人脐带间充质干细胞单次静脉注射NOG小鼠组织分布及其分析方法学研究

目的建立并验证小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法学,研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)单次静脉注射后在重度免疫缺陷NOG小鼠体内的组织分布情况。方法建立小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法,进行标准曲线与线性范围、准确度与精密度、稳定性等方法学验证。取NOG小鼠36只,雌雄各半,单次静脉注射给予HUCMSCs 3.5×10^(7)cells/kg,于6、12、24、72 h、1周、2周各取6只小鼠麻醉,采集血液(EDTA抗凝)后解剖,取肺、肾、心脏、肝、大脑、脊髓、胃、小肠、脂肪、皮肤、脾、睾丸(子宫、卵巢)提取DNA,用已验证的小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法测定各组织中HUCMSCs的分布情况。另选取NOG小鼠18只,雌雄各半,分为对照组6只、给药组12只,分别静脉注射0.9%氯化钠注射液、HUCMSCs 3.5×10^(7)cells/kg,给药期间观察小鼠急性毒性反应情况,给药组于给药后72 h、2、4周各取4只动物剖检观察脏器组织大体观情况,取肺组织石蜡切片采用免疫组化法检测线粒体蛋白表达,分析HUCMSCs在肺组织中的定植情况。结果建立的小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法各考察指标均符合验证标准;NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后,主要分布于肺和血液中(给药后1周内),肺组织浓度高于血液,肺组织、血液中HUCMSCs浓度分别在6~24 h、6~72 h之内维持相对平稳水平,之后随时间推移下降,其他组织各采样点均未测得HUCMSCs分布;定植结果显示静脉注射HUCMSCs后72 h可在肺部检测到其存在,2周和4周时则未检测到;单次静脉注射HUCMSCs后NOG小鼠未见明显急性毒性反应。结论建立的HUCMSCs小鼠组织中分布分析方法可靠、可行;NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后主要于给药后1周内分布于肺和血液,72 h主要定植于肺组织;单次静脉注射HUCMSCs具有良好的安全性。

宫内膜干细胞治疗失代偿期肝硬化疗效观察

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择肝硬化失代偿期患者23例,宫内膜干细胞经静脉输注方法移植入肝脏,分别在治疗后第1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月复查肝脏功能(TBIL、ALT、AST)、甲胎蛋白(AFP)、胆碱酯酶(CHE)、肝纤维化等实验室指标,分析临床症状及不良反应情况。结果治疗后23例临床症状及体征明显改善。移植治疗后,在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低,但差异无统计学意义;ALB(34.8 g/L)和CHE(4386 U/L)较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ较治疗前均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内膜干细胞移植治疗可明显改善肝硬化失代偿期患者肝脏功能及临床症状,短期结果安全可靠,不良反应少,值得临床进一步研究。

宫内膜干细胞治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化疗效的初步探讨

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期乙肝肝硬化患者的临床疗效。方法选择乙肝肝硬化失代偿期患者43例,随机分成两组,其中对照组30例,采用拉米夫定、阿德福韦酯抗病毒治疗;实验组13例,在对照组治疗基础上加用宫内膜干细胞治疗。分别在治疗后1、6、12个月检查各组患者肝脏功能、甲胎蛋白、胆碱酯酶、肝纤维化、凝血酶原时间,观察病毒学应答、临床症状及不良反应情况。结果治疗后1、6、12个月,实验组患者ALT、AST、TBIL、ALB、肝纤维化系列(LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ)、CHE、PT等指标较对照组明显改善(ALT:F实验组=11.432,F对照组=8.231;AST:F实验组=13.197,F对照组=9.732;TBIL:F实验组=10.964,F对照组=8.692;Alb:F实验组=2.846,F对照组=3.691;CHE:F实验组=67.428,F对照组=70.285;LN:F实验组=20.462,F对照组=16.390;HA:F实验组=30.421,F对照组=23.521;PCⅢ:F实验组=23.532,F对照组=17.397;IV:F实验组=20.386,F对照组=15.496;PT:F实验组=1.752,F对照组=0.950。P均<0.05);治疗后12个月实验组和对照组HBVDNA阴转率和HBeAg血清转换率均较治疗后6月显著增加,且实验组显著优于对照组(P<0.05);两组患者治疗前后临床症状和体征均有所改善,治疗期间均未发现严重不良反应。结论采用宫内膜干细胞治疗乙肝肝硬化失代偿期患者,肝脏功能及临床症状明显改善,病毒应答率高,短期观察安全可靠,不良反应小,提高了患者的生活质量,值得临床进一步研究。

宫内膜干细胞研究进展

本文介绍新型间充质干细胞—宫内膜干细胞的来源和特征,简述宫内膜干细胞分离、培养和体外扩增的方法;阐述宫内膜干细胞体外诱导分化心肌细胞和神经细胞的潜能,展望宫内膜干细胞的临床应用价值。