3D打印肝肿瘤模型及其白术和薏米药敏试验

目的:探讨三维(3D)生物打印肝肿瘤模型用于中药药敏试验的可行性。方法:3D打印SMMC-7721肝肿瘤模型,用水提醇沉法提取白术和薏米醇提液,分别进行3D细胞模型药敏试验。使用钙黄绿素-AM/碘化丙啶检测细胞活死状况,并与二维(2D)培养药敏试验比较。结果:在3D肿瘤模型下,SMMC-7721细胞倾向于成球而不是2D培养中的单层细胞,二种中药均采用方差分析进行2D与3D存活率比较,P值均<0.000 1。表明3D肝肿瘤细胞培养对这二种中药的敏感性均显著低于2D培养。结论:3D肿瘤模型是一种潜在的非常有用的药物分析工具,能更真实地模拟体内肿瘤生长的微环境,有助于确认中药药敏试验的可靠性。可以在细胞实验与临床实验的联系中发挥作用,促进候选中药的药物潜力发展。

gD糖蛋白基因表达质粒pcDNA3Kan-gD的构建及其在Hela细胞中的表达检测

目的利用半定量RT-PCR技术及免疫荧光技术分析构建的单纯疱疹病毒gD糖蛋白基因真核表达质粒在Hela细胞中的瞬时表达情况。方法构建并提纯重组的真核表达质粒pcDNA3Kan-gD,转染培养的Hela细胞,采用半定量RT-PCR技术及免疫荧光技术检测外来转染的gD基因在Hela细胞中的瞬时表达。结果转染了pcDNA3Kan-gD重组质粒的Hela细胞RNA中能够扩增出gD基因的特异性条带,免疫荧光技术分析结果显示,转染了pcDNA3Kan-gD重组质粒的Hela细胞中能检测到特异性绿色荧光。结论真核表达质粒pcDNA3Kan-gD能够在Hela细胞中瞬时表达,有可能成为抗单纯疱疹病毒DNA疫苗候选物之一。

板蓝根多糖作为疫苗佐剂的初步研究进展

板蓝根是清热解毒的常用中药,临床常用于治疗病毒及细菌感染,其多糖是重要的活性成分之一。研究表明,板蓝根多糖具有显著的佐剂作用,并且不良反应少,有望成为未来疫苗佐剂的较佳选择。本文介绍了板蓝根多糖的提取和纯化方法、结构与组成的研究进展,并对板蓝根多糖的佐剂机制和作为疫苗佐剂的动物实验研究方面进行综述,为未来新型多糖佐剂的应用提供理论基础。

3D生物打印乳腺癌肿瘤模型及阿霉素药敏试验

目的探讨3D生物打印技术构建的乳腺癌模型用于阿霉素药敏试验的可行性。方法通过3D生物打印技术构建MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞3D水凝胶乳腺癌模型,分别采用CCK-8法和Live/Dead染色法检测不同浓度阿霉素对2D/3D乳腺癌细胞增殖作用的影响并进行比较。结果2D培养中形成单层片状细胞。而3D打印的乳腺癌模型中MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞显示多层结构,细胞多数呈圆形、或梭形和铺展状。MDA-MB-231细胞对阿霉素的耐药性高于MCF-7细胞。3D培养的MCF-7、MDA-MB-231细胞比2D培养对阿霉素的耐药性显著更高。结论3D乳腺癌模型可以在体外更有效、更准确地评估抗癌药物的疗效,可在动物模型或临床试验前为改进和优化药物筛选系统提供有价值的信息。

甲型流感病毒致肺损伤的机制分析

目的运用生物信息学方法探讨甲型流感病毒所致肺损伤的可能机制。方法从Gene Expression Ominbus(GEO)数据库中选择基因表达谱GSE57455、GSE63786和GSE64800,通过GEO2R工具在线分析,筛选出差异表达基因(DEGs),基于STRING构建蛋白互作网络图,筛选出显著模块;并对获取的DEGs进行Gene Ontology(GO)分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)通路富集分析。通过Cystoscape软件筛选出具有高度连接性的关键基因,并构建生物学功能图。结果筛选得到119个交集DEGs,其中上调基因有106个,下调基因13个。GO分析显示,DEGs显著富集于免疫应答、细胞分裂等生物学过程中;显著富集于细胞外间隙、胞外区部分等细胞组成上;显著富集于趋化因子活性、细胞因子受体结合等分子功能上。KEGG通路富集显示,DEGs显著富集于细胞因子及受体相互作用信号通路、趋化因子等信号通路。同时,共筛选得到7个关键基因:FIGNL1、GBP5、ICOS、ARG1、IRF7、CYSLTR1和SLMAF8,其富集作用主要在免疫应答、精氨酸代谢、B细胞反应等生物学功能。结论FIGNL1介导的肺组织细胞受损、IRF7和GBP5介导的Ⅰ型IFN反应、ARG1介导的精氨酸代谢以及ICOS、CYSLTR1和SLAMF8介导的趋化因子和炎性因子的活化与甲型流感病毒所导致的肺损伤密切相关。

甲型流感病毒血凝素糖基化与宿主固有免疫

流感是一种严重危害公共健康的人畜共患呼吸道传染疾病,血凝素为甲型流感病毒包膜最主要的糖蛋白,病毒血凝素末端修饰的甘露聚糖可作为多种固有免疫系统识别的靶点。本文简述甲型流感病毒血凝素蛋白糖基化在固有免疫系统成分识别和抗病毒方面所起的作用。

H7N9禽流感病毒血凝素线性B细胞抗原表位单克隆抗体的制备和鉴定

目的研制用于H7N9禽流感病毒诊断的血凝素线性B细胞抗原表位单克隆抗体。方法采用H7N9禽流感病毒血凝素特异性线性B细胞抗原表位免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术和间接ELISA法筛选、鉴定获得稳定分泌抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过SDS-PAGE、间接ELISA和斑点免疫印迹技术鉴定其亚型、效价、纯度等生物学特征。结果共获得2株单克隆抗体(7C8H8和8E9E2),其中7C8H8抗体亚类为IgG2a,腹水抗体效价>1∶512000,且可以特异性结合H7N9禽流感病毒血凝素。8E9E2仅具有较低的H7N9禽流感病毒血凝素蛋白结合力。结论获得1株可分泌高效价、高特异性的抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株7C8H8。