快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立与应用

目的建立一种快速准确定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。方法以femB、SEA基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A的靶序列，设计合成引物和TaqMan探针；收集腹泻患者大便标本分离的金黄色葡萄球菌68株，并定量检测其肠毒素A。结果TaqMan探针荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球和肠毒素A的灵敏度均为1．0×10^2拷贝。68株金黄色葡萄球菌中检出产肠毒察A菌株11例（16．2％，11／68），CT值为13．5—20．6。结论TaqMan探针荧光聚合酶链反应能够准确快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A。

乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定治疗效应关系研究

目的 :探讨乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定治疗效应的关系。方法 :采用DNA测序和寡核苷酸芯片技术 ,检测分析了 4 1例使用拉米夫定治疗的乙型肝炎患者的基因型与酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 (YMDD)变异情况 ,同时跟踪观察了患者治疗前、治疗后 3、6、9、12个月的乙型肝炎病毒 (HBV)DNA和丙氨酸转氨酶 (ALT)水平。结果 :4 1例HBV患者中B基因型 2 1例 (5 1.2 % ) ,C基因型 2 0例(48.8% ) ;拉米夫定治疗前与治疗 12个月后B基因型与C基因型两组间ALT水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。拉米夫定治疗乙型肝炎过程中C基因型HBVDNA转阴率显著高于B基因型 ,B基因型HBVDNA反跳率显著高于C基因型 (P <0 .0 1)。C基因型YMDD突变率与B基因型差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :HBV基因型与拉米夫定治疗效应存在一定的相关性 ,C基因型对拉米夫定的治疗效应较好。

夏枯草水提液对实验性自身免疫性甲状腺炎的治疗作用及机制研究

目的探讨夏枯草水提液(PVAE)对实验性自身免疫甲状腺炎(EAT)大鼠的治疗作用及机制。方法用猪甲状腺球蛋白和完全弗氏佐剂制作EAT大鼠模型,随机分为PVAE预防性治疗组(P组)、PVAE低剂量治疗组(TL组)、PVAE高剂量治疗组(TH组)、EAT模型对照组(M组),并设立正常对照组(C组),每组14只。P组于造模前2周开始予PVAE 10g/(kg·d)灌胃给药,TL组、TH组于造模后2周开始分别予PVAE 10g/(kg·d)、2.5g/(kg·d)灌胃给药,M组和C组于造模后2周开始予去离子水2ml/d灌胃,连续给药6周。实验结束后检测各组大鼠血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B(AKt)-核转录因子(NF-κB)途经下游产物趋化因子受体3(CXCR3)和趋化因子10(CXCL10)水平;观察甲状腺组织的病理改变,检测CXCR3、CXCL10、Akt和NF-κB的m RNA、蛋白及表达水平。结果M组大鼠血清Tg Ab和TPOAb水平较C组呈明显升高,甲状腺组织有不同程度的滤泡结构破坏和淋巴细胞浸润,提示EAT大鼠造模成功。PVAE各干预组的甲状腺滤泡均较M组完整,间质水肿减轻,少量炎症细胞浸润,其中P组TPOAb水平较M组明显降低(P<0.01)。PVAE各干预组的CXCL10水平均较M组下降,其中P组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PVAE治疗组(TH、TL组)的Akt m RNA、CXCR3蛋白表达及TH组的NF-κB m RNA、Akt蛋白表达显著低于M组(P<0.05或0.01)。免疫组化结果显示各组大鼠甲状腺组织Akt均呈阴性表达,NF-κB、CXCR3及CXCL10在甲状腺滤泡细胞的细胞质和细胞核中呈不同程度阳性表达。M组NF-κB表达量明显高于C组(P<0.05),且经PVAE干预后各组NF-κB表达量均呈不同程度下调,其中P组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PI3K途径参与EAT的形成,PVAE干预可能通过抑制PI3K途径减轻自身免疫性甲状腺炎。

实时荧光聚合酶链反应检测呼吸道感染鲍曼不动杆菌TEM-1基因

目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测鳗曼不动杆菌TEM-1耐药基因灵敏度为102拷贝,279株鲍曼不动杆菌中检出47株携带TEM-1基因,检出率为16.8%。结论应用Taqman探针荧光聚合酶链反应能够快速、准确检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因。

导流杂交基因芯片技术在肠道致病菌检测中的应用研究

目的建立导流杂交芯片技术检测粪便标本中8种肠道致病菌。方法以细菌16S rDNA和23S rDNA序列设计通用引物和寡核苷酸探针,将活性氨基标记的探针依次固定在BiodyneC膜上,制成检测芯片,用标记生物素的引物进行PCR扩增,将扩增产物与检测芯片在核酸分子快速杂交仪上进行杂交,以POD和TMB进行显色,判断结果;应用该方法检测8种肠道致病菌标准菌株和120份腹泻患者粪便标本,通过细菌培养结果比较该方法的有效性。结果120份临床粪便标本中,采用导流杂交芯片共检出68份(56.67%)携带肠道致病菌;细菌培养鉴定出63份(52.50%)携带肠道致病菌,其中58份导流杂交芯片与细菌培养结果一致,准确率为85.29%。结论导流杂交芯片技术能够快速准确检测8种常见肠道致病菌,而且适用于流行病学调查研究。

用16S和23S rDNA基因芯片检测和鉴定临床常见感染性消化道病原菌

目的以细菌16S rDNA和23Sr DNA基因为靶序列,建立可检测临床7种常见病原菌寡核苷酸芯片系统。方法采用双重PCR扩增标本中靶细菌16S rDNA和23S rDNA基因片段。构建能同时检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7、副溶血性弧菌、沙门菌、霍乱弧菌、产单核李斯特菌、空肠弯曲菌和志贺菌的寡核苷酸芯片,并考核芯片的检测特异性、灵敏度和重复性。采用所建立的寡核苷酸芯片检测81例腹泻和呕吐病人粪便样本。结果双重PCR可同时扩增上述7种病原菌的16S rDNA和23S rDNA基因靶序列。所研制的寡核苷酸芯片检测灵敏度可达103cfu/ml,非靶细菌无阳性结果,不同批间和批内芯片的变异系数为3.89%～5.81%。寡核苷酸芯片检测粪便样本的阳性率为39.5%(32/81),与常规细菌学检查法检测结果的一致率达到96.3%(78/81),菌种鉴定结果一致率为96.8%(31/32)。结论本研究中建立的寡核苷酸芯片法在检测上述7种病原菌时,具有简便、快速、准确、稳定、高通量等优点,适合于临床样本检测及流行病学的现场调查。

氯氮平在体内代谢与细胞色素P450 1A2-2964位点多态性的关系

目的 :探讨氯氮平在精神分裂症患者体内代谢和细胞色素P4 5 0 1A2 2 964位点多态性关系 ,指导临床对不同患者合理使用氯氮平。方法 :采用固定剂量给药 ,用高效液相色谱法 (HPLC)测定血药浓度 ,用限制性片段长度多态性 (RFLPs)分析基因型。结果 :吸烟组和非吸烟组之间比较 ,吸烟组血浆氯氮平浓度低 ,去甲氯氮平 氯氮平比值高 (P <0 .0 5 ,P<0 .0 1)。P4 5 0 1A2 2 964位点等位基因G的频率为0 .75 ,A的频率为 0 .2 5。在非吸烟患者中 ,去甲氯氮平 氯氮平在w w基因型与非w w基因型 (w m +m m)之间无显著的统计学意义 (P >0 .0 5 )。在吸烟患者中 ,w w基因型去甲氯氮平 氯氮平要高于非w w基因型 (P <0 .0 5 )。在吸烟患者和非吸烟患者中w w基因型之间比较 ,吸烟患者的去甲氯氮平 氯氮平明显高于非吸烟患者 (P <0 .0 1) ;而非w w基因型之间无显著的统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :吸烟能诱导P4 5 0 1A2的活性。P4 5 0 1A2 2 964位点等位基因均为G(w w)时诱导能力最强 ;发生G→A突变时 ,诱导能力降低。分析患者P4 5 0 1A2G 2 964A的多态性 。

长链非编码RNA在甲状腺乳头状癌中的表达谱分析

研究发现长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）在人类多种恶性肿瘤（如肝癌、肺癌、乳腺癌等）的发生和发展中发挥重要作用,但其在甲状腺肿瘤中的表达及作用机制的研究较少。本研究采用基因芯片检测甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）和甲状腺良性肿瘤组织中lncRNAs/m RNAs的表达,筛选PTC差异性表达的lncRNAs,

血清微小RNA-222-3p在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨血清微小RNA-222-3p(mi R-222-3p)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达及其临床意义。方法提取121例PTC及甲状腺良性疾病患者血清中的总RNA,采用q RT-PCR方法检测mi R-222-3p的表达情况,分析其与PTC临床病理特征的关系,并探讨其对PTC的临床诊断价值。结果血清mi R-222-3p在PTC患者中的中位表达水平显著高于良性对照组(2.2188 vs0.7022,P<0.05)。血清mi R-222-3p的表达水平与PTC的肿瘤最大径、双侧累及、病灶数量及淋巴结转移状况等密切相关(P均<0.05),但与性别、年龄、被膜侵犯及TNM分期等无关(P均>0.05)。ROC曲线分析显示,mi R-222-3p诊断PTC的AUC为0.717,灵敏度为79.75%,特异性为61.90%。结论血清mi R-222-3p在PTC患者中高表达,其表达水平能反映PTC的进展情况,并对PTC的临床诊断具有一定价值。

实时荧光聚合酶链反应检测粪便标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素A、D

目的:建立一种快速、准确、特异、定量检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素A、D的方法并探讨肠毒素在食物中毒引起腹泻中的意义。方法:选择femB、SEA和SED基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A、肠毒素D的靶序列,设计合成引物和探针;收集食物中毒导致腹泻患者粪便标本487份,并对其进行检测分析。结果:采用荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌和肠毒素A的灵敏度为1.0×102拷贝,而检测肠毒素D的灵敏度为1.0×103拷贝;487份粪便标本中检出金黄色葡萄球菌femB基因72例(14.8%),检出产肠毒素A菌株为11例(15.3%,11/72),产肠毒素D菌株为9例(12.5%,9/72),同时产肠毒素A、D菌株1例(1.4%,1/72)。结论:应用Taqm an探针实时荧光PCR技术能够快速、准确检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素,适合于大样本筛查。

氯氮平代谢与细胞色素P_(450)1A2-2964与734位点多态性关系

目的研究氯氮平代谢与细胞色素P4501A2-2964与734位点多态性关系。方法122例精神分裂症患者给予300 mg.d-1固定剂量,根据简明精神病评定量表(BPRS)评定的结果,把减分率>30分的被试患者看作治疗有效组,减分率≤30分的为无效组。用高效液相色谱(HPLC)测定患者稳态血浆氯氮平、去甲氯氮平浓度;用限制性片段长度多态性(RFLPs)的方法测定患者细胞色素P4501A2(CYP 1A2)的基因型;用统计学方法来探讨基因型与表型间的关系。结果氯氮平的治疗有效率为85.2%。吸烟组中血浆氯氮平浓度低,去甲氯氮平/氯氮平比值高(分别P<0.05,P<0.01)。根据CYP 1A2 5’侧翼-2967和第一个内含子内734位点的多态性,用RFLPs检测出6种基因型:G/G-2964A/A734,G/A-2964A/A734,A/A-2964A/A734,G/G-2964C/A734,G/A-2964C/A734,G/G-2964C/C734;未发现A/A-2964C/A734,G/A-2964C/C734,A/A-2964C/C734基因型;在-2964位点等位基因G的频率为0.75,在734位点等位基因C的频率为0.31。在吸烟和非吸烟患者中G/G-2964A/A734基因型与非G/G-2964A/A734比较,G/G-2964A/A734基因型患者的血浆去甲氯氮平/氯氮平比值均明显增高(分别P<0.05,P<0.05)。结论G/G-2964A/A734基因型患者表现出CYP 1A2高的诱导性和酶活性,提示G-2964和A734与氯氮平的个体化治疗有关。

肝素酶在胃正常组织、胃腺瘤和胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨肝素酶表达在胃癌发展中的作用。方法 用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)测定4 2例胃癌和2 6例非癌组织中肝素酶的表达情况,采用χ2 检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果 胃癌中有2 6例肝素酶呈阳性表达(阳性率6 1. 9% ) ;非癌组织中只有1例呈弱阳性表达(阳性率3 8% )。肝素酶mRNA在胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期明显比Ⅰ、Ⅱ期表达阳性率高(P <0 . 0 5 ) ,而且更倾向于在有浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移的胃癌组织中表达(P <0 . 0 5 )。结论 肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移。肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一。

实时荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、D

目的建立一种快速、准确、特异、定量检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素A、D的方法并探讨肠毒素在食物中毒引起腹泻中的意义。方法选择femB、SEA和SED基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A、肠毒素D的靶序列,设计合成引物和探针;收集食物中毒导致腹泻患者粪便标本487份,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌和肠毒素A的灵敏度为1·0×102拷贝,而检测肠毒素D的灵敏度为1·0×103拷贝;487份粪便标本中检出金黄色葡萄球菌72例(14·8%),检出产肠毒素A菌株为11例(15·3%,11/72),产肠毒素D菌株为9例(12·5%,9/72),同时产肠毒素A、D菌株1例(1·4%,1/72)。结论应用Taqman探针实时荧光PCR技术能够快速、准确检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素,适合于大样本筛查;肠毒素是金黄色葡萄球菌食物中毒导致腹泻的重要病因之一。

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20(CK19、20)mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定CK19、20 mRNA含量。结果CK19、20 mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58.3%(21/36);CK20阳性率为36.1%(13/36);CK19、20联合检测阳性率为77.8%(28/36)。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性(P<0.05)。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20 mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切(P<0.05),而与肿瘤类型及分化程度无关(P>0.05)。结论CK19、20 mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。

视黄醇结合蛋白4在去势小鼠非酒精性脂肪性肝病模型中的表达及意义

目的 探讨视黄醇结合蛋白4(RBP4)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)去势小鼠中的表达变化及意义.方法 将30只8周龄雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为高脂+去势组、去势组和对照组,每组10只;高脂饮食诱导小鼠NAFLD,手术切除双侧卵巢建立去势模型,20周后处死小鼠;称重、收集3组小鼠血清和肝脏组织.HE及油红O染色法观察肝组织形态学改变和肝细胞质内脂质沉积情况,NAS积分和Ishak标准评价肝脂肪变性和纤维化程度;ELISA法检测血清RBP4蛋白表达水平,免疫组织化学染色法观察肝组织RBP4蛋白表达水平,Western blot法检测肝组织RBP4蛋白及脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)等肝组织脂质合成代谢相关蛋白相对表达量.结果 与对照组比较,高脂+去势组小鼠体重、肝脏指数及NAS评分均明显升高(均P<0.01),血清和肝组织RBP4及FAS、SREBP-1c蛋白表达水平均明显增加(均P<0.01).结论 RBP4蛋白与高脂饮食诱导的NAFLD严重程度相关,可能通过肝脂质合成代谢途径参与绝经后NAFLD的发生.

孕晚期B族链球菌筛查对预防新生儿早发型感染的效果

目的探讨孕晚期孕妇B族链球菌(GBS)筛查及分娩期预防性应用抗生素(IAP)对预防新生儿早发型GBS(EOGBS)感染的效果。方法选取2013年3月至2019年10月在浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院住院并分娩的33327例孕妇。根据医院开展GBS筛查的时机,分为未筛查期(2013年3月至2016年6月)孕妇17142例,筛查期(2016年7月至2019年10月)孕妇16185例。其中14641例筛查期孕妇在孕35~37周行GBS显色培养法筛查,并分析菌株耐药情况;另1544例孕28周后因早产或由外院转入而尚未行GBS筛查的孕妇,应用real-time PCR法筛查GBS定植情况。对GBS筛查阳性的孕妇在其临产后或胎膜破裂时给予IAP,比较开展筛查前后新生儿EOGBS感染的发生情况。结果14641例孕妇在孕35~37周行GBS显色培养法筛查,GBS定植率为10.6%;另1544例孕妇应用real-time PCR法筛查,GBS定植率为12.4%;两种方法筛查GBS的定植率比较差异有统计学意义(P=0.027)。1552株GBS药敏结果显示,青霉素、氨苄青霉素、万古霉素、利奈唑胺、替加环素敏感率均为100.0%;其余抗生素的敏感率由高到低依次是喹奴普汀/达福普汀99.4%、呋喃妥因84.3%、莫西沙星66.2%、左旋氧氟沙星65.5%、环丙沙星63.1%、克林霉素55.2%、四环素24.6%和阿奇霉素0.3%。开展GBS筛查前后新生儿EOGBS感染发生率分别为0.23‰(4/17311)和0.06‰(1/16329),两者比较差异无统计学意义(P=0.407)。结论新生儿EOGBS感染发生率较低,各地区可根据当地医疗条件和卫生经济学因素制定相应预防策略。

荧光定量PCR检测甲状腺结节针吸细胞甲状腺乳头状癌的原癌基因1,3的重排

目的 探讨本地区甲状腺结节针吸细胞甲状腺乳头状癌的原癌基因（RET/PTC）1和RET/PTC3重排的临床意义.方法 选择2012年1月至2013年1月间甲状腺结节针吸细胞（FNA）标本285份,用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测RET/PTC1、3重排.结果 甲状腺结节RET/PTC1、3重排率分别为17.2％（49/285）,1.4％（4/285）.平均随访21.7个月,19例（40.4％,19/47） RET/PTC1阳性患者术后病理证实为甲状腺乳头状癌（PTC）;RET/PTC1阳性患者中Thy5和Thy4组患者均为PTC,Thy2组进展为PTC较野生型者多（22.6％对3.2％,χ^2=6.667,P＜0.01））;另有4例（8.5％,4/47） RET/PTC1重排阳性为甲状腺良性病变.结论 用FQ-PCR检测FNA标本RET/PTC1、3重排简便、可行;RET/PTC1阳性常见于PTC,甲状腺良性病变也有少量检出.

胆管腔内超声联合细胞刷检病理、基因突变检测对胆管恶性狭窄的早期定性诊断价值

目的探讨胆管腔内超声（IDUS）联合细胞刷检病理学、细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测对胆管恶性狭窄的早期定性诊断价值。方法84例疑似胆管恶性狭窄患者首先行IDUS检查，随后用细胞刷刷取狭窄段胆管内壁标本，一份送检病理，另一份行K-ras、p53基因突变检测，以病理及随访结果为最终诊断，统计单一检查方法及联合检查方法早期诊断胆管恶性狭窄的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率，并行对比分析。结果单一检查诊断时，IDUS、细胞刷检病理学、细胞刷检标本K-ras基因突变检测和细胞刷检标本p53基因突变检测敏感度分别为63．46％（33／52）、53．85％（28／52）、38．46％（20／52）和42．31％（22／52），准确率分别为69．05％（58／84）、71．43％（60／84）、61．90％（52／84）和64．29％（54／84）。联合检查诊断时，IDUS＋细胞刷检病理学＋细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测敏感度（96．15％，50／52）、特异度（93．75％，30／32）、阳性预测值（96．15％，50／52）、阴性预测值（93．75％，30／32）和准确率（95．24％，80／84）均最高，且诊断敏感度和准确率均较单一检查诊断时有明显提升（P〈0．05）。结论胆管腔内超声联合细胞刷检病理、细胞刷检标本K-ras和p53基因突变检测有助于胆管恶性狭窄的早期定性诊断。

基于16S和23SrDNA基因芯片检测和鉴定七种临床常见病原菌

目的以细菌16SrDNA和23SrDNA基因为靶序列建立可检测临床七种常见病原菌寡核苷酸芯片系统。方法采用双重PCR扩增标本中靶细菌16S和23SrDNA基因片段。构建能同时检测肠出血性大肠埃希菌0157：H7、副溶血性弧菌、沙门菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、空肠弯曲菌和志贺菌的寡核苷酸芯片，并考核芯片的检测特异性、灵敏度和重复性。采用所建立的寡核苷酸芯片检测81例腹泻患者粪便样本。结果双重PCR可同时扩增上述七种病原菌的16S和23SrDNA基因靶序列。所研制的寡核苷酸芯片检测灵敏度可达10^3cfu／ml，非靶细菌无阳性结果，不同批间和批内芯片的变异系数为3．89％～5．81％。寡核苷酸芯片检测粪便样本的阳性率为39．5％（32／81），与常规细菌学检查法检测结果的符合率达到96．3％（78／81），菌种鉴定结果符合率为96．8％（31／32）。结论研究建立的寡核苷酸芯片法在检测七种病原菌时具有简便、快速、准确、高通量等优点，适合于临床样本检测及流行病学现场调查。

多种方法研究乙型肝炎病毒多聚酶变异

以DNA测序结果为标准,采用寡核苷酸芯片技术和基于荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的UniArray技术分析24例使用拉米夫定治疗12个月以上的慢性乙型肝炎(CHB)患者YMDD变异的情况,检测HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以探讨上述两种方法检测YMDD突变的价值及拉米夫定治疗乙型肝炎过程中出现的耐药状况.