妊娠期无症状高胆汁酸血症的临床特点分析

目的:探讨妊娠期无症状高胆汁酸血症(asymptomatic hypercholanaemia of pregnancy,AHP)的临床特点并与妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)进行对比分析。方法:收集2015年7月至2018年4月重庆医科大学附属第一医院的94例AHP孕妇、257例ICP孕妇和284例正常孕妇的临床资料,并对其进行回顾性分析。结果:(1)早发型(<28周)AHP孕妇所占比例高于早发型ICP孕妇(44.7%vs. 13.2%,P<0.05)。(2)AHP组不良妊娠结局的发生率(28.7%)高于对照组(10.9%),低于ICP组(50.2%),差异有统计学意义(P<0.017)。(3)在ICP孕妇中,高水平血清总胆汁酸(total bile acid,TBA,TBA≥40μmol/L)组医源性早产、自发性早产、羊水粪染、胎儿窘迫和转新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit,NICU)的发生率均高于低水平TBA(TBA<40μmol/L)组(P<0.05)。而AHP孕妇的高水平TBA组与低水平TBA组比较,其不良妊娠结局均无统计学差异(P>0.05)。(4)在高水平TBA孕妇中,AHP孕妇医源性早产和转NICU发生率均明显低于ICP孕妇(P<0.05);在低水平TBA孕妇中,AHP孕妇羊水粪染发生率明显低于ICP孕妇(P<0.05)。结论:AHP孕妇的临床特点不同于ICP孕妇,可增加不良妊娠结局风险。

直接电化学法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

本实验所用丝网印刷电极（SPCE）对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）具有极好的直接电化学响应性能，在低电位（＋O．200V）无需任何修饰的情况下，NADH在SPCE电极表面被氧化，据此可测定其含量。在最优实验条件下，NADH的氧化峰电流与其浓度在2．5×10-6～2．0×10-4mol／L范围内呈线性关系，相关系数r=0．9992，检测限可达1．0×10-6mol／L。该方法检测快速、灵敏度高、重现性好，具有良好的应用前景。

基于母胎胆汁酸代谢轮廓的妊娠肝内胆汁淤积症分度研究

目的:探讨基于母胎血清胆汁酸代谢轮廓的妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)分度。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法对61名正常孕妇,轻、重度ICP患者母、脐血的9种结合型胆汁酸成分进行测定,并将受试者分为建模集(n=40)与验证集(n=21),结合偏最小二乘判别分析对胆汁酸代谢轮廓进行分析、建模与验证。结果:母血胆汁酸代谢模型可区分正常孕妇组,轻度ICP组,与重度ICP组;脐血胆汁酸代谢模型可区分重度ICP组与非重度组。母、脐血分度模型的验证效率分别达90.5%与100.0%。牛磺熊去氧胆酸(P=0.004),牛磺胆酸(P=0.005)以及甘氨胆酸(P=0.032)在ICP孕妇中明显增高;甘氨石胆酸(P<0.001)和牛磺脱氧胆酸(P=0.001)在ICP胎儿中明显增高。结论:ICP母、脐血各有其特征的胆汁酸代谢轮廓,均可用于对ICP分度。

miR-21的高表达与肺癌预后关系的meta分析

目的:评价miR-21的高表达与肺癌预后的相关性。方法:检索PubMed,EMBASE,Google scholar,维普,CNKI等数据库,收集已公开发表的关于miR-21的高表达与肺癌预后相关性的文献,按meta分析的要求对原始文献的质量进行评估,采用STATA V12.0软件对各研究的效应量进行统计分析。结果:共纳入7篇文献(共369个病例),总生存率(OS)HR的合并值为1.34(95%CI:1.19至1.50,P<0.05)。结论:miR-21的高表达是肺癌预后的一个危险因素。

联用酶反应过程分析法和初速度法测定谷胱甘肽-S-转硫酶活性

目的:考察联用谷胱甘肽-S-转硫酶(Glutathione-S-transferase,GST)产物抑制反应过程分析法和初速度法测定GST活性的有效性。方法:阳离子交换层析纯化猪肝碱性GST同工酶。在25℃,用1.0 mmol/L 2,4-二硝基氯苯(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和50.0 mol/L谷胱甘肽(Glutathione,GSH)跟踪产物在340 nm吸收的变化。5.0 min内底物消耗比例低于设定界限时测定初速度;否则,用以反应时间为自变量且包含产物抑制的积分速度方程分析反应过程确定最大反应速度,再换算成优化GSH浓度下的初速度。结果:优化GST产物抑制常数后,只要被分析数据中GSH消耗55%以上,所得最大反应速度对被分析数据范围不敏感。用48 mol/L GSH将最大反应速度换算成初速度,联用策略所得GST活性的线性下限略高于初速度法,而线性上限提高4倍。结论:用积分速度方程分析酶反应过程并优化最大速度换算成初速度所需底物浓度,联用策略测定酶活性线性范围更宽,有望成为测定酶活性的新方法。

气相色谱-质谱法测定硫化氢中毒血液中的硫化物

目的：建立气相色谱-质谱（Gas chromatograph-mass spectrometry,GC/MS）法检测硫化氢中毒血液中硫化物的方法并用于实际检案分析。方法：血样本中加入苯扎氯铵与四硼酸钠混合溶液,在碱性条件下中毒血液中多种形态的硫化物转化成硫离子,用五氟溴卞（Pentafluorobenzyl bromide,PFBBr）衍生化,1,3,5-三溴苯（1,3,5-tribromobenzene,TBB）作为内标,通过液-液萃取法提取衍生物五氟苄基硫醚（Bis-pentaflu-orobenzyl-disulfide,BPFBD）,采用GC/MS仪检测,选择离子检测扫描（Selected ion monitoring,SIM）模式,内标法定量分析。结果：在硫化钠浓度为0.05~10.0μmol/ml范围的血样本中检测信号与硫化钠浓度有良好线性关系,相关系数为0.997 2,最低检出限为0.007 2μmol/ml。结论：本文建立的方法灵敏度高,特异性好,简便省时,分析结果准确可靠,适用于法医鉴定和临床检验血液中硫化氢的快速分析。

反相高效液相色谱法同时测定肝癌相关酪氨酸、缬氨酸对映体

目的：建立柱前衍生反向高效液相色谱荧光检测法同时对肝癌相关L-酪氨酸（L-tyrosine,L-Tyr）、D-酪氨酸（D-tyrosine,D-Tyr）、L-缬氨酸（L-valine,L-Val）、D-缬氨酸（D-valine,D-Val）进行拆分测定。比较正常人与原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）（以下简称原发性肝癌）患者血浆中酪氨酸与缬氨酸对映体含量的变化,考察它们与原发性肝癌的关系。方法：柱前衍生化试剂：邻苯二甲醛（O-phthaldialdehyde,OPA）和N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）;色谱柱：菲罗门Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：20.0 mmol/L磷酸二氢钠（p H 6.8）-乙腈为流动相的梯度洗脱;荧光检测波长设定：激发波长（λex）为350 nm,发射波长（λem）为450 nm;流速1 ml/min;柱温30℃;进样量10μl。结果：4种物质的回收率在90.74%~106.80%之间,线性关系良好,检出限分别为6.79 pg/ml（L-Tyr）,7.81 pg/ml（D-Tyr）,1.86 pg/ml（L-Val）,1.95 pg/ml（D-Val）。利用该方法,对20名健康志愿者和23名HCC患者的血浆进行测定,统计分析结果表明,L-Tyr明显升高（P=0.011）,L-Val（P=0.019）、D-Val（P=0.006）显著性降低,D-Tyr（P=0.973）无明显变化。结论：该方法准确、灵敏、重复性好,适用于实验室研究与临床检测。

野百合碱诱导运动诱发肺动脉高压大鼠模型的建立及他达那非早期干预效果

目的:建立运动诱发肺动脉高压(exercise induced PH,EiPH)大鼠模型,早期明确诊断,及时给予治疗,评估大鼠PH进展、肺血管重塑情况及生存率。方法:雄性Sprague Dawely(SD)大鼠60只,体质量200~220 g,大鼠注射野百合碱(monocrotaline,MCT)(60 mg/kg)后,分别在第1、3、5、7、9天检测大鼠静息状态下平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure,mPAP)及运动状态下峰值mPAP(maximum mPAP,mPAPmax)。选取大鼠静息mPAP<25 mmHg且运动状态下mPAPmax>30 mmHg定义为EiPH组;将大鼠静息mPAP≥25 mmHg随机分为静息PH(rest PH,rPH)组和PH组;注射生理盐水的大鼠为对照组。EiPH组与rPH组大鼠分别给予等量他达那非灌胃2周。各组大鼠于实验终点完成超声心动图检查,改良右心导管测压,留取心肺组织。结果:MCT注射后第7天,大鼠运动状态下mPAPmax较对照组明显升高[(38.5±2.7)mmHg vs.(27.24±0.46)mmHg,P=0.000]。MCT注射后第35天,rPH+T组大鼠静息mPAP升高[(26.67±0.11)mmHg vs.(35.23±0.47)mmHg,P=0.000]、右室肥厚指数增加(0.34±0.01 vs.0.46±0.02,P=0.004)、肺动脉中膜厚度百分比增加(44.4%vs.55.6%,P=0.008)。结论:本研究成功建立EiPH大鼠模型。他达那非干预实验结果表明,早期阶段给予PH大鼠治疗的降压及抑制肺血管重构效果优于同等剂量药物的晚期用药。

颗粒蛋白前体通过抑制IL-6表达减轻哮喘气道炎症

目的:探究颗粒蛋白前体(PGRN)在过敏性哮喘中的作用及机制。方法:分别在野生鼠和IL-6缺陷鼠中设置对照组和哮喘模型组,每组8只。模型组中,在第0日和第7日致敏小鼠(腹腔注射OVA 100μg),从第14日起连续激发8 d(5%OVA雾化吸入,30 min/d,每日1次),末次激发24 h后取标本;对照组用PBS代替OVA做相同处理。采集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞计数和分类计数;HE染色观察肺组织病理情况;Q-PCR及ELISA检测小鼠肺匀浆、血清和BALF中细胞因子水平。用IL-13刺激A549或BEAS-2B细胞建立体外哮喘炎症模型,每组3个复孔,共4组:PBS处理组、IL-13处理组、IL-13与重组人PGRN蛋白(rhPGRN)共同处理组及p38磷酸化抑制剂(SB203508)处理组。0 min~48 h后收集细胞及上清,用Q-PCR及ELISA检测PGRN和IL-6的表达;Western blot检测p38的磷酸化。结果:与对照组相比,哮喘组小鼠肺匀浆和BALF中PGRN均显著降低(P<0.01),血清PGRN有降低的趋势,然而哮喘小鼠BALF中IL-6显著升高(P<0.05)。与野生鼠哮喘组相比,IL-6缺陷鼠哮喘组BALF中白细胞总数降低(P<0.05),中性粒细胞数降低(P<0.05),PGRN显著升高(P<0.05),肺部病理损伤也减轻。体外实验中,IL-13处理组与PBS处理组相比,PGRN显著降低(P<0.05),IL-6显著增高(P<0.05),p38的磷酸化增加;p38抑制剂处理组比未处理组中IL-6水平降低(P<0.05)。IL-13与rhPGRN共同处理组的IL-6显著低于IL-13处理组(P<0.05),p38的磷酸化降低(P<0.05)。结论:PGRN通过抑制p38磷酸化降低IL-6水平从而减轻哮喘小鼠气道炎症。

用4-硝基-1-萘磷酸酯为底物测定碱性磷酸酶活性

目的：合成4-硝基-1-萘磷酸酯（4-nitro-1-naphthyl phosphate,NNPP）为显色底物测定牛小肠黏膜碱性磷酸酶（alka-line phosphatase,ALP）。方法：4-硝基-1-萘酚（4-nitronaphthol,4-NNP）与三氯氧磷反应,经硅胶柱纯化制得NNPP;检测产物吸收跟踪水解过程测定初速度,双倒数法测定米氏常数（Michaelis-Menten constant,Km）。结果：ALP水解NNPP产物最大差吸收峰接近460 nm,等吸收波长接近405 nm。与p-硝基苯酚相比,在pH 6.0~7.0间4-NNP消光系数为其3倍以上,在pH 7.0以上为其2倍以上。ALP对NNPP的Km约12μmol/L而p-硝基苯基磷酸酯的Km约35μmol/L,产物磷酸相对NNPP的竞争性抑制常数接近20μmol/L。ALP催化NNPP水解效率接近水解p-硝基苯基磷酸酯的40%。结论：NNPP可用于测定ALP活性,且有望与作用于p-硝基苯酚类显色底物的其它酶联用实现单通道两种酶同步测定。

S-腺苷甲硫氨酸通过hepaCAM抑制膀胱癌细胞增殖迁移

目的:探究S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)通过hepaCAM对膀胱癌(bladder cancer,BCa)细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法:不同浓度SAM作用于体外培养的T24和BIU细胞,四甲基偶氮唑盐(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测SAM对细胞增殖的影响。用不同浓度的SAM(0、0.8、1.6 mmol/L)处理T24和BIU细胞72 h后,Real-time PCR和Western blot法检测甲基结合蛋白-2(methyl DNA-binding domain protein,MBD2)、组蛋白去乙酰化酶-1(histone deacetylases,HDAC1)以及肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)的表达;划痕及Transwell实验检测各组细胞的迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力。结果:SAM抑制T24和BIU细胞生长且与药物浓度和作用时间呈正相关。与0 mmol/L组相比,0.8 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后MBD2 m RNA表达明显降低(P=0.048;P=0.038),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);0.8 mmol/L的SAM处理T24细胞72 h后HDAC1mRNA和蛋白水平明显降低(P=0.000;P=0.001);0.8 mmol/L的SAM处理BIU细胞72 h后HDAC1 m RNA水平无统计学差异(P=0.140),蛋白表达明显降低(P=0.004);0.8 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后hepaCAM m RNA水平明显增加(P=0.003;P=0.008),蛋白表达无统计学差异(P=0.770;P=0.381);1.6 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后MBD2 m RNA水平明显降低(P=0.003;P=0.000),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);HDAC1 m RNA水平明显降低(均P=0.000),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);hepaCAM mRNA和蛋白表达均明显增加(均P=0.000)。划痕及Transwell实验结果显示SAM处理T24和BIU细胞72 h后迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。克隆形成实验结果显示SAM处理T24和BIU细胞72 h后细胞克隆形成能力明显降低(P<0.05)。结论:SAM可通过MBD2/HDAC1逆转hepaCAM的表达,抑制BCa细胞的增殖及迁移能力。