SiRNA对丙型肝炎病毒5′非翻译区的干扰作用实验研究

目的研究多种siRNA对丙型肝炎病毒(HCV)5′非翻译区(5′-UTR)的干扰作用。方法以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,构建HCV5′UTR与GFP核酸序列连接的表达载体:pcDNA-HCV-5′UTR-GFP。设计针对HCV5′UTR区3段小干扰RNA(siRNA),siRNA与表达质pcDNA-HCV-5′UTR-GFP共转染HepG2细胞中,采用荧光显微镜观测细胞内荧光强度改变,并且用流式细胞术量化分析细胞荧光强度变化,评价多种siRNA对HCV基因表达的作用。结果成功构建含HCV5′UTR区的绿色荧光蛋白基因,siRNA能特异性地抑制绿色荧光蛋白基因的表达,siRNAA、siRNAB和siRNAC的抑制率分别为68.4%、72.6%、75.6%;siRNA+siRNAB、siRNB+siRNAC和siRNA+siRNAC的抑制率分别为91.8%、87.2%、92.4%;siRNA+siRNAB+siRNAC的抑制率最高,为95.7%。结论多种siRNA对HCV5′UTR区具有干扰作用,组合使用效果更好。