2000～2006年杭州市上城区食物中毒事件病原体动态分析

目的：调查分析2000～2006年食物中毒事件的发生原因、病原体组成等,给公共饮食服务行业防止食物中毒事件的发生提供可靠的依据.方法：采集2000年～2006年发生食物中毒时的食品、患者粪便、患者肛拭、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等,进行微生物学检验、副溶血性弧菌分型鉴定和金黄色葡萄球菌肠毒素分型鉴定.结果：2000～2006年共发生食物中毒事件75起,由金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌引起的食物中毒事件发生率为85.33%.有6起食物中毒事件由二种致病菌引起,其中：2002年发生一起由EPEC大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件;2003年发生一次由EPEC大肠埃希菌与副溶血性弧菌、一次由副溶血性弧菌和沙门菌、三次由副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌等两种致病菌引起的食物中毒.结论：说明污染来源来自多方面,加强对食品卫生监督管理,需要全方位干预措施.

杭州市上城区2005-2007年食物中毒事件病原体分析

目的：研究调查分析杭州市上城区2005年-2007年食物中毒事件的病原体动向，重点对副溶血性弧菌菌株进行血清分型，即不同血清型的耐热溶血素基因分析，为防止食物中毒事件的发生提供可靠的依据。方法：对采集自2005年-2007年上城区发生食物中毒事件中的食品、患者粪便、患者肛拭、呕吐物、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等，进行微生物学检验、副溶血性弧菌血清分型，应用PCR技术对其中45株副溶血性弧菌进行耐热直接溶血素基因（TDH）和耐热直接溶血素相关基因（TRH）的检验。结果：2005-2007年共发生27起食物中毒，由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件发生16起（59.26%）。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件发生7起（25.93%）。有4起食物中毒事件由2种及2种以上致病菌引起，其中2起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌和变形杆菌混合感染引起食物中毒；1起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌混合感染引发食物中毒；1起由副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌混合引发食物中毒。1位凉菜制作厨师同时带有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等三种致病菌引发食物中毒。对88株副溶血性弧菌进行血清分型，单独1种血清型副溶血性弧菌食物中毒事件发生14起（70%），由2种或2种以上混合血清型副溶血性弧菌引发食物中毒事件6起（30%）。26起由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件中，88株副溶血性弧菌进行血清分型：检出01型23株（26.14%），检出02型1株（1.14%），检出03型37株（42.05%），检出04型25株（28.41%），检出05型1株（1.14%），检出010型1株（1.14%）。45株不同血清型的副溶血性弧菌，应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因和耐热直接溶血素相关基因（TDH和TRH）的检测分析。结果表明：O1型的16株菌中有15株TDH阳性，1株TDH阴性；O3型的9株菌全部TDH阳性；O4型的20株菌中，17株TDH阳性，3株TDH阴性。45株菌的TRH1和TRH2全部阴性。结论：加强对食品卫生饮食行业的监督管理，提高对食物中毒病原体快速准确检测，以控制减少食物中毒的发生。

2013—2020年浙江温州地区幽门螺杆菌耐药情况分析

背景幽门螺杆菌(H.pylori)感染是胃癌发生的主要病因,但随着抗生素耐药情况的日趋严重,许多地区H.pylori根除率并没有实质性提高。目的了解温州地区2013—2020年H.pylori耐药情况,分析不同时期、不同年龄及不同性别人群的耐药情况差异。方法于2013-01-01至2020-12-31,选择在温州中心医院接受胃镜检查患者47658例,采集胃黏膜标本进行H.pylori分离培养,并对分离培养获得的H.pylori菌株进行左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、四环素和呋喃唑酮6种抗生素的药物敏感性分析。采用χ~2检验比较不同年份、不同年龄段及不同性别人群的H.pylori耐药率。结果2013—2020年温州地区分离的16847株H.pylori菌株存在多重耐药情况。对6种常用抗生素耐药率的统计结果显示:该地区左氧氟沙星、克拉霉素、甲硝唑的人群耐药率较高,分别为32.81%(5536/16874)、26.02%(4390/16874)、95.67%(16144/16874);阿莫西林耐药率低[0.28%(47/16874)],2017年达1.36%(25/1844);未发现四环素和呋喃唑酮耐药菌株存在。2013—2020年,左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林的人群耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.01);甲硝唑的人群耐药率始终处于较高值(>88.00%),各年份比较,差异无统计学意义(P>0.05)。该地区不同性别人群的左氧氟沙星、克拉霉素、甲硝唑耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.01);阿莫西林耐药率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。该地区不同年龄段人群的左氧氟沙星、克拉霉素耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.01);阿莫西林、甲硝唑耐药率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论温州地区不同年度、不同年龄及不同性别H.pylori阳性患者间的人群耐药率存在差异,总体耐药率高,基于甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星等药物的根除治疗方案难以获得理想效果,应鼓励开展药敏实验结果指导下的临床H.pylori精准根除治疗。

2357例幽门螺杆菌感染及抗菌素耐药分析

目的：检测2357例上消化道疾病患者幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染情况及其药物敏感性。方法：对患者胃黏膜组织进行增菌、分离培养、菌落涂片镜检、鉴定；Hp呈阳性者，采用纸片琼脂扩散法（K—B法）进行药物敏感性检测。结果：Hp阳性945例（40．09％）。胃癌、胃炎、消化性溃疡分别为70．27％（26／37），44．40％（737／1660），36．93％（154／417）；胃癌与胃炎、溃疡之间有显著性统计学差异（P〈0．01），胃炎与溃疡之间有明显差异（P〈0．01）。男女性别总感染率分别为59．81％和57．81％，男女性别问差异无显著性统计学差异（P〉0．05），45～55岁为Hp感染多发年龄段。药物敏感试验左氧氟沙星全部敏感；克拉霉素、庆大霉素和痢特灵3种药物的敏感率均在81．90％以上；甲硝唑的耐药率是98．10％（927／945），阿莫西林的耐药率是70．48％（666／945）；且存在多重耐药。结论：Hp是胃癌发生的重要因素，同时也是胃炎和溃疡发病因素。45～55岁之间属于Hp高感染阶段。在治疗时应注意Hp感染菌株对甲硝唑、阿莫西林和克拉霉素等药物耐药。

基于KEGG通路和基因互作网络对溃疡性结肠炎药靶基因的筛选

目的:筛选与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关的药靶基因,利用DAVID通路数据库和基因互做网络分析目标基因的分布和功能,促进UC的研究和新药靶点开发。方法:以ulcerative colitis检索NCBI gene数据库,提取UC相关基因数据,用DAVID分析工具提取基因富集的通路数据。对103个非冗余基因所显著富集的9条KEGG通路进行了分析,同时对富集通路中的基因同HPRD人类蛋白互作网络进行匹配。建立通路中关键基因的基因互做网络。并对所建立的相关子网进行比较,筛选和UC相关的药靶基因。结果:CD40、FAS、TNF、CD86、HLA-DRA、IL2和IL10等20个UC相关基因需要完善研究,AKT1和TNFRSF1A两个基因可能是UC治疗药物间接作用的重要靶点。结论 UC发病与细胞因子-受体相互作用通路、Ig A生产肠道免疫网络等多个通路相关。其中免疫相关通路是UC发病机制中的重要信号传导通路。CD40、FAS、TNF、CD86、HLA-DRA、IL2和IL10等20个UC相关基因在病理和治疗中都占有重要的地位。通过分析疾病相关基因的代谢通路和互作网络,有助于了解疾病的分子病理基础,并为新药设计提供可靠靶点。

依据药物敏感试验根除幽门螺杆菌的临床疗效随访

目的:在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的患者中,根据药物敏感试验选择治疗方案与常规一线治疗方案进行临床疗效优劣的随访.方法:在浙江省嘉兴市第一医院内镜室行胃镜检查的患者中,胃镜检查时取材标本2块,分别送检常规组织病理学检查及组织切片染色检测及H.pylori的分离、培养、鉴定:其中H.pylori培养结果阳性的纳入治疗组,仅组织切片染色检测H.pylori阳性纳入对照组.治疗组根据药敏试验结果治疗10 d,对照组根据标准一线治疗方案治疗10d.治疗结束4 wk后的患者进行复查,任选一种复查方式(H.pylori培养或组织切片染色或14C呼气试验),三项之一阴性者可判断H.pylori根除.结果:H.pylori培养结果阳性的纳入治疗组(n=4680),仅组织切片染色检测H.pylori阳性纳入对照组(n=3505).治疗组根据药敏试验结果选用2种敏感度最高值抗生素参与的四联疗法治疗,对照组选用常规四联疗法,治疗结束4 wk后复查评估根除率.最终,治疗组的根除率为91.18%,比对照组根除率73.07%高,且差异有统计学意义(P<0.05).结论:依据H.pylori的药物敏感试验选择的治疗方案明显优于标准一线治疗方案.

浙江省幽门螺杆菌cagA、vacA基因型的流行病学研究

目的调查浙江地区幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)基因型的分布及其与临床疾病的关系。方法采用特异引物聚合酶链反应(PCR)分析262株幽门螺杆菌的vacA基因多态性分布特点,并对其进行初步统计分析。结果浙江8个地区分离培养的Hp菌株262株,VacA m1b基因型占27.10%(71/262);VacA m2基因型占64.89%(170/262);VacA m1b-m2基因型占4.20%(11/262);不同地区间VacA s区基因型和VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。慢性胃炎分离株中VacA m1b基因型占26.47%(27/102);VacA m2基因型占66.67%(68/102);VacA m1bm2基因型占2.94%(3/102)。消化性溃疡分离株中VacA m1b基因型占29.41%(40/136);VacA m2基因型占61.76%(84/136);VacA m1bm2基因型占3.68%(5/136)。胃癌分离株中VacA m1b基因型占16.67%(4/24);VacA m2基因型占75.00%(18/24);VacA m1bm2基因型占4.17%(1/24)。不同临床疾病间VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论浙江8个地区Hp菌株的优势基因型为cagA+、va-cAs1/m2,vacA的s区和m区的分布与分布个体的临床类型无关。

人细小病毒B19实验诊断技术研究

目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。

浙江省丽水地区幽门螺杆菌临床分离株耐药性分析

目的：了解浙江省丽水地区幽门螺杆菌（HP）对常用抗生素的耐药性状况，为提高该地区HP感染的根除率提供依据。方法对2012年3月至2014年2月丽水地区6家医院12834例胃病患者的胃黏膜标本进行HP分离培养及鉴定，并通过耐药临界点药物琼脂稀释法检测HP菌株对左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、庆大霉素及呋喃唑酮的耐药性。结果共纳入12834例患者，HP的总体率为54.70%。其中甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素的耐药率分别为94.4%、19.76%、16.61%，阿莫西林、庆大霉素及呋喃唑酮的耐药率均为0%。在这些HP临床分离株中还存在大量的多重耐药株，其中左氧氟沙星和甲硝唑的交叉耐药率为18.56%、左氧氟沙星和克拉霉素的交叉耐药率为7.35%、甲硝唑和克拉霉素的交叉耐药率为15.47%，而左氧氟沙星、甲硝唑和克拉霉素的三重耐药株比率为6.92%。结论丽水地区HP临床分离株对甲硝唑的耐药率最高，对左氧氟沙星和克拉霉素的耐药率也达到了较高水平，而对阿莫西林、庆大霉素及呋喃唑酮则均未检测到HP耐药株，因此为提高临床上首次治疗的根除率该地区应首选阿莫西林、庆大霉素和呋喃唑酮作为一线治疗药物，且由于该地区HP对甲硝唑普遍耐药，甲硝唑在该地区已不适合作为HP根除治疗用药。

副溶血性弧菌引起食物中毒的微生物学诊断的研究

目的:为快速诊断由副溶血性弧菌引起的食物中毒和血清群,采取芯片扫描和血清学分群进行研究。方法:取食物中毒患者肛拭、污染环境涂抹样、食品等进行副溶血性弧菌分离鉴定。分离到菌株进行血清学分型和芯片扫描诊断。结果:330份样品,分离到62株(18.79%)副溶血性弧菌,其中:肛拭样品250份,阳性59份(23.60%),涂抹样品52份,阳性3份(5.77%)。血清分型表明,3株副溶血性弧菌血清型为O1型;3株副溶血性弧菌血清分型为O3型。菌株进行芯片扫描能显示副溶血性弧菌阳性反应。结论:实验研究表明,16起由副溶血性弧菌食物中毒事件,主要血清型为O1型和O3型。病原体悬液用芯片扫描能特异性地获得确切的结果。

微生物检测质量控制标样在微生物实验室内质量控制中的应用

目的:利用微生物质量控制标样跟踪检测建立实验室内质量控制保证体系。方法:采用分值计算法检定培养基质量合格的基础上,每月一次产品检测的同时跟踪检测质量控制标样,绘制质量控制曲线图。结果:12次检测结果均在允许误差范围内,且平皿间误差在10%以内。结论:通过质量控制曲线图显示质量保证体系运行良好。

CYP2C19、CYP3A4基因多态性与十二指肠球部溃疡疗效的关系

目的检测肝脏细胞色素氧化酶CYP2C19、CYP3A4的基因多态性，并观察不同基因多态性患者予奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效，以明确CYP2C19、CYP3A4基因多态性对药物治疗效果的影响。方法65例十二指肠溃疡患者分别检测CYP2C19、CYP3A4基因多态性及幽门螺杆菌（Hp），予奥美拉唑治疗及根治Hp治疗，观察治疗后腹痛缓解情况，并复查胃镜，观察溃疡缩小情况。结果在65例患者中，CYP2C19t3基因野生型为43例（66．15％），突变型为12例（18．46％），杂合型为10例（15．38％），CYP3A4＊18未见基因多态性。CYP2C19＊3突变型腹痛缓解时间短于野生型及杂合型（P〈0．01）。治疗后2周CYP2C19＊3突变型患者溃疡缩小率大于野生型及杂合型（P〈0.01），但治疗后4周无明显差异（P〉0．05）。结论在观察病例中可见CYP2C19基因多态性，未见CYP3A4基因多态性，CYP2C19基因多态性影响奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效。

沙门-志贺菌增菌培养基的研究

目的 采用分值计算法研制沙门、志贺菌增菌培养基和制订质量标准。方法 分值计算法。结果 大肠埃希菌菌落平均菌落直径为0．99mm，S=0、17；生长率为15．7％，δρ=3、12；痢疾志贺菌菌落平均菌落直径为1．48mm，S=0．29；生长率为70．2％，δρ=8．98；鼠伤寒沙门菌菌落平均菌落直径为1．65mm，生长率为99．2％δρ=3．41。三株指示菌菌悬液浓度用沙门-志贺增菌培养基稀释10^8～10^-12，培养6h后计数结果：大肠埃希菌10^-10稀释度为1．0cfu／ml；痢疾志贺菌10^-11稀释度为1．0cfu／ml；鼠伤寒沙门菌10^-11稀释度为3、0cfu／ml。质量分值结果表明：大肠埃希菌质量分值≥29．9（其中：菌落直径分值≥10．00；菌落差分值≥14．90；生长率分值≥5．00）。痢疾志贺菌质量分值≥13．05（其中：菌落直径分值≥10、00；菌落差分值≥-1．95；生长率分值≥5．00）。鼠伤寒沙门菌质量分值≥11．65（其中：菌落直径分值≥10．00；菌落差分值≥-3．35；生长率分值≥5．00）。结论 沙门、志贺菌增菌培养基对大肠埃希菌具有较好的抑制作用；对痢疾志贺菌达到促生长的作用；对鼠伤寒沙门菌的生长未受到不良的影响。

基于全基因组测序对双重耐药幽门螺杆菌外排泵基因变异的研究

背景世界上50%以上的人口感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori).随着抗生素的广泛使用,抗生素耐药成为H.pylori感染患者根除失败的主要原因.目前有不少研究报道外排泵基因过表达和耐药的产生相关.目的为了未来的H.pylori感染治疗有更多方法,探索外排泵基因的变异与双重耐药菌株耐药性产生的内在联系.方法使用^(13)C呼气试验及药物敏感试验进行双重耐药菌株及敏感菌株的筛选,用特异性PCR的常规方法进行耐药基因突变位点的验证,基于MiSeq平台,对10例临床菌株进行全基因组测序,以鉴定双重耐药表型与敏感表型的外排泵基因的单核苷酸变体(single nucleotide variants,SNV)并分析,参考菌株使用ATCC26695.结果H.pylori药敏试验结果显示,丽水地区H.pylori对克拉霉素及左氧氟沙星都具有较高的耐药率.采用特异性PCR法在5株临床双重耐药菌株中检测到23S rRNA基因及gyrA的点突变,在5株临床敏感菌株中未检测到.全基因测序检测了涉及多耐药性的TolC同源物的四个基因簇(HP0605-HP0607,HP0971-HP0969,HP1327-HP1329和HP1489-HP1487)的遗传变异.在双重耐药性H.pylori菌株中发现一个突变的SNV.结论丽水地区抗生素使用应严格监控,避免滥用.TolC同源基因的基因簇与H.pylori菌株的抗生素耐药性相关.全基因组测序对基因型与表型的关系有了新的认识.

WLL-1株博卡病毒(Bocavirus)全基因组序列分析

Human bocavirus,which was firstly discovered in 2005,is a new human parvovirus associated with lower respiratory tract infection in children.In this study,a human bocavirus,named WLL-1 isolate,was identified in Wenlin County, Zhejiang Province.The genome of bocavirus WLL-1 has been sequenced and analyzed.Phylogenetic analyses showed that WLL-1 shares 99% homology with other bocaviruses recently reported,but also has some special variations.

大肠埃希菌O157:H7实验室诊断方法研究进展

肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7是一种危害严重的肠道致病菌,可引起人类腹泻的爆发和流行,其快速特异灵敏检测对EHEC O157:H7的预防及疫情的控制具有重要意义。本文对近年来发展起来的EHEC O157:H7实验室诊断方法进行了综述,并对这些方法所存在的问题及应用前景进行了探讨。

2015年浙江省湖州地区幽门螺杆菌常用抗生素耐药监测分析

目的:调查分析浙江省湖州地区幽门螺杆菌感染及抗生素的耐药情况,为幽门螺杆菌的根除提供理论依据。方法:对浙江省湖州市中心医院收集的13 313例胃镜检查患者的胃黏膜标本进行幽门螺杆菌分离培养,并用平板掺入法对幽门螺杆菌进行药敏试验。结果:13 313例胃黏膜标本中幽门螺杆菌分离培养阳性菌株5170株,阳性率为38.83%。5170株幽门螺杆菌对克拉霉素、左氧氟沙星、甲硝唑的耐药率分别为21.80%、29.32%和94.76%,未发现对阿莫仙、呋喃唑酮、四环素耐药的菌株。5170株幽门螺杆菌对克拉霉素和左氧氟沙星的双重耐药率为11.26%,对克拉霉素、左氧氟沙星和甲硝唑的三重耐药率为10.44%。结论:本地区幽门螺杆菌对克拉霉素、左氧氟沙星和甲硝唑均有非常高的耐药率,应重视菌株的分离培养和耐药性检测,为幽门螺杆菌的根除治疗提供理论依据。

小儿人博卡病毒感染临床与实验研究

目的研究人博卡病毒检测方法与小儿感染的临床特征,以提高对小儿人博卡病毒感染的诊治技术。方法采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测患者鼻咽部抽取物、咽拭子和血清标本中的人博卡病毒DNA及特异性抗体,并全面分析感染患儿的各种临床症状、体征及常规实验室检测,同时做远期随访。结果240例急性下呼吸道感染患者的标本中检出人博卡病毒DNA阳性7例,阳性率为2.92%,其临床表现以高热、阵咳为主,实验室检查外周血白细胞、C-反应蛋白、血沉和血生化指标大多正常。X线胸片表现无特异性,远期随访心肺功能良好。结论人博卡病毒是引起小儿急性呼吸道感染的重要病原之一,荧光定量PCR和蛋白免疫印迹是灵敏、特异的检测技术。

基因芯片技术检测3种肠道病原微生物方法的建立

目的:建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的方法。方法:分别选取伤寒沙门氏菌染色体ViaB区域中编码调控Vi抗原表达的基因(vipR)、痢疾杆菌编码侵袭质粒抗原H基因(ipaH)和单核细胞增生利斯特菌溶血素基因(hlyA)设计引物和探针,探针3'端进行氨基修饰,下游引物标记荧光素Cy3。在优化的PCR和杂交反应条件下,进行三重PCR扩增,产物与包括3种致病菌特异性探针的基因芯片杂交。在评价基因芯片的特异性和灵敏度之后,对临床样本进行检测。结果:只有3种目的致病菌的PCR产物在相应探针位置出现特异性信号,其他阴性细菌均无信号出现;3种致病菌的检测灵敏度均可达到103CFU/mL;检测30例临床样本的结果与常规细菌学培养结果一致。结论:所建立的可同时检测伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌和单核细胞增生利斯特菌的基因芯片方法快速、准确,特异性高,重复性好,为3种肠道致病菌的快速检测和鉴定提供了新方法和新思路。