛋白质纳米颗粒的制备及免疫学效果评价

目的通过两步脱溶剂-交联法制备携带流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)、6个串联重复的M2蛋白胞外域(6M2e)和鞭毛蛋白(Flg)的双层蛋白质纳米颗粒, 探究其在小鼠体内的免疫效果。方法采用脱溶剂-交联法将融合蛋白FljB-6M2e-△D2D3-HAα和HAα-6M2e制备成双层蛋白质纳米颗粒。通过透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪进行物理表征后评估其细胞毒性。免疫小鼠后采用ELISA方法进行特异性抗体效价测定, ELISPOT检测细胞免疫水平, CCK-8法检测脾细胞的增殖情况。结果本研究成功制备了粒径为(130.03±2.96) nm的双层蛋白质纳米颗粒FljB-6M2e-△D2D3-HAα/ HAα-6M2e。免疫小鼠后产生的抗M2e-IgG抗体效价为1∶25 600, 抗HAα-IgG抗体效价为1∶12 800, 高于对照组小鼠, 差异均具有统计学意义(t=3.051和3.780, P=0.038和0.019)。与对照组相比, 多肽刺激可以使小鼠脾细胞显著增殖[M2e刺激增殖率:(154.18±2.34)%, HAα刺激增殖率:(151.51±1.56)%](t=12.942和24.591, P均<0.001), 并且诱导产生分泌更多IL-4和IFN-γ的淋巴细胞(M2e刺激:t=5.477和6.571, P=0.005和0.013;HAα刺激:t=9.239和7.671, P=0.001和0.013)。多种细胞因子的mRNA水平显著升高, IFN-γ和IL-4的转录水平均高于对照组(IFN-γ:t=13.253和20.847, P均<0.001;IL-4 :t=6.032和4.824, P=0.004和0.009)。结论本研究所制备的双层蛋白质纳米颗粒可以刺激小鼠产生较高水平的体液和细胞免疫应答, 为开发多表位流感通用疫苗提供了有效依据。

流感病毒血凝素茎部螺旋区和串联重复M2蛋白胞外区域融合蛋白的免疫效果研究

目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)和6个串联重复M2蛋白胞外区域(6M2e)的融合蛋白的表达和制备方法,并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列,将HAα和6M2e插入到原高变区位点,构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定,并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价,实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平,CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e,蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导10 h,通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102400,且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33,P=0.774;t=7.60,P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升高,其中实验组IFN-γ转录水平为38.74±3.65,蛋白水平为(66.03±3.31)pg/mL,高于对照组(t=21.33,P=0.003;t=10.21,P<0.01)。结论成功制备了高纯度的融合蛋白FljBΔD2D3-HAα-6M2e,能有效刺激小鼠产生抗M2e-IgG和抗HAα-IgG,具有良好的免疫效果,为流感疫苗候选物研发奠定了基础。

应用CRISPR-Cas9技术构建NFIB敲除的膀胱癌细胞株及其转录组学分析

为了探究NFIB(nuclear factor I/B)基因在膀胱癌中的生物学功能,该研究应用CRISPRCas9技术构建NFIB敲除的膀胱癌细胞株,然后通过转录组学技术分析对照细胞NFIB-NC与NFIB敲除细胞株NFIB-KO-I和NFIB-KO-II之间的差异表达基因,同时对其进行KEGG富集分析,并通过Western blot和qRT-PCR技术对转录组学结果进行验证。结果显示,与对照细胞NFIB-NC相比,NFIB敲除细胞株NFIB-KO-I中有134个差异表达基因,其中上调基因62个,下调基因72个;NFIB-KO-II中有131个差异表达基因,表达上调和下调的基因分别为50个和81个。KEGG分析结果显示,差异表达基因与PI3K-AKT信号通路密切相关,Western blot结果证实敲除NFIB基因后,膀胱癌细胞中的p-AKT水平显著上调。qRT-PCR结果表明,敲除NFIB后,ITGA4基因表达水平上调,TNC和ANGPT4基因表达水平下调。该研究初步揭示了NFIB基因在膀胱癌细胞中调控的分子信号通路,也为后续研究NFIB基因介导膀胱癌发生发展的分子机制提供了依据。