混合模式扩张床吸附从牛乳清中分离乳铁蛋白

采用混合模式扩张床吸附介质Streamline Direct HST,直接从牛乳清中分离乳铁蛋白.考察了新型介质的扩张床膨胀特性和流体混合性能,确定合适的操作流速,选定膨胀率为2,可以满足高处理量和床层稳定性的要求.通过静态吸附实验,考察了pH值和离子强度对乳铁蛋白吸附的影响.结果表明,该介质对乳铁蛋白的吸附容量较大,约110 mg/g介质,具有一定的耐盐特性;改变离子强度不能实现有效洗脱,改变pH值是洗脱的合适途径;进行了扩张床吸附分离,采用pH值阶跃洗脱,从牛乳清中分离得到不同乳清分离蛋白组分,20 mmol/L NaOH洗脱下得到乳铁蛋白,收率为87.8%,纯化因子高达10.5,分离过程体现了扩张床吸附的集成化优势.

蛋白质水力学半径的测定及用于蛋白质变性过程的实时监控

采用纳米粒度分析仪Zetasizer Nano测定了牛血清白蛋白(BSA)的水力学半径,考察了pH、离子强度、表面活性剂等的影响,并用于BSA热变性和脲变性过程的实时跟踪。随pH增大,BSA水力学半径呈"U"形变化趋势;酸性条件下,分子膨胀,随着盐浓度升高,BSA分子先小幅减小后显著增大;中性pH范围,离子强度对蛋白质分子尺寸影响很小,蛋白质性质相对稳定。离子型表面活性剂在蛋白质表面吸附,从而影响BSA水力学半径。通过水力学半径的测量实时跟踪蛋白质变性过程的分子变化,发现增加热变性中离子强度可加快变性速率,SDS加入增大了BSA变性温度Tm。脲在促使BSA分子扩张的同时,对链伸展有抑制作用;在DTT存在下,BSA的水力学半径随着时间变化逐渐增大。结果表明,简便的水力学半径测量可以用于蛋白质大小的表征,并可实时跟踪蛋白变性过程的分子尺度变化。