五种中药方药对小鼠急性肺损伤的治疗作用

目的探讨新冠治疗中使用的五种中药方药—湿毒郁肺方、内闭外脱方、气阴两虚方、银翘藿朴方、荆防藿朴方在小鼠急性肺损伤模型中的治疗效果及其潜在作用机制。方法实验小鼠分为7组,分别为正常组、急性肺损伤组以及五个中药方药治疗组。采用脂多糖滴鼻法建立小鼠的急性肺损伤模型。治疗组小鼠分别予以相应的中药方剂进行灌胃治疗,而急性肺损伤组和对照组给予等量0.9%氯化钠注射液。治疗1周后,处死小鼠,收集肺组织进行苏木精-伊红染色和q-PCR检测,以评估肺组织损伤及炎症因子表达情况。结果与正常对照组比较,急性肺损伤组小鼠的肺组织出现明显的病理损伤,五种中药方药治疗组的小鼠在苏木精-伊红染色中显示出肺组织病理损伤有明显减轻。通过q-PCR分析发现,与急性肺损伤组比较,五种中药方药治疗组IL-6 mRNA含量均有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论五种中药方药均能有效减轻小鼠急性肺损伤症状,其作用机制可能与其对炎症因子表达的抑制作用有关。这些结果为中药在新冠肺炎及相关肺部疾病治疗中的应用提供一定的实验依据,并展示中药在治疗急性肺损伤中的潜在价值。

白藜芦醇抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并降低mTOR蛋白磷酸化水平

目的将不同浓度白藜芦醇作用于人肝癌SMMC-7721细胞,研究中药提取物对肝癌的抑癌机制。方法使用不同浓度的白藜芦醇作用于人SMMC-7721细胞,生长曲线和克隆形成实验检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞的影响,流式细胞术检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞细胞周期的作用,Westren blot方法检测mTOR及其磷酸化水平变化。结果与对照组比较,白藜芦醇组可抑制SMMC-7721细胞增殖,呈量效依赖关系,且差异有统计学意义(P<0.01);细胞周期检测显示白藜芦醇可阻滞SMMC-7721细胞于G_0/G_1期;Westren blot提示白藜芦醇可降低mTOR磷酸化水平。结论白藜芦醇在一定浓度范围内可抑制人SMMC-7721细胞增殖,阻滞细胞周期于G_0/G_1期,其抑制机制可能与白藜芦醇降低mTOR磷酸化水平有关。

毛花苷C促进肝癌细胞Huh-7凋亡并增强caspase-7的活化

目的研究毛花苷C对肝癌Huh-7细胞增殖的影响及其对caspase-7的活化作用。方法以不同浓度的毛花苷C作用于Huh-7细胞,通过细胞增殖抑制实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对Huh-7细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测其对Huh-7细胞凋亡的影响,并用激光共聚焦显微镜采集细胞凋亡染色图像;通过Western blot分析细胞凋亡蛋白caspase-7的活化水平。结果毛花苷C能明显抑制Huh-7细胞的增殖,实验组与对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05),并呈量效依赖关系;通过流式细胞仪与激光共聚焦显微镜,观察到毛花苷C诱导凋亡细胞数增加;Western blot检测结果显示,毛花苷C可增强凋亡相关酶caspase-7的活化水平。结论毛花苷C明显促进肝癌Huh-7细胞凋亡并增强凋亡相关酶caspase-7的活化水平。

转化生长因子β信号通路与肝癌的研究进展

肝癌的发病机制较复杂,是多因素、多基因、多阶段共同参与的结果,其中转化生长因子β(TGF-β)在肝癌的发生发展过程中具有重要作用。虽然TGF-β信号通路的研究已取得了一定发展,但对于TGF-β在肝癌中的转导机制尚未有明确定论。应用小鼠模型癌症基因组图谱分析及基因工程处理等综合方法可以剖析TGF-β信号通路上下联系的驱动角色,TGF-β可作为肿瘤抑制因子,具有调节免疫机制的作用;同时与上皮-间质转化过程存在关系,是肿瘤发生的启动因子;但是在肝癌干细胞产生过程中TGF-β又具有抑制作用,其在肿瘤不同进展阶段亦表现出不同的生物学效应。

毛花苷C促进肝癌SMMC-7721细胞凋亡及抑制survivin的表达

目的:通过毛花苷C作用于人肝癌SMMC-7721细胞,研究其对SMMC-7721细胞增殖的影响初步探讨其作用机制.方法:使用不同浓度毛花苷C干预S M M C-7721细胞,通过细胞增殖实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖的作用;通过流式细胞仪检测毛花苷C对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响;采用Western blot技术分析细胞凋亡抑制基因survivin的表达.结果:毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用,各加药组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),并呈现剂量-效应相关关系;流式细胞术显示,毛花苷C将S M M C-7721细胞阻滞于S期,并诱导其凋亡;Western blot检测结果显示毛花苷C下调SMMC-7721细胞内survivin蛋白的表达.结论:毛花苷C明显抑制SMMC-7721细胞增殖,将细胞阻滞在S期并诱导其凋亡.该机制可能与下调survivin的蛋白表达有关.

表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建

目的:构建一种高效转染h CD4和h CCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达h CD4和h CCR5的质粒载体PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用q RT-PCR方法检测293T细胞中h CD4/CCR5的m RNA表达。将本慢病毒载体转染于小鼠白血病细胞L615,应用q RT-PCR检测细胞内h CD4/CCR5 m RNA的表达及对HIV-1的易感性。结果:成功构建PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5质粒表达载体,包装成的慢病毒载体在293T细胞中具有h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05);转染于L615细胞亦表现出h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05),并具备了HIV-1入胞感染的特点。结论:成功建立h CD4和h CCR5基因双启动的慢病毒载体,可使目的细胞高效表达h CD4及h CCR5分子,对HIV-1宿主细胞的制备、HIV/AIDS的发病机制和抗病毒研究具有积极的意义。

大肠杆菌协同索拉非尼的抗肝癌作用

目的探讨利用大肠杆菌联合索拉非尼对Walker-256移植性肝癌的影响及其作用机制。方法利用大肠杆菌和索拉非尼协同处理构建好的Walker-256大鼠肝癌模型，观察经不同方式处理后，肝癌的发展情况以及药物的不良反应。采用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组织化学等技术评估药物对肿瘤的作用效果，并研究大肠杆菌联合索拉非尼抗肝癌的机制。结果大肠杆菌联合索拉非尼能明显抑制肿瘤的生长（P＝0.015），且血培养结果显示未发现大肠杆菌残留。通过病理检查发现，索拉非尼和大肠杆菌联合组的癌旁存在较小的炎症，坏死也更加明显，肿瘤的重量更小，联合组无残癌率达100%，大肠杆菌组无残癌率达40%。免疫组织化学结果显示，大肠杆菌组细胞角蛋白（CK）表达下调，而血管内皮生长因子（VEGF）、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、增殖细胞核抗原（PCNA）表达上调，这些结果表明，经大肠杆菌干预后肿瘤发生间充质转化，而联合索拉非尼处理可使CK表达上调，下调VEGF、Vimentin、MMP-9、PCNA的表达，一定程度上抑制该现象。结论大肠杆菌联合索拉非尼能有效抑制肿瘤的生长，两者联合应用具有协同抑制肝癌的作用。

表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立

目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达。结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5mRNA凝胶电泳可见193bp和75bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P<0.01);Western blot检测可见55.0×10~3(hCD4)和40.6×10~3(hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性。转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1RNA均显著升高(P<0.05)。结论成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究。

补体在酒精性肝病中作用研究进展

酒精性肝病（ALD）是世界范围内慢性肝病的最重要病因之一，随着ALD发病率逐年增长，此病对人类健康的危害日益严重，备受全世界关注。ALD的发病机制非常复杂，目前尚未清楚其确切发病机制。研究证实活化的补体成分参与ALD发病进程，预示通过补体干预改善ALD的新思路，本文就补体在酒精性肝病中的作用及发病机制研究进展做一综述。