桑葚提取物对脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的探讨桑葚提取物(ME)对脂多糖(LPS)致心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及分子机制。方法以正常培养的H9c2细胞作为对照组;用10 mg/L LPS处理的H9c2细胞作为LPS组;分别用50、100、200 mg/L的ME处理H9c2细胞,再用10 mg/L LPS处理,作为ME低、中、高浓度组。将si-NC、si-S100B转染至H9c2细胞中,再用10 mg/L LPS处理,作为LPS+si-NC组、LPS+si-S100B组;将pcDNA、pcDNA-S100B转染至H9c2细胞中,用200 mg/L ME处理,再用10 mg/L LPS处理,作为LPS+ME+pcDNA组、LPS+ME+pcDNA-S100B组。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、S100钙结合蛋白B(S100B)的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测S100B mRNA表达水平。结果不同浓度ME处理的心肌细胞中TNF-α、IL-6的分泌水平降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,Bax和S100B表达水平均显著降低,且呈浓度依赖性。干扰S100B表达能抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,S100B过表达则逆转了ME对LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。结论ME可抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,其机制可能与下调S100B有关。

内质网应激相关蛋白1过表达对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的研究内质网应激相关蛋白1(SERP1)过表达对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠胚胎H9c2心肌细胞凋亡的影响。方法2018年1—12月将中国科学院上海细胞库大鼠H9c2心肌细胞系建立H/R损伤大鼠心肌细胞模型,采用pCMV6质粒为载体构建内质pCMV6-网应激相关蛋白1(pCMV6-SERP1)过表达重组质粒,分别设H9c2心肌细胞为正常对照组(NC组),H/R损伤(缺氧4 h/复氧4 h)H9c2心肌细胞为H/R组,H/R损伤H9c2心肌细胞转染pCMV6空质粒为H/R+pCMV6组,H/R损伤H9c2心肌细胞转染pCMV6-SERP1过表达重组质粒为H/R+pCMV6-SERP1组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各种H9c2心肌细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染技术检测各组H9c2心肌细胞凋亡率,采用实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹法分别检测各组细胞SERP1蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果与NC组[(1.06±0.21)、(0.41±0.07)]比较,H/R组、H/R+pCMV6组H9c2心肌细胞SERP1 mRNA[(0.47±0.09)、(0.48±0.08)]及蛋白表达水平[(0.25±0.04)、(0.26±0.05)]显著降低,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞SERP1 mRNA(2.94±0.52)及蛋白表达水平(0.83±0.12)显著增加(P<0.05),与H/R组、H/R+pCMV6组比较,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞中内质网应激相关蛋白1微小RNA(SERP1 mRNA)及蛋白水平显著升高(P<0.05)。与NC组[(100.00±00.00)%、(4.45±0.62)%]比较,H/R组、H/R+pCMV6组、H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞存活率[(49.86±5.14)%、(48.75±5.23)%、(89.72±8.61)%]、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平显著降低(P<0.05),H9c2心肌细胞凋亡率[(35.84±4.13)%、(33.66±4.07)%、(10.96±1.74)%]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与H/R组、H/R+pCMV6组比较,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞中存活率、Bac-l蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论SERP1过表达可能通过上调Bacl-2蛋白,下调Bax、Caspase-3蛋白表达,对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡有一定保护作用。