耳鼻咽喉头颈外科亚专科临床护理教学实践

目的探讨亚专科教学模式用于耳鼻咽喉头颈外科的临床护理教学效果。方法将38名实习护生按时间段分为对照组和观察组各19名。对照组采用常规临床护理教学;观察组采用亚专科模式教学,即实习护生于耳科、鼻科、咽喉科依次实习2周,完成6周实习出科时评价教学效果。结果观察组专科理论操作成绩、综合素质评分、教学体验(教学素质和教学方法)显著优于对照组(均P<0.05)。结论亚专科教学模式可有效提高耳鼻咽喉头颈外科实习护生临床教学效果,同时改善护生实习体验。

精油穴位按压对慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内窥镜术后疼痛及舒适度的影响

目的:观察精油穴位按压对慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内窥镜术后疼痛及舒适度的影响。方法:选取120例在全麻下行鼻内窥镜手术的慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者,按便利抽样法分为对照组及观察组各60例。对照组予常规术后护理,观察组在常规术后护理基础上给予精油穴位按压干预。比较2组术后各时间段视觉模拟评分法(VAS)、Kokaba舒适状况量表(GCQ)、匹兹堡睡眠质量指数评定量表(PSQI)评分的变化。结果:观察组术后6 h、术后24 h、术后48 h 3个时间段的VAS评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后,2组GCQ评分均较术前下降,观察组GCQ评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后,2组PSQI评分均较术前增加,观察组PSQI评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,2组均未发生明显不良反应。结论:精油穴位按压能够缓解慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻内窥镜术后的疼痛程度,提高舒适度,提升睡眠质量。

氧氟沙星联合地塞米松治疗中耳炎临床疗效观察

目的探讨氧氟沙星联合地塞米松治疗慢性化脓性中耳炎的临床疗效及安全性。方法选取2014年1月至2015年6月期间在黄石市第二医院就诊的110例慢性化脓性中耳炎患者,以就诊先后排序,按简单随机数表法随机分为对照组和观察组,每组55例。对照组患者给予氧氟沙星治疗,观察组患者给予氧氟沙星联合地塞米松治疗,7 d为一个疗程,连续治疗两个疗程。治疗结束后比较两组患者的临床疗效、不同时间段的有效率、听力改善幅度、细菌清除率和不良反应。结果观察组患者的治疗总有效率为92.7%,明显高于对照组的63.6%,差异有显著统计学意义(P<0.01);观察组患者第5天治疗有效率为61.8%,明显高于对照组的25.5%,差异有显著统计学意义(P<0.01);观察组患者听力改善幅度及细菌清除率分别为(7.55±1.54)d B和89.1%,均优于对照组的(4.33±1.23)d B和52.7%,差异有显著统计学意义(P<0.01);对照组和观察组患者的不良反应总发生率分别为9.1%与12.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论氧氟沙星联合地塞米松治疗慢性化脓性中耳炎临床疗效显著,且显效快,不增加不良反应,值得临床推广应用。

苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭转移的影响

目的:研究不同浓度苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭和转移的影响及其作用机制。方法:Hep-2细胞体外培养,经0g/L、0.1g/L、0.2g/L和0.3g/L苦参碱分别处理1h、8h及48h,细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR法检测Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达。结果:不同浓度苦参碱与对照组比较,苦参碱能有效抑制Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力(P<0.01),且能下调Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制Hep-2细胞的浸润转移能力,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9mRNA的表达使Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力下降有关。

IL-6、STAT3表达对喉癌患者预后影响因素研究

目的探讨IL-6、STAT3表达对喉癌患者预后影响因素。方法选择40例喉鳞状细胞癌患者,采用免疫组化SP法检测患者肿瘤组织和癌旁正常组织的IL-6、STAT3蛋白表达情况。结果随访1年,发现IL-6和STAT3均阳性表达的27例患者中16例预后较差,占59.3%。IL-6、STAT3蛋白阳性表达率在TNM分期、淋巴结转移两个方面存在显著差异。结论 IL-6、STAT3蛋白表达与肿瘤的发生、发展以及预后密切相关。

冻存喉癌组织的傅立叶变换红外光谱研究

目的 通过对冻存喉癌组织与癌旁正常组织进行傅立叶变换红外光谱（FTIR）的对比研究.分析两者光谱的特异性,从而在分子水平上揭示喉癌组织的特征,为喉癌的早期诊断提供依据.方法 FTIR检测仪检测冻存喉癌组织及癌旁正常组织,对比分析两种组织的红外光谱表现[包括红外光吸收强度、峰位、峰高（1）以及相对峰强等],并结合常规病理检查结果 ,总结喉癌组织及癌旁正常组织的光谱特征.结果 （1）32例正常癌旁组织的红外光谱彼此相似,所有谱带特征峰的平均出现概率为92%,显示出正常冻存组织红外光谱具有固定的特征峰.（2）喉癌组织红外光谱相对癌旁正常组织发生明显改变：①代表核酸中磷酸基团的1084cm-1谱带明显向高波数方向移动;②碳水化合物分子中的C-O基团的伸缩振动谱带由1165 cm-1附近位移至1170 cm-1;③代表脂类的谱带（如1398cm-1、1452cm-1、2869cm-1处）发生明显变化;④蛋白质酰胺Ⅰ谱带向高波数方向移动.（3）较之癌旁正常组织,喉癌组织Ⅰ2925/Ⅰ2889/Ⅰ1647/Ⅰ1452/Ⅰ1539/Ⅰ1452/Ⅰ1452/Ⅰ1398和Ⅰ1084/Ⅰ1398均发生明显改变（P〈0.05或0.01）.（4）不同组织学分化程度喉癌组织间相对峰强未见明显差异（P〉0.05）.（5）2例癌旁正常组织被红外光谱指认为癌变,与常规病理检查结果 的符合率为97.5%.结论 FTIR可以在分子水平上反映喉癌组织和正常组织的蛋白质、核酸以及脂类等生物大分子在含量、结构、构象上的差异,能够揭示喉癌组织的特征,有望成为辅助喉癌快速诊断的一种新方法 .

顺铂诱导斑马鱼侧线毛细胞损伤及再生模型的建立

目的建立顺铂诱导斑马鱼侧线毛细胞损伤及再生模型。方法采用顺铂溶液直接孵育斑马鱼方法,通过免疫组化、荧光特异性标记侧线细胞的转基因鱼活体成像、原位杂交等方法统计分析顺铂处理前后斑马鱼侧线毛细胞剩余情况以及药物撤除后毛细胞再生情况。结果顺铂引起斑马鱼侧线毛细胞丢失具有剂量依赖效应,相同的孵育时间较高浓度的顺铂孵育后几乎可杀死全部侧线毛细胞;毛细胞再生与顺铂的毒性积累程度有关,较低浓度孵育较短时间毛细胞再生速度较快。毛细胞再生数目随着时间的延长不断增加,72小时后可再生原有数目的90%以上。结论斑马鱼侧线毛细胞经不同浓度顺铂孵育不同时间后,其毛细胞丢失与再生具有剂量和时间依赖效应。

顺铂引起斑马鱼侧线毛细胞凋亡的实验研究

目的探讨顺铂引起听觉毛细胞的死亡形式。方法利用模式脊椎动物斑马鱼侧线毛细胞易于处理和观察的优势,通过毛细胞特异性抗体免疫组化、活体染料、长时程活体成像、TUNEL染色以及Caspase-3原位抗体组化方法分别观察顺铂孵育过程中毛细胞形态变化、细胞核断裂情况以及Caspase-3活化情况,为顺铂引发听觉毛细胞的凋亡提供在体实验依据。结果与对照组相比,顺铂可引起斑马鱼侧线毛细胞90%丢失。长时程成像结果显示毛细胞在死亡过程中会出现逐渐固缩的现象。TUNEL染色结果表明顺铂可引起毛细胞细胞核断裂。Caspase-3抗体原位组化结果显示顺铂可导致毛细胞Caspase-3活化。结论通过细胞形态追踪、细胞核的断裂情况以及Caspase-3活化情况可得出结论顺铂通过细胞凋亡途径导致斑马鱼侧线毛细胞丢失。

Wnt/β-catenin信号通路对斑马鱼侧线毛细胞再生影响的实验研究

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对斑马鱼侧线毛细胞再生影响。方法利用模式动物斑马鱼侧线毛细胞可再生的优势,通过流式细胞分选助细胞类群、荧光定量PCR、整胚原位杂交以及外源添加Wnt/β-catenin信号通路小分子化合物抑制剂和增强剂的方法,观察顺铂诱导毛细胞损伤过程中Wnt/β-catenin信号通路各因子的时空表达情况及毛细胞再生情况变化,为探究经典信号因子Wnt/β-catenin信号通路对毛细胞再生的影响提供在体实验依据。结果反转录PCR(reverse transcription PCR,RTPCR)与定量PCR(quantitative PCR,Q-PCR)结果显示,与对照组相比,顺铂处理组Wnt/β-catenin信号通路配体wnt2,wnt3a和关键因子ctnnb1(beta-catenin)在助细胞类群中表达量升高(P<0.05)。整胚原位杂交结果表明Wnt/β-catenin信号通路拮抗因子dkk1a和dkk2在助细胞类群表达量下降。外源添加抑制剂,低浓度连续浸泡48小时再生毛细胞数目可达到正常组40%左右,高浓度连续浸泡48小时毛细胞再生数目仅为正常组10%左右。而在毛细胞再生前12小时时间窗添加抑制剂也可观察到毛细胞再生数目减少(P<0.0001)。外源添加增强剂,毛细胞再生数目相较对照组无显著变化(P>0.05)。结论通过分选助细胞各因子表达变化、整胚原位杂交显示时空图谱以及外源添加抑制剂与增强剂,得出结论Wnt/β-catenin信号对斑马鱼侧线毛细胞再生是必需非充分条件。

头孢他啶在手术室干预中的效果对比观察及对干预质量的影响研究

目的探讨头孢他啶在手术室干预中的效果对比观察及对干预质量的影响。方法选取2016年5月～2017年5月杭州师范大学附属医院收治的头颅患者366例，随机分为2组，对照组（n=184）进行开颅手术治疗，研究组（n=182）在手术过程当中预防性应用头孢他啶，对比2组患者治疗效果。结果2组患者颅内感染发生情况对比方面，研究组患者颅内感染显著低于对照组（P＜0.05）；2组患者活菌数以及酶标值对比方面，研究组患者均显著低于对照组（P＜0.05）；2组患者干预质量对比方面，研究组患者的PCT（降钙素原）、CRP（C反应蛋白）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）以及白细胞计数均显著低于对照组（P＜0.05）。结论头颅手术患者在手术室干预中预防使用头孢他啶，能够提高干预质量，降低感染发生率。

慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉并哮喘围手术期规范化治疗

目的:探讨慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)合并哮喘患者围手术期的处理方法。方法:回顾性分析43例行鼻内镜手术治疗的CRSwNP合并哮喘患者的围手术期临床资料,观察患者围手术期预防哮喘发作的疗效及相应的规范化治疗效果。结果:35例围手术期病情平稳,无哮喘发作;7例诊断为轻、中度哮喘发作,后送至重症监护室(ICU)监护治疗,最终顺利度过围手术期;1例诊断为重度哮喘发作,经紧急插管及对症处理待呼吸稍平稳后送入ICU处理治疗,5d后病情稳定至出院哮喘未再发作。结论:CRSwNP合并哮喘患者,术前应根据鼻部症状和哮喘的发作程度给予普米克令舒雾化吸入及鼻喷激素、抗过敏药等进行规范化综合治疗,麻醉期间给予相应处理以减少气道黏膜高反应性,降低哮喘发作的风险,以求提高此类患者围手术期的安全,防止严重并发症的发生。

磷酸化STAT3和p53蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达与意义

目的:检测喉鳞状细胞癌细胞中p-STAT3及p53蛋白的表达,探讨它们的临床意义及其相关性。方法:采用免疫组织化学技术,检测p-STAT3及p53蛋白在60例喉鳞状细胞癌和32例取自喉全(或近全)切除者癌旁(>2.0cm)处正常喉黏膜组织中的表达,应用显微图像分析系统测定阳性表达的平均光密度值,并进行统计分析。结果:在喉鳞状细胞癌组织中存在p-STAT3及p53蛋白的高表达;p-STAT3和p53蛋白的表达与喉鳞状细胞癌的临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);在喉鳞状细胞癌组织中p-STAT3和p53蛋白的表达存在正相关关系,相关系数r=0.655 8(P<0.01)。结论:p-STAT3和p53蛋白的表达与喉鳞状细胞癌的发生、发展和转移等生物学行为有关,两者的表达呈正相关关系。

信号转导和转录激活因子3及其靶基因c-myc在喉鳞状细胞癌中的表达与意义

目的:检测喉鳞状细胞癌中信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因及其靶基因c-myc的表达,探讨其临床意义及相关性。方法:采用原位杂交技术和免疫组织化学技术,在mRNA和蛋白2个水平检测STAT3和c-myc基因在56例喉鳞状细胞癌和30例喉全(或近全)切除者癌旁(>2.0cm)正常黏膜中的表达,应用显微图像分析系统测定阳性表达的平均吸收度值,并进行统计分析。结果:在喉鳞状细胞癌组织中存在STAT3和c-myc基因的mRNA和蛋白高表达;STAT3和c-myc基因的mRNA表达与喉鳞状细胞癌的临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01);STAT3和c-myc基因的蛋白表达与喉鳞状细胞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01);在喉鳞状细胞癌组织中STAT3和c-myc基因的高表达呈正相关(r=0.6224、0.7012,均P<0.01)。结论:STAT3基因及其靶基因c-myc的表达与喉鳞状细胞癌的发生、发展和转移等生物学行为有关,两者的表达呈正相关。

miR-483对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miR-483对喉癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法实验分正常组、实验组和对照组,各组设8个复孔,实验组Hep-2细胞转染miR-483 inhibitor,对照组细胞转染miR-483inhibitor NC,正常组仅进行细胞培养未进行任何处理。以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测转染细胞中miR-483表达情况;以CCK-8法检测Hep-2细胞存活率;以Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;进行Hep-2细胞裸鼠成瘤体内实验观察miR-483对喉癌细胞增殖的影响;以Real-time PCR及蛋白质印迹法检测Hep-2细胞Smad4 mRNA及蛋白表达情况。结果Real-time PCR检测结果可见,正常组、实验组和对照组Hep-2细胞中miR-483的表达量分别为1.00±0.00,0.36±0.05,0.96±0.05,干预72 h后,正常组、实验组和对照组Hep-2细胞活率分别为(99.32±0.21)%,(58.66±7.57)%,(99.67±0.42)%,细胞凋亡率分别为(2.36±0.15)%,(15.36±2.47)%,(2.06±0.12)%,正常组和对照组分别与实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Hep-2细胞接种裸鼠后,干预后第10天正常组、实验组和对照组移植瘤体积分别为(296.58±12.52),(125.46±23.69),(305.24±15.26)mm^3,干预后第30天移植瘤体积分别为(1025.46±23.25),(563.48±22.56),(996.52±24.51)mm^3,自药物干预后第10天,实验组裸鼠移植瘤体积明显小于正常组和对照组(P<0.05)。正常组、实验组和对照组细胞Smad4 mRNA相对表达量为0.16±0.02,0.69±0.11,0.18±0.03,Smad4蛋白相对表达量为0.56±0.13,1.24±0.32,0.33±0.05,与实验组比较,正常组和对照组Smad4 mRNA和蛋白相对表达量均降低(均P<0.05)。结论miR-483可以体内及体外抑制Hep-2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与上调Smad4基因转录促进蛋白表达有关。

4种耐药基因蛋白在中晚期喉癌放疗前后的表达及临床意义

目的探讨P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、肺耐药相关蛋白(LRP)和谷胱甘肽-S转移酶(GST-π)在中晚期喉鳞状细胞癌患者放疗前后肿瘤组织中表达及放疗对喉癌耐药基因的影响。方法收集76例中晚期喉癌患者,其中低分化鳞状细胞癌8例,中高分化鳞状细胞癌68例,采用免疫组织化学法检测在不同类型喉癌组织和放疗前后癌组织中P-gp、MRP1、LRP和GST-π的表达强度和分布,分析其表达情况。结果喉鳞状细胞癌具有原发耐药性,P-gp在低分化鳞癌和中高分化鳞癌2种病理类型喉癌组织中呈高强度强阳性表达,与MRP1、LRP和GST-π三种耐药蛋白比较差异有统计学意义(F=8.0839,P=0.0438);MRP1在低分化鳞癌中的表达明显高于中高分化鳞癌中的阳性表达率,其差异有统计学意义(t=9.575,P<0.001);放射治疗后P-gp、MRP1、LRP和GST-π阳性表达率与放射治疗前相比均有增高,其中P-gp在放疗前后表达阳性率分别为(53.26±7.94)%、(79.37±7.73)%,表达差异有统计学意义(t=6.28,P<0.05);MRP1在放疗前后表达阳性率分别为(31.14±8.96)%、(54.76±9.53)%,差异有统计学意义(t=7.35,P<0.05)。结论 P-gp、MRP1、LRP和GST-π在喉鳞状细胞癌中表达存在差异性;放射治疗可以增加喉鳞状细胞癌耐药基因蛋白过表达,特别是放疗后P-gp和MRP1的过表达影响喉癌化疗方案的制定。

CD133+CD44+喉鳞状细胞癌干细胞的致癌性研究及相关微小RNA的鉴定

目的比较CD133+CD44+喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)干细胞与一般喉鳞癌干细胞的致癌能力,并探讨微小RNA(miRNA)在其中发挥的作用。方法培养实体瘤来源的喉鳞癌干细胞和Hep-2来源的喉鳞癌干细胞,通过流式细胞仪分选出CD133+CD44+喉鳞癌干细胞,通过Boyden小室侵袭实验、细胞迁移实验和裸鼠成瘤实验比较CD133+CD44+喉鳞癌干细胞与未筛选的喉鳞癌干细胞的侵袭、迁移和成瘤能力,然后提取两种喉鳞癌干细胞的总miRNA,通过丹麦Exiqon公司的miRNA芯片进行检测和分析比较。结果(1)在Boyden小室侵袭实验中,CD133+CD44+喉鳞癌干细胞与未筛选的喉鳞癌干细胞比较,侵袭细胞更多,细胞侵袭率也更高(80.2%±2.3%比63.9%±3.2%,t=5.011,P=0.027);(2)在细胞迁移实验中,CD133+CD44+喉鳞癌干细胞比未筛选的喉鳞癌干细胞具有更高的迁移率(82.9%±1.1%比70.9%±0.6%,t=4.514,P=0.031);(3)在动物成瘤实验中,CD133+CD44+喉鳞癌干细胞比未筛选的喉鳞癌干细胞成瘤需要注射的细胞数少(1×10^3个比1×10^5个),成瘤率更高(80%比50%)。另外,用miRNA芯片检测CD133+CD44+喉鳞癌干细胞和未筛选的喉鳞癌干细胞的miRNA水平后发现,在CD133+CD44+喉鳞癌干细胞中,有15条miRNA水平明显较高,有3条miRNA水平明显较低。结论CD133+CD44+喉鳞癌干细胞具有更强的侵袭、迁移和成瘤能力,miRNAs的差异表达是其中的一个可能原因。