新辅助化疗联合保肢手术治疗四肢骨肉瘤的临床研究

目的研究新辅助化疗联合保肢手术治疗骨肉瘤的临床效果。方法根据既往治疗骨肉瘤方法的不同,将56例患者分为对传统保肢组(A组)和现代保肢组(B组),各28例。A组用采用传统保肢方案,即保肢手术+术后化疗方案进行;B组采用现代保肢方案,即新辅助化疗+保肢手术+术后化疗方案进行。化疗方案均采用CTX+VCR+MTX+ADM方案,比较两组转移/复发率、术后1年、2年及3年生存率、肢体功能、临床疗效情况。结果比较两组的转移/复发率及3年后的死亡率,B组低于A组(P<0.05);肢体功能优良率及临床疗效,B组高于A组(P<0.05)。结论新辅助化疗联合保肢手术能够降低骨肉瘤患者转移/复发率、死亡率,改善肢体功能,提高临床疗效。

BMP-2和EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间充质干细胞的研究

目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)并观察其生物学特性,通过腺病毒介导人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)和EGFP基因转染兔BMSCs后,观察BMP-2和EGFP的表达情况。方法通过密度梯度离心联合贴壁法,分离、培养兔BMSCs,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记,体外诱导兔BMSCs向成骨细胞方向分化。转染后,免疫细胞化学染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测外源基因的表达。结果兔BMSCs周期约有56.84%处于G1期;CD44表达阳性,CD45表达阴性;经成骨细胞诱导后,Ⅰ型胶原免疫组织化学染色阳性,茜素红染色阳性。转染后,Western blot及免疫细胞化学染色显示细胞内BMP-2有较强的表达。结论成功分离、培养兔BMSCs,并鉴定其具有成骨分化能力;构建的Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,并能稳定表达BMP-2目的基因。

Ad-hBMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞体外骨生成的实验研究

目的观察Ad-h BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外骨生成中钙化斑形成,并对钙化斑元素构成进行研究。方法用携带h BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞,通过RT-PCR检测转染后BMSCs h BMP-2基因的表达,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察转染后细胞形态改变和钙化斑的形成,结合扫描电镜和X线能谱分析(SEM/EDS)技术观测钙化斑表面微观形貌及其元素构成。结果 RT-PCR检测转染后BMSCs表达h BMP-2目的基因,细胞形态向成骨方向分化,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,电镜下见钙化灶点状散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。X射线能谱分析显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比(Ca/P)为1.53。结论 Ad-h BMP-2/GFP能成功转染兔BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨方向分化,并具备较好的骨生成能力。

不同途径注射鼠神经生长因子对断指再植术后感觉恢复的疗效评估

目的:探讨不同途径注射鼠神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对断指再植术后感觉恢复的影响。方法:将断指再植成活59例66指纳入本研究,随机分为鞘膜内注射组、肌肉注射组及对照组。鞘膜内注射组于神经鞘膜内一次性注射NGF 7.5μg。肌肉注射组术后每日臀部肌肉注射NGF 30μg,连续14 d。对照组局部及全身均未使用神经营养药物。术后3、6个月随访,测定患指指端两点分辨觉距离。结果:术后3个月鞘膜内注射组优于其他2组,差异具有显著性(P<0.05)。术后6个月鞘膜内注射组与肌肉注射组比较疗效无明显差异(P>0.05),但均优于对照组(P<0.05)。结论:NGF能促进断指再植术后感觉功能恢复,神经鞘膜内注射NGF早期疗效优于肌肉注射。

Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞前后生物学特性的研究

目的对Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)前后的生物学特性进行观察。方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离获取第10代兔BMSCs,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD29的表达,用携带BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞。分别通过倒置荧光显微镜下观察转染前后细胞形态改变,MTT法分析转染前后细胞增殖的情况,体外Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节茜素红染色以观察转染前后细胞的成骨分化情况,Western Blot检测转染前后细胞内目的蛋白表达。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能获取高纯度第10代兔BMSCs,流式细胞仪检测显示CD44、CD29阳性,CD45阴性。Ad-BMP-2/GFP转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,细胞形态向成骨方向分化,在短时间内能促进兔BMSCs的增殖(P<0.05),Ⅰ型胶原免疫组化染色、茜素红染色均呈阳性,Western Blot显示细胞内稳定表达BMP-2目的蛋白。结论 Ad-BMP-2/GFP能成功转染兔骨髓间充质干细胞并能改变其生物学特性。

绿色荧光蛋白标记兔BMSCs体外成骨的定量能谱分析

目的观察绿色荧光蛋白(GFP)标记的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨诱导后形态学改变和体外骨生成中矿化钙结节的形成,并结合扫描电镜和X射线能谱分析技术(SEM/EDS)对矿化钙结节元素进行定量能谱分析。方法用携带GFP基因的腺病毒转染兔BMSCs进行示踪标记,并诱导细胞向成骨方向分化,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察成骨诱导后细胞形态改变和矿化钙结节的形成,结合SEM/EDS技术观测矿化钙结节的表面微观结构及其元素构成。结果腺病毒介导GFP基因(Ad-GFP)转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,经成骨诱导后细胞形态向成骨方向分化,并形成不透光的矿化钙结节,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,SEM下见矿化钙结节散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。EDS分析显示矿化钙结节主要组成元素与正常骨组织相同,其钙磷比(Ca/P)为1.55,接近正常骨组织钙磷比1.49。结论 AdGFP能成功转染并标记兔BMSCs,成骨诱导后BMSCs向成骨方向分化,具备较好的骨生成能力,BMSCs体外矿质化成骨过程与体内基本相同。

组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究

目的：用绿色荧光蛋白（ GFP）标记结合扫描电镜和X射线能谱分析（ SEM/EDS）技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨（ DBM ）支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d 时,细胞内 GFP 有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。 SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。 EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比（ Ca/P）为1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。

金属颗粒引起人单核细胞内氧化应激水平变化研究

目的金属假体以其良好的性质在关节置换中得到广泛应用。文中探讨金属假体使用过程中产生的金属颗粒刺激对人单核细胞内氧化应激水平的影响。方法抽取15名健康志愿者外周血,离心后吸取单个核细胞,将细胞进行体外培养,分别加入将钴颗粒、铬颗粒、铁颗粒、钛颗粒形成钴、铬、铁、钛颗粒组,并使颗粒浓度最终约达到20×109个/mL。对照组加入等渗盐水。分别在刺激后6、12、24、36、48h检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH)含量。结果单核细胞与金属颗粒共培养6、12、24、36、48h后,经统计学分析各颗粒组MDA、ROS水平均高于对照组水平(P<0.05)。钴、铬、铁颗粒组MDA、ROS水平均高于钛颗粒组(P<0.05);各颗粒组SOD、GSH水平均低于对照组(P<0.05)。钴、铬、铁颗粒组SOD、GSH水平均低于钛颗粒组(P<0.05)。结论金属颗粒能导致体外培养的单核细胞细胞内氧化应激水平升高,降低细胞内的抗氧化物酶水平,钴、铬、铁颗粒的诱导活性强于钛颗粒。氧化应激在金属颗粒介导的骨溶解中可能起到了关键作用。

最新进展的转基因技术在骨与软骨缺损修复中的应用

背景:组织工程技术在骨与软骨的修复方面已经取得巨大进步,其中转基因技术的引入在最近几年也引起人们广泛的关注。目的:总结近5年来转基因技术在骨与软骨缺损修复中的最新研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库和PubMed数据库2007年1月至2012年3月关于转基因技术治疗骨与软骨缺损方面的文献,中文检索词"基因,治疗,骨,软骨,缺损"。英文检索词"gene,therapy,bone,cartilage,defect",最终纳入22篇符合要求的文献。结果与结论:基因治疗为骨和软骨再生带来了一种新的治疗理念,它可以把具有特异性的目的基因精确转移入靶细胞内,并特异性的表达。目前应用于骨与软骨缺损的基因主要包括骨形态发生蛋白,转化生长因子,碱性成纤维细胞生长因子,胰岛素样生长因子,血管内皮细胞生长因子,Bcl-xl基因等。应用基因治疗可以诱导骨与软骨的形成,为骨与软骨的修复提供了崭新的途径。

足跟部皮肤软组织缺损修复方法比较

目的探讨修复足跟部皮肤软组织缺损的最佳方法。方法比较32例8种不同皮瓣修复足跟部软组织缺损的临床效果。结果修复足跟部皮肤软组织缺损以足底内侧岛状皮瓣转移和足底内侧组合皮瓣转移的效果最为理想。结论足底内侧岛状皮瓣转移和足底内侧组合皮瓣转移修复足跟部皮肤软组织缺损,操作简便、安全有效,外观及功能恢复最佳,具有很好的推广应用价值。

Ⅱ型胶原降解产物C2C对骨关节炎早期诊断与社区筛查的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是老年人群中最常见的关节疾病。如何早期诊断关节软骨损伤成为目前OA研究的重点和难点。软骨的主要组成是Ⅱ型胶原,所以其合成和降解所产生的生物学标志物已成为研究重点。对关节滑液、血清、尿中的生物学标志物的检测可以早期诊断疾病、监测疾病的发展、了解机体对治疗药物的反应。

慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体联合神经生长因子过表达促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖

背景:P75神经营养因子受体(P75 Neurotrophin receptor,P75^NTR)是神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的受体之一。在各种细胞组织中发挥着促进增殖或凋亡的双重作用,且P75^NTR在骨折不愈合处存在高表达,而过量的NGF可关闭P75^NTR受体,从而挽救受损的细胞。因此研究沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染对骨髓间充质干细胞增殖的影响,可为临床治疗骨折不愈合提供新思路。目的:观察慢病毒介导沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法:体外培养至第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞分为空白对照组、阴性对照组、沉默P75^NTR组、NGF过表达组、沉默P75^NTR联合NGF过表达组。将慢病毒介导沉默P75^NTR、过表达NGF转染至大鼠骨髓间充质干细胞,倒置荧光学显微镜观察慢病毒转染第3天细胞形态变化,流式细胞仪检测转染效率及Western blot方法检测P75^NTR和NGF的表达,最后用MTT法和CCK-8法检测各组细胞增殖活性。结果与结论:①共转染慢病毒后的细胞生长、分布良好;双基因慢病毒载体的转染效率已超过70%;②与空白对照组和阴性对照组比较,沉默P75^NTR联合NGF过表达组P75^NTR蛋白表达明显下调,NGF蛋白表达明显增加;③与空白对照组与阴性对照组相比,沉默P75^NTR联合NGF过表达组、沉默P75^NTR组、NGF过表达组细胞增殖明显加快,差异有显著性意义(P<0.05),其中沉默P75^NTR联合NGF过表达组增殖最快;④结果显示:沉默P75^NTR联合NGF过表达共转染可促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖。

3D打印应用于肱骨近端骨折手术疗效的meta分析

目的分析3D打印技术对肱骨近端骨折手术疗效的影响。方法在Web of Science、PubMed、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国知网、维普、万方数据库等检索应用3D打印技术辅助肱骨近端骨折手术的随机对照试验(RCTs),检索时间从建库至2022年3月。依据纳入和排除标准筛选文献,使用改良Jadad量表评估入选文献质量,提取最终纳入文献的各项数据,应用RevMan5.3软件进行meta分析。结果共纳入8篇文献,其中中文文献5篇,英文文献3篇。手术时间、术中出血量均纳入8项RCTs进行meta分析,结果显示:与常规手术组比较,3D打印组手术时间明显缩短[MD=-29.06,95%CI(-41.98~-16.14),P<0.01],术中出血量明显减少[MD=-49.13,95%CI(-74.18~-24.08),P<0.01]。术中C臂透视次数、术后骨折愈合时间、术后引流量、术后Neer功能评分分别纳入3、6、2、2项RCTs进行meta分析,结果显示:3D打印组术中C臂透视次数[MD=-3.04,95%CI(-3.37~-2.72),P<0.01]、术后引流量[MD=-8.30,95%CI(-10.91~-5.68),P<0.01]均较常规手术组明显减少,术后Neer功能评分明显高于常规手术组[MD=2.98,95%CI(1.82~4.14),P<0.01],两组术后骨折愈合时间无明显差异(P>0.05)。结论3D打印技术辅助下的肱骨近端骨折手术在缩短手术时间,减少术中出血量、术中C臂透视次数及术后引流量等方面获益,并可加快患者术后运动功能的恢复。

神经型胸廓出口综合征的诊疗进展

在上肢周围神经的各种卡压综合征中,神经型胸廓出口综合征(neurothoracie outlet syndrome,NTOS)无疑是较为难以诊断的,且治疗上也充满争议。原因在于NTOS的症状广泛,电生理检查多无确凿证据,其他辅助检查也不能提供直接证据用于确诊,因此NTOS的诊断常常仅基于临床表现。本文回顾了NTOS的历史演变,总结各个阶段对NTOS的认识及其诊疗手段,以期提高临床医生对NTOS的认知,促进该病的诊治。

尿液中C2C水平对膝关节骨关节炎的诊断价值

目的探讨尿液中C2C水平与膝关节骨关节炎(KOA)患者病变程度的关系。方法收集90例KOA患者(KOA组)和20例非KOA患者(正常对照组)的尿液标本及膝关节正侧位影像学资料,采用Kellgren-Lawrence放射学分级标准对KOA组的影像学表现进行分级:Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿液中C2C水平。结果 KOA组尿液中C2C水平高于正常对照组(P<0.001)。C2C水平Ⅳ组>Ⅲ组>Ⅱ组>Ⅰ组和正常对照组(P=0.000)。结论 C2C升高水平与KOA的影像学分级平行,两者呈高度正相关性。C2C可作为区分KOA严重程度的标志物,也可作为评价药物及手术治疗KOA疗效的参考指标,但其作为早期诊断的价值有限。

慢病毒介导沉默P75神经生长因子受体基因对大鼠BMSCs成骨分化的影响研究

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒介导沉默P75神经生长因子受体(P75 neurotrophin receptor,P75NTR)基因对大鼠BMSCs成骨分化的影响。方法首先设计3条慢病毒介导P75NTR基因的siRNA序列(P75NTR-siRNA-1、2、3)以及阴性对照(negative control,NC)-siRNA,分别转染第3代SD大鼠BMSCs;倒置显微镜下观察细胞形态变化,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞P75NTR基因及蛋白表达情况,并筛选沉默效果最佳的P75NTR-siRNA进行后续成骨分化实验。取第3代SD大鼠BMSCs,随机分为实验组、阴性对照组及空白对照组;其中,阴性对照组及实验组分别采用NC-siRNA及筛选的P75NTR-siRNA慢病毒载体转染BMSCs,空白对照组为正常BMSCs。采用MTT法检测转染后细胞增殖情况;各组细胞经成骨诱导分化培养后,Western blot检测成骨相关蛋白[骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)及Runx相关转录因子2(Runx related transcription factor 2,Runx2)]表达,免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原表达情况,ALP检测以及茜素红染色观察成骨情况。结果慢病毒介导P75NTR基因转染BMSCs后,其P75NTR mRNA及蛋白表达量均明显降低(P<0.05),其中P75NTR-siRNA-3沉默效果最佳。P75NTR基因沉默后,MTT检测示实验组细胞增殖较两对照组明显增快(P<0.05)。成骨诱导分化培养后,实验组OCN及Runx2蛋白相对表达量、Ⅰ型胶原蛋白表达、ALP活力均明显高于两对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且随成骨诱导时间延长,矿化结节逐渐增多。结论siRNA慢病毒沉默P75NTR基因可以促进大鼠BMSCs成骨分化,为治疗骨缺损提供了新思路。