高纯度人血红蛋白及高特异性抗人血红蛋白单克隆抗体的制备

目的:获得高纯度的人血红蛋白(Hb)抗原,并用其免疫小鼠,筛选获得高特异性抗人血红蛋白单克隆抗体(mAb-Hb),为建立高灵敏度、高特异性人粪便潜血免疫检测法提供关键试剂。方法:选择CM-Sepharose Fast Flow(CM50)阳离子柱进行分离纯化获得高纯度Hb,进而用其免疫小鼠,经融合制备获得了11株可特异性分泌mAb-Hb的杂交瘤细胞。获得的11株mAb-Hb用双抗夹心方法竞争配对,及与其他实验动物Hb进行交叉反应来筛选检测mAb-Hb的特异性。结果:获得的11株mAb-Hb经双抗夹心法进行竞争配对及与其他实验动物Hb进行交叉反应,得到7E12、1H7两株高特异性的mAb-Hb,且7E12和1H7、1D11、6C4配对效果较好。结论:用此方法获得了配对效果较好的mAb-Hb,可用于纯化Hb抗原的鉴定;筛选获得的高特异性mAb-Hb,可进一步应用于高灵敏度、高特异性免疫法检测粪便潜血(FOB)。

人心肌红蛋白多肽单抗原表位基因的克隆、原核表达及抗体制备

目的本研究以原核表达单抗原表位的人心肌红蛋白(MB)肽段,制备不同表位的多克隆抗体。方法利用软件分析人心肌红蛋白的抗原表位,获得4个肽段(片段1、2、3、4);PCR扩增其基因序列,连接到表达载体p ET-GST,转化至E.coli BL21进行诱导表达。结果 GST-Sepharose 4B亲和层析柱进行MB-GST融合蛋白纯化,获得Mr28 000左右的融合蛋白,质量浓度为15 mg/L。免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。结论 4种多肽抗体均具有较好的特异性。