医学院校流式细胞仪实验平台技术开发和研究生实验教学应用实践的探讨

流式细胞术广泛应用于生物医学基础和临床领域的研究和诊断中,也是医学院校医学免疫学等课程理论和实验课的教学内容之一。随着各种流式细胞前沿新技术的不断涌现,其在免疫学、病原生物学、细胞生物学、肿瘤学、血液学、药学和医学检验等研究领域中的作用越来越突出。基于科研需求推动下的流式细胞前沿技术开发应用为模式,以研究生教学和科研实践中针对性地增加流式细胞前沿技术的理论和实验内容为起点,将流式前沿技术的科研手段、思维方式和创新意识灵活贯穿于"科研-流式平台建设-研究生培养"这一途径的多个环节中。通过以科研促技术、以技术建平台和以平台促研究生教学等一系列形式,提高流式细胞技术平台的水平、培养研究生对流式细胞技术的动手操作能力,为流式细胞技术平台建设和研究生未来科研和职业发展奠定基础。

激光扫描共聚焦显微镜技术在医学院校创新型实验教学中的应用

针对大型仪器技术支撑实验教学的要求,开展创新型实践教学,通过优化激光扫描共聚焦显微镜技术的实验教学内容和方法,改变实验教学模式,推动大型仪器设备的共享应用。此技术在医学院校人才培养方式中的应用提高了实验教学改革的整体水平,加强了学生的科技创新能力培养。

GCNT3通过PI3K/Akt/mTOR和RhoA/ROCK/Cofilin途径促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(英文)

β-1,3-半乳糖-O-糖基-糖蛋白β-1,6-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(β-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoproteinβ-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase,GCNT3)是黏液蛋白质生物合成中不可缺少的一类N-乙酰葡萄糖转移酶。越来越多的证据表明,GCNT3的异常表达与肿瘤的侵袭以及病人的生存率有关,然而相关的研究仍较少报道。本研究旨在揭示GCNT3在调控肝细胞癌进程中的潜在机制。本研究首先利用高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)和癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas databases,TCGA)数据库分析肝癌和正常组织中GCNT3的mRNA表达水平,结果表明,肝癌组织中GCNT3的mRNA表达水平高于正常组织(P≤0.001)。同时利用免疫组化、Western印迹进一步分析了肝癌组织、癌旁组织、正常组织中GCNT3蛋白的表达,发现有30%肝癌组织GCNT3表达水平高于癌旁组织和正常组织。随后,在肝癌细胞系HCCLM3和Huh7细胞中,采用CCK-8、平板克隆、划痕实验、Transwell实验分析GCNT3对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,结果显示,敲低GCNT3可抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达GCNT3发挥相反作用。细胞周期和Western印迹结果显示,GCNT3调控G_(0/)G_1期关键蛋白质的表达来促进肝癌细胞周期G_1/S的转换。进一步探究发现,GCNT3可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进细胞增殖;以及GCNT3上调RhoA/ROCK/Cofilin通路关键蛋白质的表达来促进F-肌动蛋白(F-actin)的形成,从而参与细胞的迁移和侵袭。总之,本研究通过对GCNT3在肝癌细胞中的功能分析,初步证明,GCNT3与肝癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能有关,证实了GCNT3在肝癌临床治疗中的潜在价值,为肝癌治疗和诊断提供了新思路。

产酸克雷伯菌核心基因组多位点序列分型方案

目的对产酸克雷伯菌进行核心基因组多位点序列分型(cgMLST)并探索产酸克雷伯菌克隆群(clonal groups,CGs)在国家或地区层面上的遗传多样性。方法chewBBACA被用作GbG(gene-by-gene)分析的生物信息学管道,从整个物种的基因组序列中进行集群识别,以构建和验证产酸克雷伯菌的cgMLST方案。公开获得的21个完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的创建,386个不完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的验证。结果建立了一个针对3356个核心基因的cgMLST(简称3356-cgMLST)方案。提出的3356-cgMLST方案实现了针对98%以上(400/407)的产酸克雷伯菌分离株基因组序列的分型。根据提出的3356-cgMLST方案,最终纳入分型的400株产酸克雷伯菌基因组序列中共确定了130个CGs。基于3356-cgMLST方案获得的CGs分布情况可以看出产酸克雷伯菌呈现出明显的多国家多地区传播现象。结论本研究为产酸克雷伯菌提供一个公开的3356-cgMLST方案,并揭示产酸克雷伯菌基因组序列呈现高度的遗传多样性,CG26为优势克隆群。

缺糖缺氧/再灌注对星形胶质细胞外泌体miRNAs表达的影响

目的探讨缺糖缺氧/再灌注(OGD/R)对星形胶质细胞外泌体中微小RNA(miRNAs)表达的影响。方法对新生原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行缺糖缺氧(OGD)或OGD/R处理,采用超高速离心法分别收集培养基上清液和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用Illumina Hiseq2500测序平台检测外泌体miRNAs的表达谱,从中选取表达受OGD及OGD/R处理影响的miRNAs。并用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对生物信息学分析中差异有统计学意义的miRNAs进行实验验证。使用metascape和miRWalk预测高表达miRNAs的靶基因,再将挑选出的共同靶基因在Webgestalt中进行KEGG富集分析。采用Western blot(WB)检测OGD/R及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的SH-SY5Y细胞Erk磷酸化水平的影响。结果与对照组相比,OGD 4 h处理改变了星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达谱;而再灌注24 h后改变的miRNAs大部分恢复到对照组水平。qPCR验证显示:3种miRNAs在外泌体中的分布水平远高于细胞,而且这种富集作用可能不受OGD刺激的影响。KEGG富集分析显示:表达上调miRNAs的靶基因信号通路主要为代谢通路,包括PI3K-AKT、MAPK和mTOR信号通路等。OGD、OGD/R及正常星形胶质细胞外泌体处理均能上调相应培养条件下SH-SY5Y细胞的p-Erk1和p-Erk2水平。结论OGD处理能显著影响星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达,其外泌体中富集分布的miRNAs均靶向作用于代谢通路,如PI3K-AKT、MAPK和mTOR等信号通路。

超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究

建立了检测细胞中嘌呤核苷酸（ATP、ADP、AMP、NAD＋和NADP＋）的超高效液相色谱-质谱（UP-LC-MS）分析方法.采用KinetexTM HILIC柱（50 mm ×4.6 mm,2.1 μm）进行分离,对细胞样品的萃取方法、流动相组成及质谱参数进行优化.方法学确证表明：各待测物在1.0 ～ 100 μmol/L范围内线性关系良好,相关系数（r）均大于0.99,平均回收率为95.7％～101.1％,相对标准偏差为1.2％～6.1％.本方法的灵敏度高、简便快速、重复性好,可用于细胞中能量代谢的研究.

双氢青蒿素通过阻断Wnt/β-catenin信号抑制骨肉瘤细胞系体外增殖和侵袭

目的研究双氢青蒿素(DHA)在体外对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其可能的分子机制。方法不同浓度的DHA处理骨肉瘤细胞,结晶紫染色检测细胞增殖。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况。结果 DHA在体外能明显浓度依赖性地抑制人骨肉瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.05);DHA可降低骨肉瘤细胞β-catenin的蛋白水平和转录调控活性(P<0.01),过表达β-catenin可逆转DHA对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05),而β-catenin基因沉默则可进一步加强其抑制效果(P<0.01)。结论DHA可明显抑制人骨肉瘤细胞增殖和侵袭,这种作用可能与其阻断Wnt/β-catenin信号通路相关。

miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路对狼疮性肾炎患者肾小球系膜细胞增殖及炎性因子分泌的影响

目的:探讨miR-21靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖及炎性因子分泌的影响。方法:选取在我院经肾穿刺活检诊断为LN的30例患者的肾组织标本,qRT-PCR和western blot检测狼疮性肾炎肾组织中miR-21和PTEN的表达水平;HMCs随机分为5组:NC mimics组、miR-21 mimics组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-PTEN组和miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组;TargetScan预测miR-21与PTEN的结合位点;双荧光素酶报告基因验证miR-21与PTEN的靶向关系;细胞克隆形成实验检测miR-21靶向PTEN对HMCs增殖能力的影响;细胞流式术检测miR-21靶向PTEN对HMCs凋亡率的影响;ELISA检测miR-21靶向PTEN对HMCs炎性因子生成的影响;Western blot检测miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路相关蛋白的表达。结果:miR-21在狼疮性肾炎肾组织中高表达(P=0.043),PTEN在狼疮性肾炎肾组织中低表达(P=0.037);miR-21与PTEN存在靶向关系,且miR-21靶向下调PTEN的表达(P=0.003);与NC mimics组比较,miR-21 mimics组细胞集落数目增加(P=0.003),凋亡率下降(P=0.003),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(均P=0.000),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.025,P=0.004);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.032),凋亡率上升(P=0.035),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.037,P=0.029),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.002)、PI3K和AKT蛋白表达水平明显下调(均P=0.003);与miR-21 mimics组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.003),凋亡率上升(P=0.000),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.004,P=0.004),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平下调(P=0.031,P=0.039);与pcDNA3.1-PTEN组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目增加(P=0.029),凋亡率下降(P=0.031),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(P=0.000,P=0.003,P=0.003),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003),PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.002,P=0.003)。结论:miR-21靶向PTEN对人肾小球系膜细胞的增殖、凋亡及炎性因子的分泌有一定影响,可能与PI3K/AKT通路有关。

真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法

顺乌头酸酶(aconitase,Aco)是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸.真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1(cAco)和定位在线粒体的顺乌头酸酶2(m-Aco).检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变.顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性.该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱.同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.

HCMV感染对人THP-1细胞HLA-G及其受体表达的影响

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人THP-1细胞人类白细胞抗原G(HLA-G)异构体及其受体表达的影响探讨HLA-G在HCMV逃逸宿主免疫应答中的作用。方法:HCMV Towne株感染THP-1细胞后,采用RT-PCR和Western blot检测HLA-G异构体mRNA和蛋白水平,流式细胞术检测THP-1细胞HLA-G及其表面受体ILT2、ILT4的表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-10及可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,同时检测细胞存活率。结果:HCMV感染后细胞未出现明显凋亡,细胞存活率高。HCMV感染THP-1细胞1 d后HLA-G1、-G3、-G4和-G5的mRNA表达明显上调,HLA-G1和HLA-G5的蛋白表达明显上调。THP-1细胞HLA-G、ILT2和ILT4的表达在感染1 d后明显上调。sHLA-G水平在感染1 d后显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。THP-1细胞培养上清液IL-10水平在感染1 d后明显上调,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HCMV感染THP-1细胞能诱导HLA-G异构体的差异表达,以HLA-G1和HLA-G5为主,且上调其表面受体ILT2/ILT4的表达。同时,HCMV感染能诱导THP-1细胞分泌IL-10。该研究为进一步探讨HCMV逃避机体免疫应答的机制提供实验依据。

Shh促进BMP9诱导的小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

目的观察Shh蛋白对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞(MSCs)C3H10T1/2成骨分化的影响,并初步探讨其作用机制。方法 Shh腺病毒和BMP9作用于C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)检测ALP变化,茜素红S染色检测钙盐沉积,RT-PCR检测Shh、BMP9、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)以及成骨相关基因Id1、Id2、Id3、CTGF和Runx2的表达,Western blot检测OPN、OCN、Runx2、DLX5和p-Smad1/5/8的蛋白水平,荧光素酶报告基因检测Smad1/5/8的转录活性。结果 Shh不影响BMP9的表达,但可增强由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞早晚期成骨分化(P<0.05),并促进BMP9诱导的成骨相关基因的表达(P<0.05);Shh促进了BMP9诱导的Smad荧光素酶活性(P<0.05),但对其磷酸化并无影响。结论 Shh可促进BMP9诱导的小鼠C3H10T1/2细胞的成骨分化。

少精子症患者精子鱼精蛋白表达及染色质包装质量

目的:探讨鱼精蛋白(PRM1和PRM2)和精子染色质包装质量对少精子症的影响。方法:参照WHO标准收集了28例少精子症、16例畸形精子症和15例正常对照精液标本。通过提取标本总RNA,经反转录和荧光定量PCR反应分别检测PRM1、PRM2和TRF2mRNA的相对表达量;标本纯化后进行涂片、CMA3染色,通过计算CMA3阳性率检测精子染色质包装质量。结果:少精子症组PRM1和PRM2mRNA相对表达量分别为正常对照组的25%(P<0.05)和20%(P<0.05),畸形精子症组与正常对照组比较差异无统计学意义;TRF2mRNA表达水平3组间差异无统计学意义;少精子症组CMA3阳性率(20.47%±1.19%)是正常对照组(10.69%±1.45%)的191%(P<0.001),畸形精子症组为14.31%±2.01%,与正常对照组比差异无统计学意义。结论:鱼精蛋白(PRM1和PRM2)mRNA表达量减少可能影响精子染色质包装,使得精子形成过程异常,从而导致成熟精子数量减少。

远志皂苷元通过改善内质网应激保护小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的观察远志皂苷元(senegenin,SEN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并深入探讨远志皂苷元作用的分子机制。方法实验分组:对照组(穿线不结扎,空置225min)、模型组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注180min)和SEN处理组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注前10min给予静脉注射30mg/kg远志皂苷元,再灌注180min)。采用伊文氏蓝-TTC双染法测定心肌梗死面积;荧光分析法检测Caspase-12和Caspase-3的活性以评价小鼠心肌细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法检测心肌梗死区内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠心肌梗死区的面积显著增大,Caspase-12和Caspase-3活性分别增高了4.71倍和3.37倍,内质网应激相关的标志蛋白GRP78和CHOP表达水平亦显著增高。与模型组相比,SEN处理组小鼠心肌缺血再灌注损伤导致的心肌梗死面积、Caspase-12和Caspase-3的活性程度均显著降低,GRP78和CHOP的表达水平亦显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论远志皂苷元对小鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其可能的机制与改善心肌内质网应激介导的细胞凋亡有关。

数字PCR检测血浆游离DNA方法的建立及在结直肠癌中的初步应用

目的建立基于微滴式数字PCR(dd PCR)技术定量检测血浆游离DNA(cf-DNA)含量的方法,并探讨其在结直肠癌诊疗中的应用价值。方法设计β-actin特异性引物和探针,建立dd PCR检测cf-DNA绝对定量方法,根据不同浓度标准品验证该检测方法的敏感度、线性以及重复性。该法检测68例结直肠癌患者、33例结直肠良性肿瘤患者及60例健康对照者血浆cf-DNA水平,化学发光法检测其血清CEA、CA19-9水平,分析血浆cf-DNA水平与临床病理参数及血清CEA、CA19-9水平的关系,并用ROC曲线评估其诊断效能。结果本实验所建立的dd PCR方法能够检测低至10pg/μl的微量DNA模板,检测敏感度为0.29copies/μl;且在模板浓度为10pg/μl^10ng/μl的范围内线性良好(Y=-2.34+33.17X,R2=0.999);批内CV为9.85%,批间CV为11.04%。该法检测结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组和健康对照组血浆cf-DNA水平分别为6700(3800~9925)、3100(2300~4000)、2500(1775~4000)copies/ml,结直肠癌组血浆cf-DNA水平显著高于结直肠良性肿瘤组(P=0.000)和健康对照组(P=0.000),而结直肠良性肿瘤组与健康对照组比较,差异无统计学意义(P=0.167)。结直肠癌患者血浆cfDNA水平在不同年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移以及肿瘤浸润程度间比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),在TNM分期间差异有统计学意义(P<0.01)。结直肠癌患者血浆cf-DNA水平与CEA(r=0.210,P=0.099)和CA19-9(r=0.125,P=0.233)无相关性。ROC曲线结果显示,以5300copies/ml为cut off值,cf-DNA诊断结直肠癌ROC曲线下面积(AUC)、敏感度、特异性分别为0.931、73.3%和98.3%,高于CEA(0.762、51.7%、95.6%)和CA19-9(0.548、45.0%、82.0%)。结论建立了一种敏感、特异的dd PCR定量检测血浆cf-DNA的方法,有助于结直肠癌的辅助诊断及预后判断。

CDKAL1基因rs7756992位点多态性与2型糖尿病发病风险及临床特征关联分析

目的:验证2型糖尿病(T2DM)易感基因CDKAL1(CDK5调节亚基相关蛋白1类似物1)rs7756992位点与中国汉族人群T2DM的关联性,并分析该位点不同基因型的临床特征,为本地区易感人群的筛选和疾病分子分型提供基础。方法:选取浙江省温州地区汉族人群T2DM患者534例和对照组453例,采用高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序等基因分型技术,分析CDKAL1基因rs7756992位点等位基因及不同基因型在T2DM和对照组人群中频率分布的差异,并进一步了解不同基因型对T2DM患者临床特征及其并发症的影响。结果:rs7756992位点基因型GG/AA(P=0.048)和等位基因(A/G)的频率(P=0.045)在两组间差异有统计学意义,证实G为该位点风险等位基因;进一步对病例组内不同基因型的临床特征分析发现,GG基因型患者空腹血糖浓度偏低(年龄/性别校正后,P<0.01)而HbA1c值未见差异;等位基因和基因型频率在各种糖尿病慢性并发症间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:浙江省温州地区汉族人群CDKAL1基因rs7756992多态性与T2DM发病相关联;结合文献报道,我们推测GG基因型可能与餐后血糖调节机制相关。

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种重要的人兽共患寄生原虫,具有中间宿主广泛、生活史复杂、传播方式多样、呈全球性分布等特点,可感染几乎所有的恒温动物,导致人兽共患的弓形虫病。弓形虫慢性感染约1/3的世界人口,对免疫缺陷患者、孕妇、孕畜的健康更是造成严重威胁。致密颗粒蛋白是由致密颗粒(弓形虫的一种亚细胞分泌器官)分泌的蛋白质,它们可通过操控宿主(细胞)基因表达、信号通路进而调控宿主细胞的免疫反应和细胞周期,并在蛋白质的转运和定位、营养物质的摄取、纳米管网络(IVN)的形成与稳定性的维持、逸出、慢性感染等生理过程中发挥重要作用。本文综述弓形虫致密颗粒蛋白基本生物学功能的最新研究进展,旨在为深入研究弓形虫的致病机制、鉴定新的抗弓形虫潜在药物靶点和疫苗候选分子提供借鉴。

乌骨藤提取物对原代新生大鼠心肌细胞的毒性研究

目的探讨乌骨藤提取物(MTE)对原代新生大鼠新生心肌细胞的毒性影响。方法分离和培养SD大鼠心肌细胞,将MTE组分A溶于二甲基亚砜,分别使用20、40、80、160和320μg/ml的MTE和8 000μg/ml的5-氟尿嘧啶作为阳性对照处理原代大鼠心肌细胞24 h,采用MTS法测定不同浓度MTE对体外培养原代大鼠心肌细胞增殖的影响;采用RTCA Cardio系统建立体外心脏毒性筛选模型,对大鼠心肌细胞增殖、搏动进行检测。结果原代心肌细胞加入不同浓度的MTE后,细胞存活受到显著抑制,半数存活浓度(EC50)为207.3μg/ml,随着MTE浓度的升高组分A抑制率增强(均P<0.05)。原代心肌细胞接种到RTCA Cardio E-Plate96孔板上,24h后出现心肌细胞搏动。MTE处理后,细胞指数(CI)值显著下降,240μg/ml MTE组分A处理后心肌细胞搏动迅速受到抑制,搏动频率由126次/min下降至0次/min,且不可恢复;160μg/ml和80μg/ml处理后分别在12h和6h后抑制作用减弱,搏动频率为40次/min和84次/min;40μg/ml基本无影响。结论 MTE组分A对原代新生大鼠心肌细胞具有细胞毒作用,能够显著影响其搏动功能。

品管圈在眼科医院感染管理中的应用

品管圈（quality control circle，QCC）是指同一个工作场所的人为了解决现场工作问题，提升工作绩效，自动自发地组成一个团队，然后团队成员分工合作，应用品质管理的手法工具，进行各种分析，解决工作场所的问题以达到改善业绩的目标。

一种检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株的构建

目的:构建一种能够检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株。方法:首先采用交叉PCR将增强型绿色荧光蛋白与铜离子“外排泵”基因copA的启动子融合构建响应铜离子的CopAp::gfpmut2-pET28a感应元件。然后利用Red重组系统分别敲除野生型大肠杆菌(E.coli)MC4100体内负责外排转运铜离子的基因,并将感应元件转化至突变菌中完成菌株的构建。最后优化出最佳检测条件,并将其初步应用于检测水环境中铜离子。结果:相对野生型菌株,E.coliΔcusA-ΔcopA-ΔcueO突变菌对铜离子的敏感性提高了64倍,从而使报告菌株的荧光信号显著增强,且荧光信号强度与铜离子浓度呈剂量依赖关系;报告菌株的线性检测范围为0.05~2.5μmol/L(0.0032~0.16 mg/L)Cu2+;与原子吸收光谱法相比,其对生活饮用水中0.05 mg/L和1 mg/L铜离子的回收率分别为87.90%和104.37%。结论:本研究构建报告菌株的灵敏度能够有效覆盖国标中针对生活饮用水和污水中铜离子的限制,从而为报告菌株的应用奠定了技术基础。

994例HIV感染者的临床分布及HIV和HCV合并感染的统计分析

目的了解该院2009~2012年检出人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者及HIV和丙型肝炎病毒（HCV）合并感染的临床分布,为预防HIV及HCV提供理论依据。方法收集2009年1月至2012年12月该院收治的HIV感染者及及HIV和HCV合并感染者的临床资料,根据性别、年龄进行分组对HIV合并HCV感染的情况进行统计分析。结果统计时间内共收集到HIV感染者994例,男性685例,女性309例;其中合并HCV的感染率为18.01%（179/994）,30~〈40岁年龄组HIV合并HCV感染的发生率最高,且男性组合并感染的发生率高于女性组。结论 HIV和HCV合并感染的发生率较高,临床上应重视这种合并感染的诊断和治疗。