ATP生物荧光增幅法在微生物检测中的可行性研究——应用于化妆品领域

为探究ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中应用的可行性,开展了富集培养基促生长能力测试和产品适用性试验。收集了与化妆品原料及其生产环境相关的47株代表性菌株,在富集培养基MTAT中生长良好,ATP生物荧光增幅检测结果均为阳性。分别选取了清洁类、护理类、美容修饰类中6种化妆品,接种6株《中国药典》(2020版)参考菌株,进行了产品适用性试验。样品影响测试结果表明:培养基空白的信号值在167~285 RLU,6种产品的本底信号值在87~199 RLU,远低于3倍培养基空白信号值的要求;ATP回收率在73.8%~106.8%,均高于25%的推荐值,符合检测方法的要求。接菌试验结果表明,供试样品的检测结果均为阳性,化妆品的抑菌作用可被有效消除。因此,ATP生物荧光增幅法具有在化妆品及相关领域开展微生物快速筛选与检测的良好应用前景。

ATP生物荧光增幅法在化妆品微生物检测中的适用性研究

收集了不同功能宣称、作用部位、产品剂型、使用人群的普通化妆品和特殊化妆品,共计17个品牌34种市售产品,开展了ATP生物荧光增幅法的方法适用性研究。通过样品影响测试选择本底荧光信号值符合方法要求的产品进行接菌试验,将大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Canidia albicans)和黑曲霉(Aspergillus niger)按照目标浓度10~100 CFU/g接种于供试化妆品中,根据接菌试验结果评价ATP生物荧光增幅法的适用性。结果表明,31种化妆品本底荧光信号值在45~526 RLU之间,均小于3倍空白培养基信号值,符合检测方法要求;3种产品部分批次的荧光信号值高于3倍空白培养基信号值,未通过样品影响测试。27种供试产品接菌试验全部阳性检出,可使用ATP生物荧光增幅法进行微生物检测;4种供试产品均存在部分菌株未能检出的现象,需采用稀释法、中和法或膜过滤等方法开展进一步研究。综上,ATP生物荧光增幅法用于化妆品微生物检测有效可行,可推广应用于化妆品中微生物污染样品的快速筛查。

ATP生物荧光增幅法在控制菌检测中的验证研究——应用于化妆品领域

参照《中国药典》(2020版)药品微生物检验替代方法验证指导原则中定性检验方法的验证要求,选取了清洁类、护理类、美容修饰类等6种化妆品,从专属性、检测限、重现性和耐用性4个方面开展了ATP生物荧光增幅法与《化妆品安全技术规范》(2015版)中耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌检验标准方法的部分等效性研究。结果显示,ATP生物荧光增幅法的专属性和耐用性良好;采用该方法检测3种控制菌代表菌株的LOD 50分别为0.20、0.35和0.14 CFU/g,经Fisher exact test统计分析,ATP生物荧光增幅法检测限均显著优于相应标准方法(P<0.05);3家不同实验室使用2种方法对相同人工污染样品的检测结果无统计学差异(P>0.05),说明ATP生物荧光增幅法重现性良好。研究结果表明,ATP生物荧光增幅法与《化妆品安全技术规范》(2015版)中耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌检验的标准方法具有部分等效性,可实现化妆品中各类微生物在48 h的同步检测。