嵌合口蹄疫病毒VP1抗原基因的重组脑心肌炎病毒的构建及鉴定

将口蹄疫病毒(FMDV)VP1全长、VP1 B细胞表位(135~160、198~213aa)和T细胞表位(20~40aa)组合为不同长度分别插入脑心肌炎病毒(EMCV),构建嵌合FMDV VP1重组EMCV。通过融合PCR及酶切的方法,将外源片段插入EMCV L蛋白第5、6位aa之间,得到重组质粒pWSK-EMCV-FMDV VP1、pWSK-EMCV-FMDV VP1(TB)和pWSK-EMCV-FMDV VP1(2TB),将其转染至BSR T7/5细胞拯救重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB),并在BHK-21细胞传代分析重组病毒的生物学特性。结果显示,PCR扩增得到1344 bp、909 bp和1155 bp的外源基因融合片段,表明成功构建了3种重组质粒;3株重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB)在BHK-21细胞传至F5代,病毒滴度分别为1×10^(7.85)TCID_(50)/mL、1×10^(8.06)TCID_(50)/mL、1×10^(7.76)TCID_(50)/mL;通过RT-PCR、IFA等方法对F5代重组病毒进行鉴定,显示重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)可以稳定遗传,且病毒复制水平与亲本病毒相一致,而其他2株重组病毒在传代过程中缺失。结果表明,本研究构建了3个重组EMCV质粒,转染细胞后携带FMDV VP1抗原表位的重组病毒稳定遗传,为后续以EMCV为骨架构建活载体疫苗奠定了理论基础。