ERK5对人肺成纤维细胞自噬、凋亡和增殖的调控

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶-5(ERK5)对人肺成纤维细胞系(HLFs)自噬、凋亡和增殖的调控及对成纤维细胞表型转化的影响。方法转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLFs建立肺纤维化细胞模型,过表达ERK5基因(ERK5)后通过Western blot检测自噬、凋亡、增殖相关因子和表型转化标志因子α-SMA的表达,通过细胞增殖/毒性检测(CCK8)试剂盒检测细胞增殖率。结果经TGF-β1处理后,与对照组相比,ERK5组细胞α-SMA、P62蛋白表达水平升高,LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平降低;促凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达水平降低,抗凋亡蛋白Bcl-2和增殖细胞核抗原PCNA表达水平升高,CCK8检测到细胞增殖率升高。结论在TGF-β1诱导的HLFs表型转化过程中,ERK5高表达促进细胞增殖、抑制细胞自噬和凋亡。

ERK5抑制剂促进肺成纤维细胞自噬及其在小鼠肺纤维化中的作用研究

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)是否在体内外参与肺纤维化的发病过程,进一步探讨ERK5对体外培养的人肺成纤维细胞自噬的调控。方法BIX02189(ERK5抑制剂)处理人肺成纤维细胞,用转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))诱导其表型转化。实验细胞分为6组:DMSO组、BIX02189组、DMSO+TGF-β_(1)组、BIX02189+TGF-β_(1)组、BIX02189+TGF-β_(1)+3-MA组和3-MA对照组。蛋白质印迹检测表型转化标志因子Fibronectin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1、p62的表达。将24只雄性C57B/L小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、博来霉素模型组(BLM组)、BIX02189治疗组(BT组)和BIX02189对照组(BC组)。于造模当日起每日观察小鼠一般状态,于28 d后处死小鼠,取左侧肺组织行Masson染色和HE染色,取右侧肺组织通过蛋白质印迹检测ERK5、α-SMA、LC3Ⅱ的表达。结果BIX02189+TGF-β_(1)组与DMSO+TGF-β_(1)组相比,α-SMA、p62蛋白表达水平降低,LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平升高;应用自噬抑制剂后,α-SMA蛋白表达水平升高。NS组和BC组小鼠一般状态良好,BLM组一般状态差,BT组小鼠一般状态稍好。Masson染色和HE染色显示,BT组较BLM组肺泡间隔变窄,蓝色的胶原纤维沉积量减少,纤维化程度减轻。蛋白质印迹结果显示,BT组α-SMA的蛋白表达量明显低于BLM组;BT组LC3Ⅱ蛋白表达量高于BLM组。结论ERK5抑制剂促进人肺成纤维细胞自噬并抑制其表型转化,改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。