pDNA质粒在一次性生物反应器中的放大生产研究

【目的】探索大肠杆菌(E.coli)菌种复苏后跳过三角摇瓶直接接种一次性WAVE生物反应器进行菌种扩增,并放大至一次性XDR生物反应器进行质粒放大生产的可行性,建立GMP级质粒在全一次性上游平台进行工业化放大生产的工艺。【方法】通过碳氮比优化,筛选并获得不含任何动物源成分的基础培养基和补料培养基;菌种冻存管室温融化后以低密度接种三角摇瓶和WAVE反应器,考查菌种低密度接种的可行性,比较三角摇瓶和WAVE反应器进行菌种扩增的差异,建立菌种在WAVE反应器中的扩增工艺;随后将菌种扩增至50LXDR生物反应器进行质粒的放大生产。【结果】与LB培养基相比,优化的不含任何动物源成分的基础培养基使菌体最高密度和质粒产量分别提高43%和77%;以1∶1000-1∶8000低密度接种WAVE反应器,菌种比生长速率达到(0.65±0.065)/h,WAVE反应器展现了更好的过程参数控制,通过一级WAVE种子罐可直接为50-200 L生产罐提供种子细胞;质粒在一次性50LXDR反应器中的放大生产,最高菌体密度和质粒产量分别达到53OD和340mg/L,质粒比生产速率达到6.42 mg/L/OD_(600),比常规质粒比生产速率提高2倍以上,超螺旋质粒比例达到90%,较高的上游收获超螺旋比例为下游质粒两步层析纯化提供了可能。【结论】建立了大肠杆菌通过WAVE反应器进行菌种扩增,通过一级种子罐直接接种生产罐进行质粒放大生产的工艺,为GMP级别质粒在50-200L一次性生产平台中的放大生产建立了生产工艺。

探析医疗行业实验室以及项目现场EHS管理

随着我国经济的高速发展,各地的各种建设都在高速的进行。工业化在今天的城市建设中发挥着重要作用,但随之而来的环保和安全问题也成为了不可回避的重要问题。对我国来说,保护环境、安全生产的议题多次被强调,解决日常工作和生产中的突出问题,使社会与环境可持续发展是全民的责任和义务。本文结合日常医疗行业实验室和项目服务时涉及到的EHS问题,浅谈当下实验室运行和项目实施过程中的一些EHS经验分享,并畅想和明确未来EHS管理的发展方向。

建筑工程项目管理现状及控制措施

随着建筑工程的建设规模的不断扩大,现场对建筑工程的质量管理已成为建设项目质量保证的重要内容。在建筑工程施工管理过程的这一阶段,经常由于技术管理方法不足等问题制约了工程的有效开展。因此,施工单位应增加相关管理人员注意现场项目管理并结合实际施工现阶段,综合控制建筑施工技术应用,为施工现场施工技术质量提供保障。施工单位应注重现场施工项目质量管理,并结合工程现阶段的实际情况,综合考虑有可能存在的施工风险,做好风险预警工作,为工程质量提供保障。