染色体微阵列联合核型分析在NT增厚胎儿的产前诊断研究

目的应用染色体微阵列分析联合核型分析对颈项透明层(NT)增厚胎儿进行产前诊断,了解病因。方法选取2015年2月至2016年12月孕11~13+6周在杭州市妇产科医院产前诊断中心检测胎儿颈项透明层增厚患者(NT≥2.5mm)51例,行绒毛穿刺/羊水穿刺获取胎儿标本进行染色体核型及单核苷酸多态性微阵列(SNP)检测,联合临床资料分析结果。结果 51例标本中染色体核型异常11例,阳性率21.57%,SNP异常20例,阳性率39.22%。SNP异常而核型检测正常10例,其中致病性拷贝数变异(CNV)3例,临床意义不明的CNV 5例,可能良性CNV 2例。高龄孕妇与非高龄孕妇SNP结果差异无统计学意义(χ~2=0.84,P>0.05)。颈项透明层增厚合并超声其他异常、终止妊娠胎儿的SNP异常率均升高,差异有统计学意义(χ~2值分别为9.28,24.32,均P<0.05)。结论对NT异常胎儿的产前诊断采用染色体核型+染色体微阵列检测模式,能覆盖染色体微缺失微重复,对产前诊断具有重要意义。

杭州市5279例新生儿耳聋基因突变筛查及突变携带者随访结果分析

目的了解杭州市新生儿常见耳聋基因突变携带率和突变类型,探讨听力-耳聋基因联合筛查在先天性耳聋早期诊断与干预中的作用。方法采集2018年6月至2019年12月在杭州市妇产科医院出生的5279例新生儿足底血,提取DNA并应用微阵列芯片杂交法检测4个常见耳聋基因(GJB2、GJB3、SCL26A4、线粒体12SrRNA)15个突变位点,关联新生儿听力筛查结果比较相关性,对耳聋基因突变新生儿父母行耳聋基因筛查验证,评估遗传因素的作用,对GJB2和SLC26A4耳聋基因突变者行基因测序诊断以确定基因型,随访耳聋基因突变和听力筛查未通过新生儿听力诊断和干预措施。结果5279例耳聋基因突变筛查新生儿中,突变280例,突变率为5.30%。4个耳聋基因中,GJB2突变率最高,为3.05%,其中纯合和复合杂合突变3例,杂合突变158例;其余由高到低分别为SLC26A4杂合突变84例,突变率为1.59%;GJB3杂合突变18例,突变率为0.34%;线粒体12SrRNA均质突变14例,突变率为0.27%;双基因杂合突变3例,突变率为0.06%;GJB2基因突变中c.235delC位点突变最多,SLC26A4基因中c.919-2A>G位点突变最多。在耳聋基因突变携带者中,150例新生儿父母进行耳聋基因突变筛查验证,有135例新生儿突变来源于无表型的父母一方,占90.0%。在新生儿听力筛查中,耳聋基因未突变者未通过率为0.50%(25/4999);耳聋基因突变携带者未通过率为1.79%(5/280),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随访耳聋基因筛查和诊断均为GJB2纯合/复合杂合突变3例,听力筛查未通过;其中GJB2基因c.235delC纯合突变2例,出生2个月确诊为重度耳聋,出生6个月准备安装人工耳蜗;GJB2基因c.235delC/c.299delAT复合杂合突变1例,出生2个月确诊为中度耳聋,准备配戴助听器。结论本研究显示杭州市新生儿常见耳聋基因突变携带率5.30%,开展听力-耳聋基因联合筛查,有利于聋儿的早期诊断及早期干预。

早孕期血清学产前筛查指标预测晚期自然流产的价值

目的了解早孕期血清产前筛查标志物妊娠相关性蛋白A(PAPP-A)和游离人绒毛膜促性腺激素β亚基(freeβ-hCG)预测晚期自然流产的价值。方法回顾性分析2017年1月至2019年12月在杭州市妇产科医院参加早孕期产前筛查且随访结局为发生晚期自然流产的209例孕妇为自然流产组,并随机选择374例同期生育正常胎儿的孕妇作为对照组,比较两组孕妇的早孕期血清freeβ-hCG和PAPP-A水平。采用二元Logistic回归分析对早孕筛查标志物是否为自然流产的保护和危险因素进行筛选,利用ROC曲线确定截断值、曲线下面积(AUC),对自然流产的诊断价值进行评价。结果自然流产组孕妇的血清PAPP-A水平为0.90(0.21,2.39)MoM,低于对照组的0.97(0.43,2.38)MoM,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,PAPP-A MoM升高是自然流产的保护因素,其OR值为0.659,95%CI:0.463~0.937;自然流产组的freeβ-hCG为0.93(0.30,2.69)MoM,低于对照组的1.07(0.33,3.61)MoM,差异有统计学意义(P=0.048)。但freeβ-hCG MoM不是自然流产的危险或保护因素(OR=0.811,P=0.112)。结论PAPP-A对晚期自然流产有预测价值,PAPP-A结合预产年龄、孕龄和体重可以提高预测价值,但freeβ-hCG对晚期自然流产的预测价值有待进一步探讨。

学龄前儿童血清维生素D水平调查

目的评价杭州市学龄前儿童维生素D水平,为预防维生素D缺乏提供指导意见。方法选取2019年6月至8月于杭州市妇产科医院体检的1~6岁儿童1613例,采用液相色谱–串联质谱法分别检测其血清25-羟维生素D[25(OH)D]、25(OH)D2及25(OH)D3含量。结果男童的血清25(OH)D和25(OH)D3水平显著高于女童(P<0.05),不同年龄段儿童的血清25(OH)D和25(OH)D3水平均随年龄增长而降低(P<0.05),25(OH)D2水平均随年龄增长而升高(P<0.05)。不同性别儿童的维生素D营养状况比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.986,P=0.324),不同年龄段儿童的维生素D营养状况比较差异有统计学意义(χ^(2)=10.549,P=0.005),≥4岁儿童维生素D缺乏和不足的比例相对较高。结论男童的血清25(OH)D、25(OH)D3水平显著高于女童,随着年龄增长儿童的血清25(OH)D、25(OH)D3水平降低,≥4岁儿童的维生素D缺乏和不足的比例较高。

产前诊断样本中母体细胞污染对染色体微阵列技术检测的影响

目的评估产前诊断样本中母体细胞污染(MCC)对染色体微阵列技术(CMA)检测拷贝数变异(CNV)的影响。方法前瞻性研究。挑选2016年12月至2018年8月于杭州市妇产科医院产前诊断中心行羊水产前诊断且经CMA检测出拷贝数变异的DNA标本5份,加入正常女性基因组DNA以模拟不同比例母体细胞污染。采用Agilent微阵列染色体芯片180K CGH(Agilent 180K CGH)对模拟标本进行检测,检测结果通过Agilent CytoGenomics软件进行分析。结果当MCC>38.4%(95%可信区间:36.6%~40.2%)时重复CNV无法检出,MCC>41.3%(95%可信区间:39.9%~42.7%)时缺失CNV无法检出,且随MCC比例增高,CNV检出率逐步降低;大片段的CNV较小片段CNV对MCC耐受程度高;相同大小CNV,缺失型CNV的检出能力较重复型略微升高。在男性标本中,当MCC>10%时,可通过微阵列检测到X/Y染色体发生位移。结论MCC高于一定比例时可以对CMA检测CNV产生影响。基于Agilent 180K CGH对MCC模拟物的检测结果及CNV检测特异性原则,鉴于保守原则,本中心Agilent 180K CGH的MCC阈值设定为30%。

产前诊断嵌合型2-三体一例

本文报告了 1例嵌合型2-三体的病例。孕妇29岁,因早孕期血清学筛查21 -三体高风险,在孕20周行羊膜腔穿刺术,羊水染色体检查报告提示:mos 47,XN,+2[10]/46,XN[40]。该孕妇在孕26周时胎儿出现了生长受限、羊水过少,于孕27周+引产。引产胎儿具有明显外观异常,如长头型,耳位低,小下颌等。由于家属拒绝,未行病理解剖。

中孕期血清AFP和free β-HCG水平与子痫前期的相关性

目的:了解中孕期孕妇血清甲胎蛋白(AFP)和游离人绒毛膜促性腺激素β亚基(free β-HCG)水平与子痫前期的相关性。方法:分析2015年1月至2016年8月在杭州市妇产科医院接受中孕期(妊娠15~20+6周)血清学产前筛查检测、妊娠晚期住院分娩的孕妇,根据子痫前期发病程度,将研究对象分为子痫前期组(n=55)和重度子痫前期组(n=36),同时期正常分娩孕妇中随机抽取100例作为对照组(n=100),检测孕妇血清标本AFP和free β-HCG水平,并比较其浓度分布情况。子痫前期和重度子痫前期与孕妇年龄、孕期、体质量、AFP和free β-HCG的关系采用非条件logistic回归分析。采用ROC曲线评价AFP和freeβ-HCG的筛查效能。结果:子痫前期组、重度子痫前期组AFP(MoM)水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。经非条件logistic回归分析,孕妇血清AFP是子痫前期、重度子痫前期发病的主要危险因素(P<0.05),但其检测灵敏度偏低。结论:中孕期妇女血清高水平AFP(MoM)是妊娠子痫前期的危险因素,可预测晚期孕妇发生子痫前期可能,但其检测灵敏度偏低,单独筛查子痫前期价值有限,需要与其他标志物联合应用。

无创产前基因检测及羊水产前诊断在高龄孕妇中的对照研究分析

目的探讨无创产前基因检测及羊水产前诊断在检测高龄孕妇染色体异常中的应用价值。方法选取2015年2月-2016年6月在我院进行无创产前基因检测的2319例和同期进行羊水穿刺的单活胎高龄孕妇,分别利用高通量测序技术进行测序分析以及羊水细胞学染色体核型分析,NIPT阳性者再进行羊水穿刺染色体核型分析。比较两组间染色体异常检出率的差异。对所有被检测者进行随访。结果 2319例高龄孕妇进行NIPT检测,阳性21例,3例自然流产,羊水确诊诊断10例,检出率0.43%;894例高龄孕妇进行羊水穿刺染色体核型分析,阳性22例,检出率2.46%.两组差异有统计学意义(P>0.05)。结论对于高龄孕妇羊水产前诊断仍然是一种首选的产前诊断方法。

胎儿颈部透明带增厚与不良妊娠结局的关系

目的探讨胎儿颈部透明带(nuchal translucency,NT)增厚与不良妊娠结局的关系。方法随访观察1621例门诊行NT检查的单胎孕妇中NT≥2.5 mm的孕妇产前检查情况及妊娠结局。结果 NT≥2.5 mm的胎儿54例,经过无创DNA检查或羊水穿刺检查显示,共有9名染色体异常;NT增厚、孕妇年龄增加,染色体异常的检出率增加(P<0.05)。NT增厚且无染色体异常的45例孕妇中查出胎儿先天性心脏病3例,胎儿全身水肿2例,脐膨出2例,骨骼异常2例,自然流产2例;正常健康出生34例。结论孕早期超声检查胎儿NT,有利于早期筛查胎儿染色体异常尤其21-三体综合征,对于预测胎儿不良妊娠结局有重要的临床指导意义。

应用Bac on Beads技术产前诊断22q11微重复综合征三例

目的应用多种技术对3例22q11.2微重复综合征进行产前诊断,探讨22q11.2微重复综合征胎儿的遗传学特征。方法应用染色体G带、BAC on Beads技术、荧光原位杂交技术和SNP array技术从多个水平对3例22q11.2微重复综合征胎儿断裂位点进行识别与定位。结果 3例经由BAC on Beads技术发现的22q11.2微重复综合征胎儿均经荧光原位杂交技术和SNP array技术证实存在2.8Mb-3.1Mb不等微重复,其中一例经芯片验证为遗传自父亲。结论 BAC on Beads技术应用于产前诊断有利于发现微缺失微重复综合征,避免漏诊。

杭州市胎儿18三体综合征发生率及相关因素分析

目的了解2009年10月—2016年9月杭州市胎儿18三体综合征(ES)的发生情况。方法收集2009年10月—2016年9月杭州市640 671名孕妇的产前筛查、诊断、妊娠结局随访和胎儿出生缺陷监测资料,分析不同胎儿性别、孕妇年龄和居住地区的ES发生率。结果随访到孕妇617 158人,随访率为96.33%。确诊ES 81例, ES年均发生率为1.31/万,这7年中ES发生率未见随时间变化趋势(P>0.05)。血清学筛查孕妇胎儿ES发生率为1.13/万,低于非血清学筛查孕妇的2.35/万(P<0.05)。男女性胎儿ES发生率分别为0.77/万和0.75/万,差异无统计学意义(P>0.05)。随孕妇年龄的增加,胎儿ES发生率呈增高趋势(P<0.05)。居住杭州市主城区、郊区和辖区(县、市)的孕妇胎儿ES发生率分别为1.57/万、 0.95/万和0.99/万,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 2009年10月—2016年9月杭州市胎儿ES发生率为1.31/万,孕妇年龄越大,胎儿发生ES的风险越高。

围孕期常用激素应用与出生缺陷

围孕期（periconceptional period）一般指孕前3个月至孕12周。该时期是胚胎畸形的敏感期,药物使用将可能增加出生缺陷的发生率。围孕期常使用孕激素、雌激素、促性腺激素、口服避孕药这四类＂激素＂药物。此四类药物对子代是否有影响,特别是孕前应用、误服或长期使用是否会导致子代先天性畸形等问题一直受到人们的密切关注。

0.1%苯扎氯铵溶液消毒羊膜腔穿刺术野皮肤效果观察

目的观察0.1%苯扎氯铵溶液用于孕妇羊膜腔穿刺术野皮肤的消毒效果。方法该院选择需羊膜腔穿刺的孕妇218例,随机分为对照组与苯扎氯铵组,各109例。对照组采用5%聚维酮碘与酒精脱碘消毒,苯扎氯铵组采用0.1%苯扎氯铵溶液消毒,比较两组的细菌学监测、消毒效果及不良反应。结果苯扎氯铵组检出细菌标本阳性6个(1.4%)低于对照组的52个(11.9%),消毒有效106例(97.2%)高于对照组的94例(86.2%),不良反应3例(2.8%)低于对照组的15例(13.8%),差异均有统计学意义。结论 0.1%苯扎氯铵溶液消毒孕妇羊膜腔穿刺术野皮肤效果良好,且安全、可靠。

3163例新生儿十五项耳聋基因筛查结果分析

目的评估杭州地区新生儿的耳聋基因突变情况,为遗传咨询提供参考。方法回顾性分析2018年6月~2019年6月在杭州市妇产科医院进行新生儿十五项耳聋基因筛查的标本,共3163例。使用微阵列芯片杂交法对遗传性耳聋相关的15个突变位点进行检测,并用Sanger测序法对有突变位点的样本进行相应确证。结果在3163例新生儿中,检测到168例耳聋基因突变携带者(检测到171个突变位点),突变基因携带率为5.31%(168/3163),其中单杂合突变型158例,235del C/299del AT复合突变1例,235delC纯合突变1例、176del 16/538C>T双突变1例,1494C>T突变1例,1555A>G突变7例。结论检测的4个基因15个突变位点中,以GJB2基因235delC位点突变最高。本研究丰富了十五项耳聋基因筛查及突变位点携带率流行病学的资料,为杭州地区耳聋的遗传咨询及预防提供依据。

无创产前基因检测技术在胎儿性染色体非整倍体检测中的临床应用

目的探讨无创产前基因检测技术检测胎儿性染色体异常中的应用价值,以及分析其检测出的胎儿性染色体异常中不同核型之间的假阳性情况。方法选取2015年2月-2016年6月在我院进行无创产前基因检测的6972例单活胎孕妇,收集外周血标本并提取胎儿游离DNA,制备文库,利用高通量测序技术进行测序分析,对提示性染色体非整倍体异常的孕妇进行羊膜穿刺检查羊水细胞染色体核型检查。对所有被检测者进行随访。结果 1 6972例标本中,无创产期基因检测提示胎儿性染色体非整倍体异常20例,经知情同意,19例孕妇自愿接受羊水穿刺,其中8例羊水染色体核型结果与NIPT结果一致,均已自然流产或引产,包括45,X 2例,45,X,rob(14;21)1例,45,X[43]/46,XY[7]1例,47,XXY 2例,47,XYY 1例,47,XXX 1例。2 6972例标本中,NIPT对性染色体非整倍体异常检出率为0.29%(20/6972),假阳性率58%(11/19),其中XO、XXY、XYY、XXX的假阳性率依次为70%(4/13),0,50%(1/2),50%(1/2)。结论无创产前基因检测可应用于胎儿性染色体异常检测,但是其对X单体假阳性率高,仍需进一步产前诊断确诊。

罕见的17号染色体臂内反向插入一个家系的光学基因组图谱分析

目的应用光学基因组图谱(OGM)技术探讨1个罕见的17号染色体臂内反向插入家系的遗传学特征。方法选取2021年10月在杭州市妇产科医院产前诊断中心就诊的1例血清学筛查高风险孕妇及其家系成员作为研究对象。用染色体G显带核型分析、荧光原位杂交(FISH)、单核苷酸多态性微阵列(SNP array)、OGM等技术对该家系的17号染色体异常进行综合分析和验证。结果羊水染色体核型分析及SNP array检测提示胎儿染色体17q23q25区存在11 Mb重复。孕妇核型分析提示17号染色体结构异常,但SNP array检测未见异常,OGM检测提示其染色体17q23q25区存在臂内反向插入,经FISH检测确认。胎儿父亲核型未见异常。结论胎儿的染色体17q23q25区重复衍生自其母亲17号染色体的反向插入。OGM技术对于鉴定平衡性染色体结构异常具有一定的优势。

亲本来源验证在临床意义未明拷贝数变异致病性判别中的作用

目的探索胎儿拷贝数变异(copy number variation,CNV)的亲本来源验证的产前应用。方法本研究纳入了182个家系。所有孕妇均行羊膜穿刺或脐带穿刺术,并同时进行核型分析和染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)。对胎儿父母的外周血也进行了染色体微阵列分析,以确定胎儿CNV的亲本来源。最后,对胎儿的临床结局进行了随访。结果在182例胎儿中,有163例(89.6%)的CNV为亲本来源,19例(10.4%)为新发的CNV。在进行亲本来源验证前,有149例(91.4%)亲本来源的CNV被归为意义未明变异(variant of uncertain significance,VUS);经过亲本来源验证之后,其中的137例(91.9%)被评估为可能良性变异。在163例亲本来源的CNV中,有122例(74.8%)胎儿健康出生后表型正常。在19例新发CNV病例中,有9个家系选择终止妊娠。结论CMA检测到的亲本来源CNV大多数为可能良性,亲本来源验证可帮助阐明CNV在产前诊断中的临床意义。

孕早期测量NT厚度与孕中期母体血清AFP和free-β-HCG检测在筛查唐氏综合征中的意义和作用分析

目的探讨孕早期测量胎儿颈项透明层厚度(NT)与孕中期母体血清AFP和free-β-HCG检测在筛查唐氏综合征(DS)中的作用。方法采用回顾性分析,随机选取我院2014年5月-2016年2月收治的2205例孕妇的临床资料进行研究。NT的测定利用超声检测,然后进行母体血清AFP和free-β-HCG检测,并利用DS产前筛查分析系统软件评估孕妇DS风险。并对孕妇实施羊膜穿刺检查羊水细胞染色体核型检查。结果孕早期查出84例高危NT,阳性率为3.8%;84例高危NT孕妇均参加孕中期血清学检测,孕中期检出DS高危132例,阳性率为6.0%;单项超声检测NT厚度和单项母体血清学检测发生率之间没有明显的差异,P>0.05,无统计学意义;联合筛查胎儿异常、及DS特异性、假阳性率、假阴性率明显高于单项筛查,P﹤0.05,有统计学意义。结论 NT和血清学联合检测能够提高筛查唐氏综合征诊断有效性和针对性,但是两种检测方法不能相互取代。

早中孕期风险筛查与妊娠结局分析

目的了解早中孕期血清学产前筛查风险与孕妇不良妊娠结局的关联性,为合理指导和管理接受血清学产前筛查孕妇提供依据。方法对杭州市5家产前筛查中心的180 006名早中孕期孕妇进行唐氏综合征(DS)、18三体综合征(ES)和开放性神经管缺陷(ONTD)发病风险的产前筛查和产后随访,比较筛查结果为高风险与低风险孕妇的妊娠结局,并评价产前筛查的诊断价值。结果检出高风险孕妇10 296例,低风险孕妇169 710例(随访到168 654例);其中DS、ES、ONTD高风险分别为9 406、273和617例,高风险阳性率分别为5.23%、0.15%和0.34%。高风险孕妇早产活产、自然流产、终止妊娠、死胎/死产的发生率分别为5.46%、0.80%、1.80%和0.37%,均高于低风险孕妇的3.50%、0.21%、0.38%和0.18%(P<0.001);高风险孕妇的胎儿DS、ES、ONTD实际发生率分别为4.56‰、1.65‰和0.97‰,均高于低风险孕妇胎儿的0.12‰、0.04‰和0.09‰(P<0.001)。DS、ES、ONTD产前筛查的灵敏度分别为70.15%、68.00%和38.46%,假阳性率分别为5.23%、0.14%和0.34%。结论血清学产前筛查高风险孕妇的DS、ES、ONTD及不良妊娠结局发生率高,产前筛查的假阳性率较低。

高效液相色谱串联质谱法检测妊娠期肝内胆汁淤积症7种胆汁酸及其临床意义

目的比较妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇、肝功异常孕妇和正常孕妇胆汁酸谱中7种胆汁酸亚型在不同孕周的血清水平差异及其与妊娠结局的关系,探讨血清胆汁酸亚型分析在临床应用中的价值。方法回顾性分析2018年9月—2019年2月于杭州市妇产科医院常规产检并分娩的ICP孕妇84例、单纯肝功异常孕妇20例和正常孕妇30例,于9~13^+6周、15~20^+6周及28~40周采集空腹静脉血,应用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清中胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、石胆酸(LCA)、熊脱氧胆酸(UDCA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)水平;分析与相应妊娠结局间的关系。结果孕早、中、晚期ICP孕妇均有多种胆汁酸亚型水平显著高于正常孕妇组和肝功异常孕妇组,以GCA和TCA为主;ICP组胆汁酸谱随孕周升高趋势明显,7种胆汁酸亚型在3个妊娠阶段均有显著差异;GCA与分娩孕周负相关,GCA、LCA、GCDCA与新生儿体重负相关,其他胆汁酸与临床结局无显著相关性。结论3组病例的胆汁酸谱随孕周变化规律不同;CA/CDCA比值有望作为区分ICP和单纯肝功异常的指标;LCA、GCA和GCDCA升高可能与不良预后有关,HPLC-MS/MS法检测的7种胆汁酸可用于ICP临床诊断及疗效评估。