目的探讨锌指蛋白A20(zinc finger protein A20)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)炎症效应的影响及可能机制。方法分离及培养RPMCs,常规传代及鉴定。取第2代细胞用于实验研究。将细胞随机分成对照组、LPS组、转染A20组、空...目的探讨锌指蛋白A20(zinc finger protein A20)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)炎症效应的影响及可能机制。方法分离及培养RPMCs,常规传代及鉴定。取第2代细胞用于实验研究。将细胞随机分成对照组、LPS组、转染A20组、空载体组。脂质体转染A20质粒(pGEM-Teasy-A20)至RPMCs12h后分别在LPS刺激不同时间点收获细胞提取蛋白及细胞上清液。用Western blotting检测细胞TLR4、p-IκBα、IκBα蛋白的表达;用ELISA法检测培养上清液IL-18蛋白水平。结果 LPS刺激8h后,转染A20组RPMCsTLR4蛋白表达水平无明显增高,与对照组相比,P=0.223;与LPS组及空载体组相比,差异有显著性(P=0.003,0.002)。LPS刺激1h后,转染A20组RPMCsp-IκBα蛋白无明显降解,p-IκBα/IκBα比值与对照组相比,P=0.553。与LPS组及空载体组相比,差异有显著性(P=0.001,0.001)。在LPS刺激12h后,转染A20组RPMCsIL-18蛋白分泌水平(479.12±85.79)pg/ml高于对照组(274.34±47.21)pg/ml(P=0.012),但明显低于LPS组(1049.45±185.01)pg/ml及空载体组(1028.77±192.90)pg/ml(P=0.011,0.015)。结论 A20通过对LPS信号通路中多个相关功能蛋白的负性调控作用,阻抑LPS诱导的RPMCs炎症效应。展开更多
