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一种新型香豆素衍生物P492B的抗神经炎症效应分析
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作者 蒋艳林 向文静 +3 位作者 牙东姗 陈鑫 邓俊刚 廖儒佳 《华夏医学》 CAS 2024年第4期34-40,共7页
目的研究新型香豆素衍生物P492B对小胶质细胞介导的神经炎症的作用。方法以香豆素为母核,合成新型香豆素衍生物P95B、P613B和P492B。通过MTT法评估P95B、P613B和P492B对SH-SY5Y神经元细胞系细胞活力的影响,筛选最优化合物P492B。构建脂... 目的研究新型香豆素衍生物P492B对小胶质细胞介导的神经炎症的作用。方法以香豆素为母核,合成新型香豆素衍生物P95B、P613B和P492B。通过MTT法评估P95B、P613B和P492B对SH-SY5Y神经元细胞系细胞活力的影响,筛选最优化合物P492B。构建脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症模型,给予P492B处理后,形态学观察P492B对小胶质细胞活化的影响。Western blot法检测P492B对小胶质细胞释放一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白水平的影响。ELISA法检测P492B对小胶质细胞释放的炎症因子TNF-α和IL-6水平的影响,DCFH-DA荧光探针检测P492B对小胶质细胞ROS水平的影响。结果香豆素、P95B和P613B均可剂量依赖性降低神经细胞活力,而P492B对神经细胞活力无显著影响。P492B可显著改善小胶质细胞的活化,并剂量依赖性的显著降低活化的小胶质细胞iNOS蛋白水平、剂量依赖性的显著减少炎症因子TNF-α和IL-6的表达水平、剂量依赖性的显著降低活化的小胶质细胞活性氧水平。结论新型香豆素衍生物P492B可显著抑制小胶质细胞介导的神经炎症,为神经炎症相关疾病的治疗提供新的潜在治疗药物。 展开更多
关键词 香豆素衍生物 神经炎症 小胶质细胞 神经保护
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α-突触核蛋白通过上调内吞蛋白Rab5B促进海马神经元膜表面NMDA受体内在化
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作者 陈敏 于文娇 +3 位作者 李昕 杨巍巍 李旭冉 于顺 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期863-867,共5页
目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid receptors,NMDA)受体的调控及机制。方法在原代海马神经元,通过细胞外添加基因重组α-Syn和基因过表达α-Syn方法实现细胞内α-Syn含量增高,... 目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid receptors,NMDA)受体的调控及机制。方法在原代海马神经元,通过细胞外添加基因重组α-Syn和基因过表达α-Syn方法实现细胞内α-Syn含量增高,基因敲减技术抑制Rab5B,Western blotting法分析NMDA受体NR1亚单位和Rab5B表达。结果神经元内α-Syn含量增高可以使Rab5B表达上调,并降低膜表面NR1的水平;抑制Rab5B表达可有效反转α-Syn所致的膜表面NR1水平下降。结论α-Syn通过上调Rab5B促进NMDA受体的内在化。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 NMDA受体 内在化 Rab5B 海马神经元
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醉茄素类化合物在神经系统疾病中的研究进展 被引量:4
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作者 田宁 蒋艳林 +3 位作者 陈梅容 陈梅玲 李清华 廖儒佳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期4-7,共4页
近年来,醉茄素类化合物在神经系统疾病中的作用逐渐受到人们的重视,其在改善中风、修复脊髓损伤、抗神经炎症方面报道均有良好的神经保护作用。为此,该文综合国内外的相关报道,并结合本课题组目前的相关研究,系统综述了醉茄素类化合物... 近年来,醉茄素类化合物在神经系统疾病中的作用逐渐受到人们的重视,其在改善中风、修复脊髓损伤、抗神经炎症方面报道均有良好的神经保护作用。为此,该文综合国内外的相关报道,并结合本课题组目前的相关研究,系统综述了醉茄素类化合物在神经系统疾病中的作用及相关机制。 展开更多
关键词 醉茄素类化合物 醉茄素A 醉茄 神经保护 神经系统疾病 作用机制
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α-突触核蛋白通过Rab5B下调海马神经元膜表面NMDA受体含量及其介导的Ca^(2+)内流和内向电流 被引量:2
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作者 于文娇 杨巍巍 +3 位作者 李昕 李旭冉 陈敏 于顺 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期868-873,共6页
目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对原代海马神经元膜表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体含量和功能的影响及其机制。方法细胞外添加基因重组α-Syn,使其进入原代培养神经元细胞内,观察敲减Rab5B基因... 目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对原代海马神经元膜表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体含量和功能的影响及其机制。方法细胞外添加基因重组α-Syn,使其进入原代培养神经元细胞内,观察敲减Rab5B基因前后神经元膜表面NMDA受体(NMDAR)和Rab5B表达的变化;NMDA激活NMDAR,活细胞工作站测定神经元Ca^(2+)内流变化,全细胞膜片钳记录内向跨膜电流变化。结果α-Syn增加神经元Rab5B的表达,减少膜表面NMDAR含量,并因而抑制NMDA引起的Ca^(2+)内流及内向跨膜电流;敲减Rab5B可逆转α-Syn对NMDAR的下膜作用及功能的影响。结论α-Syn通过上调Rab5B而下调海马神经元膜表面NMDAR含量及其介导的Ca^(2+)内流及内向电流。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 NMDA受体 Rab5B 神经元 海马
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α-Syn过表达对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺受体D1表达的影响 被引量:10
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作者 罗汉将 李佳昱 +1 位作者 刘承伟 陈敏 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期36-40,共5页
目的探讨α-突触核蛋白(α-Syn)过表达对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺受体D1(D1DR)表达的影响。方法选取雄性C57BL/6J小鼠16只,随机将小鼠分为PD组和对照组,每组各8只。采用脑纹状体注射α-Syn预成型纤维(α-Syn PFF)法建立PD模型,对照... 目的探讨α-突触核蛋白(α-Syn)过表达对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺受体D1(D1DR)表达的影响。方法选取雄性C57BL/6J小鼠16只,随机将小鼠分为PD组和对照组,每组各8只。采用脑纹状体注射α-Syn预成型纤维(α-Syn PFF)法建立PD模型,对照组以相同方法注射PBS。各组小鼠于造模前1周及造模后4周,分别采用旷场实验、平衡杆实验、爬杆实验观察小鼠运动轨迹、运动速度及运动时间,采用Western blot方法检测小鼠黑质区D1DR、D2DR、α-Syn、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白相对表达水平,采用免疫荧光法检测小鼠黑质区D1DR及TH表达变化。结果与对照组比较,PD组小鼠出现旷场实验运动速度减慢,平衡杆和爬杆耗时增加等运动迟缓行为学表现(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,PD组小鼠黑质α-Syn蛋白表达增加,D1DR及TH蛋白表达下降(P<0.05)。免疫荧光结果显示,PD组小鼠黑质TH和D1DR阳性神经元荧光强度均明显低于对照组。结论D1DR表达下降可能参与了α-Syn过表达所致的PD小鼠运动障碍。 展开更多
关键词 帕金森病 Α-突触核蛋白 多巴胺受体D1 黑质
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异常增加的α-突触核蛋白对帕金森病模型小鼠黑质及结肠多巴胺受体D1的表达影响 被引量:2
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作者 徐晓峰 罗汉将 +3 位作者 莫琼 左丽丝 黄秀仙 陈敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期1106-1110,1116,共6页
目的探讨异常增加的α-突触核蛋白(α-Syn)对小鼠脑及结肠多巴胺受体D1(D1DR)表达备小鼠帕金森病(PD)模型,对照组注射等体积PBS;术后6个月进行平衡杆、爬杆及旷场实验检测小鼠行为学差异;通过Western blot(WB)、免疫组化及免疫荧光检测... 目的探讨异常增加的α-突触核蛋白(α-Syn)对小鼠脑及结肠多巴胺受体D1(D1DR)表达备小鼠帕金森病(PD)模型,对照组注射等体积PBS;术后6个月进行平衡杆、爬杆及旷场实验检测小鼠行为学差异;通过Western blot(WB)、免疫组化及免疫荧光检测黑质及结肠D1DR、α-Syn、酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果与对照组相比,模型组小鼠出现平衡杆和爬杆运动时间延长、旷场平均运动速度减慢(P <0.001)等运动迟缓表现;WB、免疫组化及免疫荧光结果显示,模型组小鼠黑质及结肠D1DR、呈正相关(r=0.8943、0.9026,P <0.05)。结论通过脑纹状体注射α-Syn PFF建立的PD模型小鼠黑质及结肠中D1DR、TH表达降低,为结肠活检应用于评估早期PD患者中枢神经病理提供了实验基础。 展开更多
关键词 帕金森病 Α-突触核蛋白 多巴胺受体D1
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C57BL/6J小鼠黑质小胶质细胞的增龄性变化
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作者 吕雯 朱明慧 +3 位作者 黄华逸 夏景敏 刘承伟 陈敏 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第1期83-86,共4页
目的观察C57BL/6J小鼠相关代谢指标和黑质小胶质细胞增龄性变化规律,探讨帕金森病临床前期老化和炎症的相互关系。方法 40只健康雄性C57/6J小鼠,分为青年组(3个月)、中年组(9个月)、老年组(16个月)和造模组(16个月),每组10只。造模组采... 目的观察C57BL/6J小鼠相关代谢指标和黑质小胶质细胞增龄性变化规律,探讨帕金森病临床前期老化和炎症的相互关系。方法 40只健康雄性C57/6J小鼠,分为青年组(3个月)、中年组(9个月)、老年组(16个月)和造模组(16个月),每组10只。造模组采用慢性给药(MPTP)5周。测量小鼠体质量、饮食、饮水等代谢指标。通过免疫组织化学方法检测黑质区酪氨酸羟化酶(TH)和小胶质细胞的表达,光镜下分析比较4组小鼠黑质区激活型小胶质细胞数量及其占小胶质细胞总量的比例。结果造模组的饮食、饮水量和体质量相比于其他组明显降低(P<0.05)。小鼠黑质激活型小胶质细胞计数和所占小胶质细胞总量的百分比分别为8.12±3.54和(9.3±1.21)%(青年组);13.19±3.86和(15.5±1.47)%(中年组);19.32±3.07和(20.3±1.53)%(老年组);28.16±3.33和(29.5±1.29)%(造模组),差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠的代谢指标增龄性衰退,黑质区激活型小胶质细胞数增龄性增多,造模组激活型小胶质细胞数占小胶质细胞总量比例最高。 展开更多
关键词 小胶质细胞 帕金森病 黑质 增龄
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小胶质细胞在金花茶多糖保护脑出血中的作用 被引量:10
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作者 田宁 向文静 +4 位作者 周紫贤 蒋艳林 陆美莲 文剑 廖儒佳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期231-237,共7页
目的探讨金花茶多糖(camellia nitidissima polysaccharides,CNP)在脑出血中的作用及机制。方法C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、脑出血组和金花茶多糖组,脑出血后即刻灌胃金花茶多糖并连续给药3 d。神经功能缺陷评分评价整体功能,旷场... 目的探讨金花茶多糖(camellia nitidissima polysaccharides,CNP)在脑出血中的作用及机制。方法C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、脑出血组和金花茶多糖组,脑出血后即刻灌胃金花茶多糖并连续给药3 d。神经功能缺陷评分评价整体功能,旷场与粘附移除实验检测运动与感觉功能。伊文思蓝染色和水肿实验检测血脑屏障损伤程度;免疫荧光检测小胶质细胞激活情况;ELISA检测炎症因子水平;定量PCR及免疫荧光检测小胶质细胞极化水平。结果金花茶多糖可提高小鼠神经功能评分,改善运动功能而对感觉功能无影响;减轻脑水肿与保护血脑屏障;抑制小胶质细胞的激活、抑制炎症因子表达,同时促进小胶质细胞从M1型转化为M2型。结论金花茶多糖促进小胶质细胞M1型转化为M2型减轻炎症、脑水肿与血脑屏障损伤,从而改善脑出血后损伤。 展开更多
关键词 脑出血 金花茶多糖 小胶质细胞 极化 继发性脑损伤 神经保护
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miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生
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作者 罗汉将 吴城荔 +1 位作者 朱金勇 陈敏 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期649-658,共10页
目的探讨miR-15b-5p参与PD中抑郁样行为发生的机制。方法(1)将18只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为PD组、干预组及对照组,每组6只。PD组小鼠通过脑立体定位仪将0.25 mg/kg鱼藤酮注射至右侧纹状体以制备PD模型,干预组小鼠接受0.25 mg/kg... 目的探讨miR-15b-5p参与PD中抑郁样行为发生的机制。方法(1)将18只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为PD组、干预组及对照组,每组6只。PD组小鼠通过脑立体定位仪将0.25 mg/kg鱼藤酮注射至右侧纹状体以制备PD模型,干预组小鼠接受0.25 mg/kg鱼藤酮及miR-15b-5p抑制物慢病毒注射,对照组小鼠注射等体积PBS。4周后进行旷场实验及转棒实验评价小鼠的运动能力,进行糖水偏好实验及强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为表现,然后提取小鼠黑质及纹状体中相关蛋白及miRNAs,进行Western blotting实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验以及免疫荧光染色实验检测相关指标[miR-15b-5p、酪氨酸羟化酶(TH)、脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)、突触后密度蛋白95(PSD95)]。(2)将100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列分别转染至6孔板上SH-SY5Y细胞中(分别命名为miR-15b-5p模拟物组、miR-15b-5p模拟物对照组及miR-15b-5p抑制物组、miR-15b-5p抑制物对照组),48 h后进行Western blotting实验及qRT-PCR实验,以检测BDNF、TrkB、PSD95蛋白及miR-15b-5p表达改变。(3)将100 ng BDNF 3'端非编码区(3'-UTR)野生型或突变型荧光素酶报告载体质粒以及100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列共转染至24孔板上SH-SY5Y细胞中,得到相应8组细胞,48 h后进行荧光素酶报告载体活性检测实验,以检测各组细胞的荧光素酶活性。结果(1)与对照组相比,PD组小鼠的运动速度明显减慢、落棒潜伏期明显缩短、糖水偏好百分比明显降低、不动时间明显增加;与PD组相比,干预组小鼠的运动速度明显提高、落棒潜伏期明显延长、糖水偏好百分比明显升高,不动时间明显减少;差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与miR-15b-5p模拟物对照组比较,miR-15b-5p模拟物组细胞中miR-15b-5p表达明显升高,BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±5.75 vs.66.79±5.90;100.00±5.95 vs.84.46±5.77;100.00±7.02 vs.80.43±3.25);与miR-15b-5p抑制物对照组比较,miR-15b-5p抑制物组细胞中miR-15b-5p表达明显降低,BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(100.00±6.81 vs.119.90±5.66;100.00±2.88 vs.110.10±4.15;100.00±2.19 vs.124.60±11.69);差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PD组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显增加,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±9.20 vs.63.60±12.80;100.00±9.88 vs.71.95±10.00;100.00±5.16 vs.70.37±8.43;100.00±7.01 vs.68.12±10.22),BDNF荧光强度明显降低(100.00±12.99 vs.48.23±12.58);与PD组相比,干预组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显降低,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(63.60±12.80 vs.90.69±9.84;71.95±10.00 vs.93.31±4.50;70.37±8.43 vs.88.11±4.10;68.12±10.22 vs.89.59±5.93),BDNF荧光强度明显升高(48.23±12.58 vs.83.65±10.52);差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物组细胞中荧光素酶活性明显降低(100.00±5.07 vs.90.59±1.75);与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物组细胞中荧光素酶活性明显升高(100.00±5.08 vs.152.20±31.87);差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生。 展开更多
关键词 帕金森病 抑郁 miR-15b-5p 脑源性神经营养因子 突触可塑性
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帕金森病及多系统萎缩患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体细胞膜破坏能力的研究
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作者 胡勇 罗汉将 陈敏 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期109-116,共8页
目的通过观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞膜的破坏能力,进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法收集桂林医学院附属医院神经内科自2018年1月至2022年1月确诊的5例PD... 目的通过观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞膜的破坏能力,进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法收集桂林医学院附属医院神经内科自2018年1月至2022年1月确诊的5例PD患者、5例MSA患者外周血液样本,以及同时期5例健康体检人员外周血液样本;采用0.01 mol/L PBS溶解α-Syn后分别与PBS、健康人员、PD患者及MSA患者血浆在37℃条件下恒温振荡孵育4 d(依次命名为PBS组、HC组、PD组和MSA组)。以酸性磷脂1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(POPS)为原料,采用薄膜分散-超声法制备包裹钙黄绿素的小单室脂质体(SUVs),采用马尔文纳米粒度电位仪及透射电镜分析SUVs粒径大小及形态。采用各组不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μmol/L)的α-Syn聚集体分别处理SUVs及人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),通过测定透析后钙黄绿素相对释放量及细胞内钙黄绿素荧光值评估不同条件下形成的α-Syn聚集体对脂质体及细胞膜的破坏能力。结果(1)各组α-Syn聚集体对SUVs的破坏作用:各组α-Syn聚集体诱导释放的钙黄绿素随着蛋白浓度的升高而增多。当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,PD组和MSA组诱导释放的钙黄绿素均明显多于PBS和HC组,MSA组诱导释放的钙黄绿素进一步多于PD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞膜的破坏作用:各组细胞内钙黄绿素荧光值随蛋白浓度的升高而降低。当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,PD组和MSA组细胞内钙黄绿素荧光值均显著低于PBS组和HC组,MSA组细胞内钙黄绿素荧光值进一步低于PD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞存活的影响:当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,各组SH-SY5Y细胞活力均明显下降,与PBS和HC组相比,PD组和MSA组细胞活力均显著下降,其中MSA组细胞活力又较PD组进一步下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PD患者血浆和MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体对细胞膜的破坏能力大于正常人群血浆,尤以MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体为著。 展开更多
关键词 帕金森病 多系统萎缩 Α-突触核蛋白 聚集体 细胞膜
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MiR-506通过PI3K/AKT信号通路调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭
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作者 杨冰 张建宏 +5 位作者 王晓谦 佘远萍 张庆华 马彩妮 要雄伟 莫靖欣 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 2022年第5期483-485,共3页
目的探讨MiR-506是否通过PI3K/AKT通路对人绒毛膜癌细胞JEG-3的增殖、迁移、侵袭和凋亡发挥调控作用。方法采用qRT-PCR法测定绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo和绒毛膜癌细胞JEG-3中MiR-506的表达水平,将JEG-3细胞分组后转染MiR-506模拟物或... 目的探讨MiR-506是否通过PI3K/AKT通路对人绒毛膜癌细胞JEG-3的增殖、迁移、侵袭和凋亡发挥调控作用。方法采用qRT-PCR法测定绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo和绒毛膜癌细胞JEG-3中MiR-506的表达水平,将JEG-3细胞分组后转染MiR-506模拟物或抑制物后进行培养,采用CCK-8法测定细胞增殖情况,采用流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,采用Western blot法测定PI3K/AKT通路相关蛋白表达情况。结果JEG-3细胞中MiR-506表达水平较HTR8/Svneo细胞降低;MiR-506模拟物组JEG-3细胞中MiR-506表达水平升高,MiR-506抑制物组MiR-506表达水平降低;MiR-506模拟物组24 h、48 h、72 h时吸光度增加,而MiR-506抑制物组吸光度显著降低;MiR-506模拟物组细胞凋亡数量升高(P<0.05),而MiR-506抑制物组细胞凋亡数量降低(P<0.05);MiR-506模拟物组PI3K和AKT蛋白表达水平降低(P<0.05),MiR-506抑制物组PI3K和AKT蛋白表达水平增加(P<0.05)。结论MiR-506是绒毛膜癌的抑癌基因,可能通过调节PI3K/AKT通路对绒毛膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡发挥调节作用。 展开更多
关键词 绒毛膜癌 细胞凋亡 PI3K/AKT通路 MiR-506
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帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体稳定性的研究 被引量:1
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作者 彭彩霞 罗汉将 +2 位作者 杨帆 刘承伟 陈敏 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期325-332,共8页
目的探讨帕金森病(PD)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体的稳定性。方法收集自2020年6月至2020年12月于桂林医学院附属医院神经内科确诊的10例PD患者外周血液样本及同期10例健康体检人员外周血液样本,用140μL 0.01 mol/L ... 目的探讨帕金森病(PD)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体的稳定性。方法收集自2020年6月至2020年12月于桂林医学院附属医院神经内科确诊的10例PD患者外周血液样本及同期10例健康体检人员外周血液样本,用140μL 0.01 mol/L PBS将1 mg重组人α-Syn溶解后分别与70μL健康人员、PD患者血浆及PBS于37℃环境下恒温振荡孵育7 d(依次命名为HC、PD及PBS组);预成型原纤维(PFF)组采用10μgα-Syn PFF用于后续实验。利用不同浓度胰蛋白酶(胰蛋白酶:α-Syn浓度比分别为1∶80、1∶40、1∶20)、不同浓度蛋白酶K(PK)(1.0、1.5、2.0μg/mL)消化各组蛋白后采用Western blotting法检测消化前后α-Syn水平的差异。结果(1)胰蛋白酶对PFF的消化作用:随着胰蛋白酶浓度的增加,PFF逐渐减少,当胰蛋白酶与α-Syn PFF蛋白浓度比提高至1∶20时,相对分子质量>35000处的α-Syn聚集体基本被消化,与其他浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)胰蛋白酶对α-Syn聚集体的消化作用:在相对分子质量<25000处,当胰蛋白酶与蛋白浓度比为1∶20时,与HC和PD组比较,PBS组α-Syn表达水平降低更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量35000~40000处,3种胰蛋白酶浓度下3组α-Syn表达水平均明显降低;与HC和PD组相比,PBS组降低均更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量>40000处,当浓度升高到1∶20时,PD组α-Syn才出现明显减少,被消化程度表现为PBS组>HC组>PD组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)PK对PFF的消化作用:当PK浓度为1.0、1.5及2.0μg/mL时,相对分子质量>35000处蛋白均已被基本消化,相对分子质量<25000处α-Syn单体明显减少并出现小分子片段;与阴性对照(PK浓度为0μg/mL)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)PK对α-Syn聚集体的消化作用:在相对分子质量<25000处,PBS组α-Syn单体被消化成更小的片段,而HC和PD组α-Syn单体未见明显消化,同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量35000~40000处,随着PK浓度增加,PBS组α-Syn二聚体被消化程度明显增加;HC组α-Syn二聚体的量随着PK浓度增加而增加;而PD组α-Syn二聚体的量随PK浓度的增加变化不明显;同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量>40000处,随着PK浓度增加,PBS、HC及PD组α-Syn均出现一定程度减少,同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体的稳定性高于HC血浆及PBS孵育形成的α-Syn聚集体。 展开更多
关键词 帕金森病 Α-突触核蛋白 聚集体 消化 稳定性
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基于iTRAQ的蛋白质组学技术对Drp1基因过表达挽救帕金森病模型果蝇的机制研究
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作者 朱金勇 石芳 +2 位作者 文剑 韦载娲 李清华 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1081-1088,共8页
目的应用iTRAQ技术探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)基因过表达挽救PD模型果蝇的蛋白质组学变化以及挽救效应的分子机制。方法将各果蝇品系分别杂交构建出不同实验果蝇:正常组、PD模型组(PINK1B9转基因疾病果蝇)和PD挽救组(Drp1基... 目的应用iTRAQ技术探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)基因过表达挽救PD模型果蝇的蛋白质组学变化以及挽救效应的分子机制。方法将各果蝇品系分别杂交构建出不同实验果蝇:正常组、PD模型组(PINK1B9转基因疾病果蝇)和PD挽救组(Drp1基因过表达PD模型果蝇),并观察果蝇翅膀形态、运动能力及计算异翅率、飞行率。提取果蝇蛋白组分,以iTRAQ技术联用串联质谱分析蛋白质组的整体变化情况,并将各组果蝇蛋白鉴定结果分别两两比较获得差异蛋白,最后将鉴定得到的差异蛋白进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果PD挽救组的异翅率与PD模型组相比明显降低(2.60%±0.47% vs. 82.40%±12.47%),飞行率与PD模型组相比明显提高(89.70%±7.76% vs. 3.30%±1.69%),差异均有统计学意义(P〈0.05)。蛋白质组学分析结果共鉴定得到3630个蛋白,其中PD模型组与正常组间鉴定得到的差异蛋白共282个,主要是铁离子相关蛋白;PD挽救组与PD模型组间鉴定得到的差异蛋白共170个,主要是锌离子相关蛋白。共同差异蛋白的信息显示Drp1基因过表达后逆转了绝大多数PD模型中相对正常果蝇异常表达的蛋白,其中21%的蛋白具有金属离子结合功能,且主要是锌离子结合功能。结论金属离子代谢可能在PD发病及Drp1基因过表达挽救PD过程中有重要作用,尤其是锌离子代谢可能在挽救效应中起主要作用。 展开更多
关键词 帕金森病 线粒体动力相关蛋白1 iTRAQ技术 蛋白质组学 金属离子代谢 转基因果蝇
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