仙台病毒核酸测序检测方法的建立

目的建立仙台病毒(SeV)的核酸测序检测方法。方法根据SeV序列设计覆盖不同毒株的通用引物,然后优化成测序引物并摸索建库条件,进行核酸测序和结果分析。结果获得1对特异性强的通用引物,序列为:上游引物5'-GCTGCAAAACGCTGTGGG-3',下游引物5'-TGGRACYTCAGAAAGAATRGG-3';建库条件优化为:第一轮以cDNA为模板用通用引物扩增,第二轮以第一轮产物为模板用测序引物扩增。测序分析可以有效地将SeV与其他微生物区分开,并且精确到TianJin亚株。结论建立了SeV核酸测序检测方法,为后续SeV感染实验动物的检验检疫提供依据。

降解组测序技术在植物miRNA研究中的应用

目前,利用芯片技术和miRNA测序可快速、准确地检测到物种中所含有的miRNA。随着越来越多的miRNA被发现,miRNA靶基因的确定已成为研究miRNA生物学功能的关键。传统的miRNA靶基因的寻找主要依赖生物信息学预测、AGO蛋白免疫共沉淀和荧光素酶法等。随着高通量测序技术的持续革新,出现了一种新的miRNA靶基因的检测方法,即降解组测序(degradome sequencing)法,该方法拥有高通量测序技术、生物信息学分析和RACE验证三者的优势,并已成功应用于拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)和小立碗藓(Physcomitrella patens)等模式植物miRNA靶基因的检测。基于已发表的相关文献和联川生物降解组测序平台,该文对降解组测序技术应用于植物miRNA靶基因的研究进展及其实验原理进行了综述,同时对运用该技术可进行的更深入研究进行了讨论。