几种促进剂的添加时间对中国红豆杉细胞悬浮培养紫杉醇合成的影响

采用正交实验检测中国红豆杉[Taxus chinensis(Pilger) Rehd.]细胞悬浮培养中水杨酸、硝酸银、氨基酸前体、D-果糖和硫酸镧的添加时间对细胞生长和紫杉醇(taxol)积累的影响。这些促进剂的添加时间对中国红豆杉细胞悬浮培养的生长没有明显的影响,但能明显促进紫杉醇的合成,当在细胞培养的第14d添加1.67mg/L硝酸银,第18d添加0.1mg/L水杨酸,第21d添加氨基酸前体,第21d添加10g/LD-果糖和2mg/L硫酸镧时对紫杉醇的促进作用最明显,在此最优组合处理时紫杉醇含量达到10.05mg/L,相对于最差组合处理时紫杉醇含量仅有1.77mg/L,紫杉醇含量提高5.7倍,这些因素的添加时间对紫杉醇合成的相互作用达不到显著水平。

HPLC法测定红豆杉中紫杉醇及同系物的含量

建立了HPLC法测定红豆杉枝叶中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ（简称10-DABⅢ）、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱和紫杉醇的含量。采用二种流动相系统分别测定南方红豆杉枝叶中四种成分，以较大极性的甲醇-水（43：57）流动相系统测定10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ和巴卡亭Ⅲ，以乙腈-水-甲醇（27：44：29）为流动相测定三尖杉宁碱和紫杉醇，采用Nova—Pak C18反相柱，流速为1mL／min，柱温35℃，紫外检测波长为227nm。10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱和紫杉醇的线性范围（n=5）分别为0．01～0．5μg（r=0．9998），0．01～1μg（r=0．9999），0．015～0．5μg（r：0．9990），0．01～0．5μg（r=0．9992）；样品用丙酮和水浸提，体积比为60：40，回收丙酮后，用二氯甲烷萃取得到上述四种成分。本实验方法操作简便，结果准确，重现性好，可作为不同地区红豆杉的质量控制方法之一。

促进剂组合对中国红豆杉细胞悬浮培养紫杉醇合成的影响

目的研究中国红豆杉Taxus chinensis细胞悬浮培养中蔗糖、柠檬酸三铵、水杨酸和氨基酸前体组合对细胞生长和紫杉醇(taxol)积累的影响。方法采用L9(34)设计试验,考察了第9天添加蔗糖(10、16、22 g/L)、柠檬酸三铵(0、154、1 540 mg/L),第21天添加蔗糖(20、260、g/L)和不同时间组合添加水杨酸及氨基酸前体4个因素对红豆杉细胞悬浮培养和紫杉醇合成的影响。结果当在细胞培养的第0天添加1.67 mg/L硝酸银,第9天添加10 g/L蔗糖,第9天添加1 540 mg/L柠檬酸三铵,紫杉醇达到最高,在此最优组合处理时紫杉醇质量浓度达到39.2 mg/L,相对于最差组合处理的(2.1 mg/L)时提高18.7倍。结论促进剂组合对中国红豆杉细胞悬浮培养的生长和紫杉醇的合成都有很明显的影响。