白介素-1β诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究

目的通过白介素-1β(IL-1β)诱导肾小管上皮细胞转化为肾间充质细胞的研究,探讨炎症因子促进肾间质纤维化的作用机制。方法用IL-1β分别刺激小鼠肾小管上皮细胞3天、4天、5天,提取细胞中的蛋白质,采用Western-blotting测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白水平;用IL-1β分别刺激肾小管上皮细胞12h、36h和60h,提取细胞中的总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定α-SMA、Vimentin基因表达水平。结果IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加,并随着刺激的时间的延长,两种骨架蛋白的蛋白上皮亦增高;同时IL-1β可上调肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin的基因表达,也有时间依赖性。10ng/mlIL-1β可显著抑制肾小管上皮细胞增生。结论炎症因子IL-1β可通过上调肾小管上皮细胞两种骨架蛋白的蛋白合成和基因表达,诱导肾小管上皮细胞向肾间充质细胞表型发生转化,从而在肾小管间质纤维化发生发展过程中发挥作用。

加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾小球足细胞增殖影响的实验研究

目的：观察加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾足细胞增殖的影响。方法：用不同浓度低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导小鼠肾足细胞增殖,再用不同浓度加减下瘀血汤及强的松龙、缬沙坦的含药血清进行刺激干预,然后用四唑盐(MIT)法检测足细胞增殖。结果：25μml浓度LDL与100μg/ml OX-LDL刺激足细胞增殖达峰值,加减下瘀血汤的高、低剂量,强的松龙的中、高剂量及缬沙坦的中、高剂量含药血清有明显抑制足细胞增殖作用。结论：①LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增殖。②加减下瘀血汤、可抑制脂质诱导的足细胞增殖现象。

糖捕获技术在IgA肾病血清学诊断中的初步应用

目的采用糖捕获法检测IgA肾病糖链异常IgA1,分析其在IgA肾病中的诊断价值。方法病理确诊为IgA肾病36例设为IgA肾病病,41例病理确诊的其他肾病患者设为非IgA肾病组。定量检测两组糖链异常IgA含量。结果 IgA肾病组血清中糖链IgA含量异常升高率明显高于非IgA肾病组,差异有统计学意义。血清糖链IgA检测的灵敏度为69.4%,特异度90.2%,符合率80.5%。结论应用糖捕获技术检测IgA肾病患者中糖链异常IgA,灵敏度与特异度高,操作方法简单,成本较低。

IgA肾病患者肾小管中P-gp表达与肾脏病理及肾功能损害的相关性

目的通过对IgA肾病肾小管中P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表达与肾脏病理损害相关性的研究，探讨肾小管功能及其损伤在IgA肾病进展中的作用的关系。方法以经肾活检诊断的188例原发性IgA肾病患者为研究对象。肾活检前检查患者24h尿蛋白（24hUP）、肌酐清除率（Ccr）、血肌（Scr）、尿素氮（BuN）等。肾脏病理损害主要参考Lee分级、Katafuchi半定量积分标准和Andreoli病理活动性／慢性指数评分标准。采用免疫组化方法测定肾组织中P-gP表达，统计分析肾小管P-gP蛋白表达与肾脏病理损害积分以及患者肾功能的相关性。结果IgA肾病肾小管中P-gP表达与肾脏病理损害Lee分级和Katafuchi半定量积分均呈显著负相关，P-gP与肾小管问质积分的相关系数明显大于与肾小球、肾血管等组织学积分的相关系数。肾小管中P-gP表达强度与Ccr呈显著正相关，与24hUP、Scr、BuN等呈显著负相关。结论IgA肾病患者P-gP介导的肾小管转运功能可能参与对肾功能的保护，减缓肾脏病理损害的进展。

新月体肾炎合并IgG4相关性间质性肾炎1例

患者,女,72岁,因“双下肢水肿3月余”于2022年2月8日入院。患者3月余前无明显诱因出现双下肢水肿,进行性加重。1周前患者出现尿量显著减少,小于400 ml/d,伴乏力,胸闷气急,活动后加重,为求进一步诊治收住入院。既往史:高血压病史20余年,平素硝苯地平控释片30 mg每日2次降压,血压控制尚可,否认其它重大内科疾病史、家族遗传病史。体格检查:血压113/68 mmHg,神清,精神软,颜面部浮肿,眼睑苍白.

雷公藤多苷对单侧输尿管结扎小鼠肾小管间质纤维化和炎性损伤的影响

目的通过雷公藤多苷对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、细胞间黏附分子(Intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)、单核细胞趋化因子(Monocyte chem oattractant protein1,MCP-1)表达的影响,探讨其防治肾间质纤维化作用及其机理。方法采用小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型,用雷公藤多苷进行干预,用血管紧张素受体抑制剂蒙诺作为对照。肾脏病理用HE和MASSON染色;肾组织α-SMA表达采用免疫组化;ICAM-1蛋白质表达采用Western blot方法检测;MCP-1基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及肾组织α-SMA的表达较假手术组显著增高,肾小管间质中炎细胞浸润亦较假手术组明显增加;雷公藤多苷各治疗组肾间质纤维化程度、α-SMA和ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达均显著低于模型组;蒙诺治疗亦可显著降低肾间质纤维化程度和肾组织α-SMA的表达,但对于炎细胞浸润和炎症因子的抑制作用不如雷公藤多苷显著,而且未见其抑制ICAM-1表达的作用。结论雷公藤多苷可显著抑制肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚,其机制可能与其抑制肾组织炎症因子的表达及炎细胞浸润有关。

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞Activin A和TGF-β1 mRNA表达的调节作用

目的:探讨复方积雪草对炎症因子刺激下肾小管上皮细胞生物活性改变的干预作用。方法:实验用IL-1β刺激肾小管上皮细胞,用不同剂量复方积雪草含药血清进行干预。用福辛普利(血管紧张素转换酶拮抗剂)含药血清作为对照。TGF-β1、Activin A和Activin A受体ActRⅠ等基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:IL-1β诱导可使肾小管上皮细胞TGF-β1和Activin A的基因表达较正常对照细胞显著增高。各浓度复方积雪草含药血清干预均可下调Activin A及其受体的基因表达,但仅高浓度复方积雪草含药血清对TGF-β1的基因表达有显著下调作用。结论:复方积雪草对肾小管上皮细胞Activin A及其受体Act RⅠ的基因表达有下调作用,可能是其抑制炎症因子诱导的肾小管上皮细胞发生细胞活性改变,降低肾小管间质进一步炎症损伤的重要机制之一。福辛普利亦有相似作用,但机制可能不完全相同。

低剂量甲基强的松龙诱导淋巴细胞糖皮质激素耐药与P-糖蛋白关系的研究

目的研究低剂量甲基强的松龙(糖皮质激素)诱导淋巴细胞糖皮质激素耐药与P-糖蛋白的关系。方法取健康人外周血,分离纯化淋巴细胞,予小剂量(2μg·mL-1)甲基强的松龙刺激72h为耐药组,对照组常规培养;用流式细胞术检测P-gp表达;MTT法检测激素耐药倍数;甲基强的松龙(200μg.mL-1)刺激2组细胞24h,用流式细胞术检测AnnexinⅤ(%)并分析P-gp与其相关性;耐药组,用5μg·mL-1维拉帕米联合甲基强的松龙(200μg·mL-1)刺激,检测AnnexinⅤ(%)。结果小剂量甲基强的松龙诱导后的淋巴细胞P-gp表达,耐药组较对照组显著升高,为对照组的(2.89±0.21)倍;甲基强的松龙刺激后,耐药组细胞凋亡率显著低于正常组,与AnnexinⅤ呈显著负相关;维拉帕米干预可显著增加甲基强的松龙诱导细胞凋亡的敏感性。结论 P-gp介导耐药可能是导致临床治疗后期的耐药或药物依赖的重要机制之一。

青藤碱对肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1基因表达的影响

目的:探讨青藤碱对体外培养的肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达的干预作用。方法:体外培养小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),分为正常对照组、模型组和干预组。模型组和干预组细胞予以IL-1β(10ng/ml)刺激,干预组细胞同时加不同浓度的青藤碱,继续培养48h,RT-PCR检测细胞MCP-1和ICAM-1 mRMA的表达,Quangtity One 1-D分析软件分析积分光密度,计算MCP-1和ICAM-1电泳条带的积分光密度和GAPDH积分光密度的比值,用SPSS统计软件进行统计分析。结果:IL-1β可显著增强肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-I mRNA的表达,青藤碱各个浓度均能显著下调MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达,并呈一定的剂量依赖性。结论:青藤碱能显著下调肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1的mRNA表达,提示其具有防治肾小管肾间质炎症损伤作用。

抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾间质细胞表型转化的影响

目的:通过抗风湿中药青风藤的提取物青藤碱对单侧榆尿管结扎(UUO)小鼠模型肾间质细胞表型转化的影响,探讨其治肾作用及机理。方法:采用小鼠UUO模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素转化酶抑制剂蒙诺作为对照。Masson染色观察肾组织病理及间质纤维化;肾组织中蛋白质表达采用免疫组化和Western-blotting方法检测;基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:UUO模型组和青藤碱、蒙诺治疗组小鼠肾间质纤堆化程度以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高,而各剂量青藤碱和蒙诺均可显著降低上述指标,并呈剂量依赖性。中、高剂量的青藤碱对于波形蛋白的影响显著优于蒙诺。结论:青藤碱可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化,提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。

青藤碱对肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响

目的:探讨青藤碱干预炎症介质诱导的肾小管上皮细胞转分化及其相关基因的表达作用。方法:IL-1β(10ng/ml)诱导体外培养的小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),同时用青藤碱(10μmol/L、100μmol/L、500μmol/L和1000μmol/L)进行干预。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)和纤连蛋白(Fn)的基因表达。结果:结果:IL-1β能够显著诱导肾小管上皮细胞α-SMA的基因表达上调,同时伴随着TGF-β和Fn的基因表达显著上调;而青藤碱各个浓度均具有显著抑制肾小管上皮细胞转分化作用,TGF-β和Fn的基因表达也随之下调。结论:青藤碱可显著抑制IL-1β刺激下的肾小管上皮细胞转分化标志物和细胞外基质的基因表达,其机制可能与部分下调TGF-β的表达有关。

多毛孢菌菌粉含药血清对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子基因表达的影响

目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)测定纤维生长因子mRNA的表达。结果 :研究发现多毛孢菌水提物及醇提物均可显著增高LLCPK细胞OD值 ;庆大霉素刺激的肾小管上皮细胞纤维生长因子mRNA的表达显著增高 ,而经多毛孢菌菌粉水提物和醇提物干预后 ,纤维生长因子mRNA的表达显著下降。结论 :多毛孢菌菌粉可以促进LLCPK细胞增殖和拮抗庆大霉素对细胞的损伤 。

青藤碱对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎症因子表达的干预作用

目的:通过抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、炎症介质细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)、单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)表达的影响,探讨其防治肾间质纤维化作用及其机制。方法:实验采用小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素受体抑制剂蒙诺作为对照。肾脏病理用HE和Masson染色;肾组织α-SMA表达采用免疫组化;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及肾组织α-SMA的表达较假手术组显著增高,肾小管间质中炎细胞浸润亦较假手术组显著增强;青藤碱各治疗组肾间质纤维化程度、α-SMA和ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达均显著低于模型组;蒙诺治疗亦可显著降低肾间质纤维化程度和肾组织α-SMA的表达,但对于炎细胞浸润和炎症因子抑制作用显著较青藤碱弱。而且未见其具有抑制ICAM-1表达的作用。结论:抗风湿药青藤碱可显著抑制肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚,可能与其显著抑制肾组织炎症因子的表达及炎细胞浸润有关。

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞表型保护作用的研究

目的:探讨复方积雪草含药血清对炎症介质诱导的肾小管上皮细胞表型转化的干预作用。方法:用IL-1β(10ng/ml)刺激原代小鼠肾小管上皮细胞,并用低、中、高浓度复方积雪草含药血清进行干预。应用MTT法测定复方积雪草含药血清的细胞毒性;Western-blottlng和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白和基因表达。结果:IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin蛋白质合成增加,基因表达亦显著上调;各个浓度的复方积雪草含药血清干预均可显著降低α-SMA、Vimentin蛋白质、基因的表达。结论:复方积雪草含药血清可抑制免疫炎症因子诱导的肾小管上皮细胞表型转化,从而在防治肾小管间质纤维化中发挥其作用。

多毛孢菌菌粉抑制庆大霉素诱导的猪肾小管上皮细胞凋亡及纤维化生长因子的表达

目的 :研究人工培养的多毛孢菌菌粉水提物对庆大霉素诱导的近端肾小管上皮细胞损伤、凋亡的保护作用及对碱性纤维化生长因子 (basicfibro blastgrowthfactor,bFGF)mRNA表达的影响。方法 :将猪近端肾小管上皮细胞株 (LLCPK)复苏培养 ,分成正常对照组、庆大霉素组和多毛孢菌组 ,除对照组外 ,用庆大霉素刺激 ,多毛孢菌组同时加多毛孢菌菌粉水提物干预。以MTT法观测存活细胞数 ;并测定细胞上清液N 乙酰 β D 氨基糖苷酶 (NAG)浓度 ;荧光标记细胞表面AnnexinⅤ ,以细胞流式法测定其表达 ;RT PCR检测细胞碱性纤维化生长因子mRNA的表达。结果与结论 :庆大霉素可引起细胞存活率的显著降低 ,N 乙酰 β D 氨基糖苷酶浓度显著增高 ;并提高细胞AnnexinV的表达 ,即诱导白细胞调亡 ,和诱导LLCPK细胞bFGFmRNA的表达。多毛孢菌菌粉水提物能提高肾小管上皮细胞LLCPK存活率 ,降低细胞调亡数 。

葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白表达的影响及降低激素耐药的作用

目的:探讨葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响及降低糖皮质激素耐药的作用,为提高糖皮质激素耐药患者的临床疗效提供新的思路和方法。方法:取健康志愿者静脉血10ml,密度梯度离心法分离淋巴细胞,贴壁培养去除单核细胞。予小剂量甲基泼尼松龙(2μg/ml)诱导细胞耐药,用非细胞毒浓度(80μg/ml)的葛根素干预,MTT试验检测激素耐药倍数和葛根素逆转倍数,流式细胞术检测淋巴细胞P-gp和200μg/ml甲基泼尼松龙刺激24h后AnnexinⅤ。结果:小剂量甲基泼尼松龙刺激72h可诱导淋巴细胞P-gp显著升高,甲基泼尼松龙耐药倍数为2.45±0.42。葛根素干预可显著降低耐药细胞P-gp,使甲基泼尼松龙对细胞的半数抑制率IC50显著降低,对激素耐药的逆转倍数为1.55±0.30;葛根素干预可使甲基泼尼松龙诱导细胞的AnnexinⅤ显著增高。葛根素独立干预无显著诱导细胞凋亡作用。结论:葛根素干预可显著降低淋巴细胞糖皮质激素耐药性,显著增强激素诱导淋巴细胞凋亡的作用。葛根素显著下调P-gp表达的作用可能是其降低激素耐药的重要机制之一。