喹乙醇人工抗原的合成与鉴定

采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),以质谱法对其进行鉴定;活化酯法合成全抗原OLA-BSA、OLA-OVA,以紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定之;用OLA-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。紫外扫描测得OLA-BSA、OLA-OVA中OLA-HS和BSA、OVA的分子结合比分别为17.1∶1和12.4∶1;3号小鼠抗血清的效价最高,对OLA的IC50为58.923 ng/mL,与卡巴氧的交叉反应率为1.841%,与其他药物无交叉反应。通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb),为OLA残留免疫学检测方法的建立奠定基础。

四氢大麻酚酸检测试纸条的研制

目的利用胶体金免疫层析技术对因药物滥用致使尿液中产生的四氢大麻酚酸检测试纸条进行研制。方法采用柠檬酸三钠法还原氯金酸制备胶体金。结果确立了制备四氢大麻酚酸检测试纸条的最佳条件:标记10μg/mL的抗四氢大麻酚酸单克隆抗体,将金标抗体按喷量2.0μL/cm喷涂在已处理的聚酯膜上,最后将四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白结合物和羊抗鼠按0.5、1.0mg/mL包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上,经过37℃烘箱干燥16h,组装制备四氢大麻酚酸检测试纸条。结论这种方法能在3～5min内快速检测出尿液中残留的最小浓度为50ng/mL的四氢大麻酚酸。

3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺单克隆抗体的制备

目的：制备抗3，4-亚甲基二氧甲基苯丙胺（MDMA）小鼠单克隆抗体（mAb），初步鉴定其特性，为MDMA快速检测方法的开发奠定基础。方法：将摇头丸与丁二酸酐反应生成摇头丸丁二酸酐的羧基衍生物（MDMA-HS），通过活性酯法MDMA—HS偶联于载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA），合成免疫抗原MDMA-HS-BSA和检测抗原MD—MA—HS-OVA。将MDMA—HS—BSA免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株19A11。结果：将该细胞株注射BALB／c小鼠制备腹水mAb。腹水纯化后效价为1：1．6×10^5，属于IgG1型。MDMA mAb的灵敏度为0．93μg／L，IC50为6．07μg／L。mAb与大麻、麻黄碱、氯胺酮、苯丙胺、甲基苯丙胺、吗啡、可卡因的交叉反应率均小于0．3％。结论：制备出的MDMA mAb为研制MDMA的快速检测方法奠定了基础。

GQDs/WS_(2)/Fe_(3)O_(4)磁分离适配体荧光传感器构建及其在甲胎蛋白中的应用

以聚乙二醇化石墨烯量子点标记的适配体(GQDs-PEG-Apt)作为甲胎蛋白(AFP)的特异性识别分子和能量供体,以WS_(2)/Fe_(3)O_(4)纳米复合物为单一能量受体,构建磁分离适配体荧光传感器并用血清AFP定量检测。样本中没有AFP时,能量供体与受体间π-π堆积作用和非辐射共振能力转移(FRET)令GQDs-PEG-Apt荧光猝灭;存在AFP时,GQDs-PEG-Apt与靶标结合并从WS_(2)/Fe_(3)O_(4)纳米复合物表面脱离,体系荧光强度得以恢复;经过磁性分离后,传感体系上清液487 nm处荧光强度随AFP浓度增大而增强;浓度在5~1000 ng/mL范围内,传感体系荧光相对恢复值与AFP浓度呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.989。构建的传感器具有良好的特异性,可实现血清AFP定量检测,其检测限(LOD)为0.5 pg/mL,相对标准偏差(RSD)为3.32%~6.41%,回收率为91.92%~99.28%。

一种新型可替宁抗原的合成

合成了(S)-可替宁半抗原及人工抗原,并鉴定其是否合成成功。以(S)-可替宁为起始原料,经硝化、还原和羧基化等一系列反应得到(S)-可替宁半抗原,再通过DCC法将半抗原与BSA偶联得到人工抗原;(S)-可替宁半抗原经HPLC-MS结构确认,人工抗原经紫外扫描和免疫学方法鉴定,结果表明目标半抗原及人工抗原合成成功。通过本文的合成方法可以得到活性强、免疫性强的人工抗原。

曲马多抗原的合成

合成曲马多半抗原及人工抗原,并鉴定其是否合成成功。以(±)-曲马多为起始原料,经脱甲基和羧基化反应得到(±)-曲马多半抗原,再通过DCC法与BSA偶联得到人工抗原;曲马多半抗原经HPLC-MS结构确认,人工抗原经紫外扫描和活性测试鉴定。鉴定结果表明目标半抗原及人工抗原合成成功。