奥沙利铂联合AG1478调控活性氧抑制PI3K/AKT通路对肺癌的影响

目的探究表皮生长因子酪氨酸激酶抑制药AG1478联合奥沙利铂(OXA)对非小细胞肺癌细胞H1299的影响。方法将体外培养的H1299细胞分为对照组(常规培养,不加药)、OXA-25组、OXA-50组、OXA-100组(分别用25、50和100μmol·L^(-1)OXA处理)、AG-20组(20μmol·L^(-1)AG1478处理)和OXA+AG组(25μmol·L^(-1)OXA+20μmol·L^(-1)AG1478处理)。用MTT法检测细胞存活率计算半数抑制浓度(IC50);用活性氧(ROS)探针H2DCFDA检测细胞ROS水平;用丹酰尸胺(MDC)法检测细胞自噬情况;用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、自噬蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达水平。结果OXA作用于H1299细胞的IC50为91.09μmol·L^(-1);AG1478作用于H1299细胞的IC50为31.83μmol·L^(-1)。对照组、OXA-25组、OXA-50组、OXA-100组、AG-20组和OXA+AG组的ROS水平分别为1.00±0.03、1.15±0.02、1.76±0.04、2.89±0.02、1.05±0.01和3.20±0.03;MDC水平分别为1.00±0.04、1.10±0.02、1.16±0.02、1.46±0.04、1.04±0.01和1.31±0.02;p-PI3K蛋白表达水平分别为1.12±0.05、0.88±0.06、0.72±0.07、0.60±0.05、0.91±0.07和0.64±0.09;p-AKT蛋白表达水平分别为1.09±0.04、0.87±0.08、0.77±0.07、0.63±0.05、0.76±0.05和0.46±0.03;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.82±0.03、0.91±0.04、1.06±0.28、1.11±0.03、0.87±0.04和1.27±0.10;LC3-Ⅱ蛋白表达水平分别为0.65±0.08、0.82±0.11、1.08±0.12、1.38±0.09、0.72±0.11和1.38±0.15。OXA+AG组、OXA各剂量组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OXA+AG组的上述指标与OXA各剂量组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论AG1478联合OXA作用于非小细胞肺癌细胞H1299,可升高ROS水平抑制PI3K/AKT信号通路激活,进而诱导细胞发生自噬。