南方典型旅游城市空气微生物特征研究

选取杭州市4个样点进行了空气微生物取样,利用传统可培养法系统研究了其空气微生物特征.结果表明杭州市空气微生物总浓度变化范围为24~10135CFU/m^3.均值为1140CFU/m^3,空气细菌浓度变化范围为0~3253CFU/m^3,均值为292CFU/m^3,空气真菌浓度变化范围为0~8767CFU/m^3,均值为848CFU/m^3.空气真菌浓度显著高于细菌浓度.空气细菌和真菌浓度百分比分别为29.1%和70.9%.杭州市不同样点空气微生物中浓度显著不同,ZJGSUJC最高为1413CFU/m^3,其次为YRBS(1174CFU/m^3)和BLQG(1137CFU/m^3),TJCR最低为834CFU/m^3.杭州室外优势细菌属依次为微球菌属(Micrococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、库克菌属(Kocuria)和假单胞菌属(Pseudomonas),5属细菌百分比总和约占55.26%~59.48%.优势真菌属依次为青霉属(Penicillium)、枝孢属(Cladosporium)、链格孢属(Alternaria)、无孢菌和曲霉属(Aspergillus),分别约占总数的29.49%、21.43%、10.98%、10.88%和7.74%.本研究提供了杭州市空气微生物污染的第一手资料,为城市管理部门制定相关的环境政策法规提供理论指导,也为全面掌握我国城市空气微生物特征奠定基础.

南方典型旅游城市空气微生物粒径分布特征

在南方典型旅游城市杭州选取了4个样点进行了空气微生物取样工作.系统研究了杭州市室外空气微生物粒径分布特征.结果表明,不同样点空气细菌粒子百分比从Ⅰ级到Ⅵ级逐渐减少,总体呈偏态分布.交通干线,文教区,商业区和旅游风景区细菌粒子百分比最高值均出现在Ⅰ级,分别占29.1%,31.8%,33.5%和25.4%,最低值均出现在Ⅵ级,分别占11.7%,11.2%,6.5%和11.1%.不同样点空气真菌主要分布在Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级,总体呈对数正态分布,真菌百分比最高值均出现在Ⅳ级,分别占30.3%,30.2%,31.7%和28.3%,最低值出现在Ⅵ级,分别占5.2%,5.1%,3.3%和4.5%.青霉属,链格孢属,曲霉属和枝孢属优势真菌粒径均呈对数正态分布特征,但取样器各级真菌百分比各不相同.此外,空气细菌中值直径显著大于空气真菌,商业区空气细菌中值直径显著大于其他3个样点,而文教区真菌中值直径显著大于其他3个样点.研究结果进一步说明了城市室内外空气微生物粒径分布特征的不同,为室内外空气微生物污染的预防和控制提供了科学依据.

杭州市西湖景区春季空气细菌多样性特征

选取了杭州市西湖景区4个典型样点,利用高通量测序方法研究了其空气细菌多样性特征。结果表明,在细菌门水平上,各样点优势细菌为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes),其总相对含量在断桥残雪(MSBB)、柳浪闻莺(OSW)、宝石流霞(PSHFRC)和三潭印月(TPMM)分别为88.31%、86.03%、85.06%和89.28%,且不同样点优势菌群存在一定的差异,OSW和TPMM厚壁菌门分别占9.65%和11.6%,拟杆菌门分别占6.86%和5.55%,MSBB和PSHFRC拟杆菌门分别占7.31%和7.86%,厚壁菌门分别占7.09%和5.32%。在细菌属水平上,各样点优势菌属及含量差异显著,MSBB、TPMM、OSW和PSHFRC相对含量最高的菌属分别为马赛菌属(Massilia)、两面神菌属(Janibacter)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)和甲基杆菌属(Methylobacterium),分别占6.22%、6.45%、6.05%和11.5%,各样点相对含量高于2%的细菌属有鞘氨醇单胞菌属、甲基杆菌属、薄层菌属(Hymenobacter)和异常球菌属(Deinococcus),这些菌属是西湖景区各样点共有的优势菌群;通过空气细菌OTU及多样性分析可知,MSBB空气细菌丰富度较高,均匀度较低,而PSHFRC丰富度较低,均匀度较高。杭州西湖景区不同样点空气细菌群落特征差异显著,且其丰富度和均匀度明显不同。

杭州市空气微生物群落碳代谢特征研究

利用Biolog技术,研究了杭州市4个样点,即延安路商业街(Yan'an Road Business Street,YRBS)、天目山路与教工路口(Tianmushan Jiaogong Cross Road,TJCR)、浙江工商大学教工路校区(Zhejiang Gongshang University Jiaogong Campus,ZJGUSJC)、西湖曲院风荷(Breeze-ruffled Lotus at Quyuan Garden,BLQG)空气微生物群落碳代谢特征.结果表明,不同样点空气微生物样品平均颜色变化率(Average Well Color Development,AWCD)在培养240 h后达到稳定,并且4个样点的AWCD值即对单一碳源的利用能力具有显著差异,YRBS>TJCR≈ZJGSUJC>BLQG;YRBS、TJCR、ZJGSUJC和BLQG空气中微生物物种的多样性和丰富度依次减少;不同样点空气微生物对糖类和氨基酸类碳源利用程度较高,对其它碳源利用程度较低,且同一样点对不同单一碳源的利用程度也存在显著差异,YRBS对糖类碳源的利用程度最高,对聚合物类碳源利用程度最低,BLQG对糖类碳源的利用程度最高,对胺类碳源利用程度最低;不同样点空气微生物群落碳代谢基质主成分1(PC1)贡献度为43.8%,主成分2(PC2)贡献度23.4%,YRBS、BLQG和TJCR的空气微生物群落差异较大,碳代谢功能差异显著,而TJCR与ZJGSUJC碳代谢功能无显著差异.

生物传感器在医学检测中的应用

生物传感器可以在分子水平对人体生化指标和病原微生物等方面进行定性、定量检测,其简单、快速、灵敏的特点优越于诸多的传统分析方法。现就生物传感器的工作原理、应用领域及其发展趋势作一简要综述。

杭州市2014年一起金黄色葡萄球菌肠毒素所致食源性疾病暴发调查

目的 运用现场流行病学手段，分析2014年杭州市某大学发生的一起食源性疾病暴发原因。方法 通过查阅学校附近医院就诊记录和校医务室门诊日志开展病例个案调查，描述疾病分布特征，绘制流行病学曲线图，开展病例对照研究和危害因素调查。结果 本次食源性疾病暴发潜伏期为3.0（1.5~5.0） h。病例均有学校附近某小吃店就餐史，因可疑食物粉丝在不锈钢保温桶中存放时间过长（〉3 h），导致污染金黄色葡萄球菌后产生肠毒素；采集的18份样品中3份病例粪便和6份食物原料葡萄球菌肠毒素检测结果为阳性。结论 该起食源性疾病暴发为粉丝污染金黄色葡萄球菌导致的食物中毒。

多重实时PCR检测产毒素性霍乱弧菌和副溶血弧菌

设计引物和探针,优化多重实时PCR条件,以同时检测霍乱弧菌霍乱毒素基因ctxA、副溶血弧菌种特异性基因gyrB和耐热肠毒素基因tdh。该多重实时PCR方法检测产毒素性的O1群(3株)和O139群(44株)霍乱弧菌菌株、不产毒素的O1群(12株)和O139群(6株)及非O1非O139群(7株)霍乱弧菌菌株的ctxA,阳性和阴性结果与普通PCR检测结果100%符合;检测副溶血弧菌种特异性gyrB,116株副溶血弧菌均阳性,而9株其它细菌和72株霍乱弧菌均阴性;检测tdh的阳性和阴性结果也与普通PCR结果完全一致。另外还建立了检测副溶血弧菌菌株trh1和trh2的单重实时PCR方法。

杭州市急性呼吸道感染婴幼儿中副流感病毒3型遗传进化及其感染特征研究

目的分析杭州市婴幼儿中副流感病毒3型（HPIV-3）的遗传进化及其感染与合并感染情况。方法收集2009年12月至2013年3月杭州地区医院0—11岁婴幼儿急性呼吸道感染病例咽拭子或呼吸道吸出物样本，共856份（男性553例，女性303例）。采用逆转录荧光定量PCR（qRT．PER）法检测HPIV-3，阳性样本用特异性引物扩增HN基因进行基因测序，将测序所得序列用ClustalX2．0软件进行比对，然后使用MEGA6．0软件，采用邻接法建立系统进化树。同时，用qRT-PCR法检测与其他呼吸道病原体的合并感染情况。采用x2检验比较不同特征患儿单一感染与合并感染情况。结果856例患儿中，HPIV-3阳性84例（9．6％）。男性患儿HPIV-3感染阳性率为10．0％（55／553），女性患儿阳性率为9．6％（29／303）（x2=0．03，P=0．860）。84例HPIV．3阳性病例的合并感染率为49％（41例），其中与鼻病毒合并感染检出率较高，为41％（17例）；1岁以下患儿的合并感染率为54％（36／67），高于单一感染率【46％（31／67）]（X2=4．78，P=0．029）；单一感染患儿伴有肺炎症状占93％（37／40），高于合并感染组【76％（29／38）]（x2=3．92，P=0．048）。同源性分析结果显示，56例患儿HPIV．3的HN基因编码区核苷酸和氨基酸序列一致性均较高，一致性分别为96．9％～100．0％和98．6％．100％。基于HN基因的进化树分析表明，杭州株均归属于c3亚群。结论杭州市婴幼儿的急性呼吸道感染与HPIV-3有关；HPIV-3HN基因型变异较小，但进化具有一定地域特征；与其他呼吸道病毒的合并感染率较高。

杭州市儿童急性呼吸道Saffold心病毒感染的临床特征及流行病学分析

目的 了解杭州地区Saffold心病毒（SAFV）在急性呼吸道感染（ARI）患儿中的临床特征和流行病学特征.方法 收集2011年3月至2014年2月浙江大学医学院附属儿童医院呼吸道门诊和住院病例共1060例.其中门诊病例采集咽拭子256份,住院病例采集气管吸取物804份.实时荧光PCR扩增SAFV的5＇UTR基因片段.采用SPSS 17.0软件分析检测结果和临床资料.结果ARI门诊患儿和住院患儿样本中SAFV的检出率分别是2.3%（6/256）和13.2%（106/804）,两者相比差异具有统计学意义（χ^2=24.147,P〈0.01）.住院病例中,〈1岁、1~〈3岁、3~〈6岁和6~12岁患儿阳性检出率分别为14.0%、11.2%、11.1%和8.3%,各年龄组间相比,差异无统计学意义（χ^2=1.845,P〉0.05）;男性和女性患儿 SAFV 检出率分别为12.7%和17.7%（χ^2=0.279,P 〉0.05）;按季节划分,SAFV检出率最高的是秋季（21.2%）,其次是春季（14.6%）,冬季（9.5%）和夏季（8.8%）检出率相对较低（χ^2=15.625,P〈0.01）.106例SAFV阳性住院患儿中,81例存在合并感染,合并感染率为76.4%.6例门诊病例中,4例存在合并感染,合并感染率为66.7%.住院病例中,与SAFV合并感染率最高的是呼吸道合胞病毒（36.8%）,其次为鼻病毒（27.4%）、偏肺病毒（10.4%）和副流感病毒（10.4%）.ARI患儿中,SAFV阳性病例的发热率低于SAFV阴性病例（χ^2=4.069,P〈0.05）.结论 杭州地区ARI住院患儿中SAFV的检出率显著高于门诊患儿,SAFV感染均以合并感染为主.SAFV在杭州地区的流行呈现一定地方流行模式.

婴幼儿疑似甲型H1N1重症病例及门诊流感样病例中鼻病毒的检测分析

目的了解鼻病毒在婴幼儿疑似甲型H1N1重症病例及门诊流感样病例中的分布、分子进化特征及与其他呼吸道病毒的合并感染情况。方法样本有两种来源:疑似甲流重症病例样本246份为样本1组,门诊流感样病例样本68份为样本2组。扩增鼻病毒5′非编码区及VP2-VP4区,测序比对,构建进化树。对鼻病毒阳性样本检测其他常见呼吸道病毒。结果样本1组中鼻病毒阳性率为8.54%(21/246)。样本2组中鼻病毒阳性率为16.2%(11/68)。样本1组和样本2组鼻病毒与其他呼吸道病毒的合并感染率分别为71.4%、9.09%,两者具有显著性差异(P<0.05)。对其中14份样本成功进行了测序,HRV-A、HRV-B、HRV-C基因型所占比例分别为64.3%、7.1%和28.6%。多序列比对分析表明鼻病毒3个基因型间的核苷酸序列一致性为55%～65%。结论 HRV在疑似甲型H1N1流感重症病例中主要是以合并感染为主。杭州地区婴幼儿疑似甲型H1N1流感重症病例及门诊流感样病例中鼻病毒感染主要是以HRV-A,HRV-C基因型为主,HRV各型别之间核苷酸变异较大。

流感患者的流行病学特点及临床特征研究

目的探讨流感患者的流行病学特点及临床特征。方法采集2014—2015年杭州市第一人民医院发热门诊的2 083例流感样症状患者的咽拭子样本,并送杭州市疾病预防控制中心进行检测。采用real-time RT-PCR法对流感病毒进行检测与基因分型,收集流感病毒检测阳性患者的临床资料、实验室检查结果、影像学检查结果和不同治疗结果等,根据不同年龄段进行回顾性分析。结果流感病毒检测阳性493例,阳性率为23.67%,其中B型流感、H3N2流感和H1N1流感分别为163、256和74例。全年以1~2月、7~8月为流感病毒检测阳性高峰。85.60%的患者无明显流行病学接触史,主要临床表现有发热（100.00%）、咳嗽（82.76%）、咽痛（80.12%）、全身酸痛（47.86%）、咽部充血（93.30%）和扁桃体肿大（38.94%）等。≥60岁组有基础疾病史、接受住院治疗的比例均明显高于14岁~、25岁~组（均P〈0.01）,14岁~组扁桃体肿大发生率明显高于≥60岁、25岁~组（均P〈0.01）。大部分患者血WBC（79.92%）和C反应蛋白（CRP,84.79%）水平正常;5.79%的患者ALT水平异常升高;4.17%的患者肌酸激酶（CK）异常升高;10.17%的患者合并肺部影像学异常。≥60岁组患者CRP异常升高、影像学异常发生率均明显高于其他年龄组（均P〈0.01）。流感患者治愈率为99.60%,≥60组患者体温恢复正常时间、症状完全恢复时间均明显较长（均P〈0.01）。与未抗病毒治疗组比较,奥司他韦抗病毒治疗组、特效感冒方中药治疗组患者体温恢复正常、症状完全恢复时间均明显缩短（均P〈0.05）。结论流感在发热门诊流感样症状患者中检出率较高,但临床症状较轻,总体预后较好,但应重视老年患者。奥司他韦、本院特效感冒方中药治疗均可明显缩短病程,促进疾病恢复。

2009年杭州市01群霍乱弧菌的分子特征及耐药性

目的研究2009年杭州市O1群霍乱弧菌分离株的分子特征及菌株耐药情况。方法选取2009年分离自杭州市7个区县的30株O1群霍乱弧菌分离株，用PCR检测其肠毒素A基因（ctxA）和毒素共调菌毛A基因（tcpA），以脉冲场凝胶电泳（pulsed—fieldgelelectrophoresis，PFGE）进行分子分型并作相似度分析，用改良K—B纸片法检测菌株的耐药谱。结果30株01群霍乱弧菌分离株中，ctxA-并tcpA＋基因型菌株有24株，占80．00％；ctxA-并tcpa-基因型菌株有4株，占13．33％；ctxA＋并tcpA＋基因型菌株有2株，占6．67％。27株菌（3株因降解未分型）分为11种PFGE型别（P1～P11）；23株ctxA-并tcpA＋基因型菌株（1株因降解未分型）分为P1～P7等7种型别，相似度≥91．4％，其中P1型占56．52％（13／23）。7株从同一起暴发事件中分离的ctxA-并tcpA＋菌株的PFGE型别分别为P1（6株）和P2（1株），相似度为97．6％。24株ctxA-并tcpa＋菌株对氨苄西林、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为20．83％（5／24）、4．17％（1／24）和4．17％（1／24）。结论2009年杭州市01群霍乱弧菌流行株的基因型是ctxA-并tcpA＋型；ctxA-并tcpA＋型01群霍乱弧菌菌株的耐药情况尚不严重。

双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒

目的:建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)以检测甲、乙型流感病毒。方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)。设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-PCR(DRT-PCR)方法。对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测。对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测及细胞培养分离病毒。结果:DqRT-PCR检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝。DqRT-PCR和DRT-PCR对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%。DqRT-PCR、DRT-PCR和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(2χ=5.5,P>0.05)。与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-PCR的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对2χ检验,差异无统计学意义(2χ=0.76,P>0.05)。结论:建立DqRT-PCR可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率。

杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒感染的流行病学及基因特征分析

目的了解杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒（WU polyomavirus,WUPy V）流行特征和基因型别。方法收集2011年3月至2013年6月间至浙江省儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿的鼻咽吸取物,用聚合酶链反应（PCR）法扩增VP2编码基因和VP2/1中间序列,测序后进行分型。选取代表性病毒株进行基因组测序。结果收集的722份标本中,10份为WUPy V阳性,检出率为1.4%。WUPy V感染主要发生在夏季、秋季和冬季。患儿平均年龄为13.6月龄,男女性别比为9∶1,性别差异无统计学意义（P=0.09）。WUPy V感染所致疾病为肺炎、喉炎和细支气管炎。WUPy V基因型别为Ⅰa型。代表性毒株HZ13024的基因组大小为5229 bp,与Gen Bank中WUPy V基因组序列相似性为99.8%~99.9%。结论杭州市儿童急性呼吸系统疾病中存在WUPy V感染,感染率较我国其他地区低,基因型别为Ⅰa型。

副溶血性弧菌的分子流行病学研究进展

副溶血性弧菌广泛存在于海洋环境中,是引起食物中毒爆发的主要病原菌之一。近年来,致病性副溶血性弧菌的基因组序列已阐明,菌株分子特征比较研究使得03:K6群菌株大流行的假说得以提出,多种细菌毒力因子在不同来源菌株间的分布特征有了较清楚的了解,对环境中存在的致病性菌株与临床菌株关系正进一步深入研究。这些进展使得人们对其致病机制、流行特征和环境生态等有了新的认识,有益于副溶血性弧菌所致食物中毒和胃肠炎的预防和控制。

降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的研究

目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gD蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gD蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低或避免非特异性扩增。结论:TD-PCR能够用于快速,准确地检测gD蛋白,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

整合子在革兰阴性菌获得性耐药形成机制中的作用

细菌通过抗生素抗性基因的水平转移从外部获得抗性,是临床耐药菌株产生的主要途径。革兰阴 性菌中一种基因捕获和表达的遗传单位——整合子(integron)在细菌获得抗生素抗性机制中起了重要作用,本文就 其结构、类型、分布及其在革兰阴性菌获得性耐药机制中的作用作了综述。

降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的研究

目的建立一种快速,准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的方法。方法根据已发表的gG蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gG蛋白基因进行扩增。结果从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且能有效地降低或避免非特异性扩增。结论TD-PCR能够用于快速,准确地检测gG蛋白基因,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。