苦皮藤素Ⅳ杀虫机理电生理研究初报

应用电生理技术研究了苦皮藤素 对兴奋性突触后电位 ( EPSP)和神经 -肌肉接头兴奋性接点电位 ( EJPs)的作用。甘露醇间隙法对美洲大蠊 ( Periplaneta americana)中枢神经离体标本兴奋性突触后电位 ( EPSP)的测定表明 ,质量浓度为 0 .1 g/L的苦皮藤素 在用药后 72 min阻断了 EPSP。细胞内微电极记录法对果蝇 ( Drosophila melanogaster)运动神经 ,即腹纵肌离体标本的神经 -肌肉兴奋性接点电位 ( EJPs)的测定表明 ,0 .1 g/L的苦皮藤素 作用 1 9.5min可阻断 EJPs。

拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析

目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。

苦皮藤素Ⅴ引起粘虫兴奋的作用机理初探

苦皮藤素 是从杀虫植物苦皮藤 (Celastrus angulatus Max)根皮提取物中分离得到的对昆虫有毒杀活性的一种新化合物。通过对该化合物引起粘虫产生类似神经毒剂兴奋性症状的机理研究 ,结果表明 ,苦皮藤素 对昆虫中枢神经系统兴奋性突触后电位(EPSP)和轴突动作电位 (AP)无显著影响 ;试虫经苦皮藤素 处理后 ,抽搐期和失水期体内乙酰胆碱酯酶 (ACh E)活性分别下降 33.9%和 39.6% ,谷氨酸 (Glu)含量分别升高 2 8.44%和 49.1 8% ,γ-氨基丁酸 (GABA)含量分别降低 42 .1 1 %和 44.47%。抽搐期体内谷氨酸脱羧酶活性降低了 8.67%。

苦皮藤素V引起粘虫失水的作用机理初探

对苦皮藤素 引起粘虫失水的作用机理进行了初步研究。结果表明 :中毒试虫经消化道流失的液体与对照试虫血淋巴中蛋白质含量无显著差异 ,但比对照试虫肠液中蛋白质含量高 47.97%。认为 ,试虫经消化道丧失的液体主要为昆虫的血淋巴 ;试虫经苦皮藤素 处理后 ,抽搐期中肠 Na+ / K+ - ATP酶活性与对照无显著差异 ,而失水期酶活性升高了 10 .0 7% ,并且苦皮藤素 引起中毒试虫中肠环腺苷酸 (c AMP)

拟除虫菊酯类农药多残留酶联免疫分析方法的条件优化

[目的]优化拟除虫菊酯类农药多残留检测条件,建立适用于多种菊酯类农药的酶联免疫分析方法。[方法]优化多残留酶联免疫检测方法,建立半抗原对单链抗体的标准抑制曲线。对7种拟除虫菊酯类农药进行交叉反应,计算交叉反应率。[结果]最佳检测条件:包被抗原以质量浓度5 mg/L于37℃包被微孔2 h、单链抗体稀释640倍、稀释液中甲醇体积分数为10%、竞争时间为80 min、HRP/Anti-His酶标二抗稀释质量浓度为1/7000 g/L、显色20 min。该方法对氯菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯有较强交叉反应,交叉率分别为62.31%、43.43%、36.93%。[结论]成功建立可检测多种拟除虫菊酯类农药的酶联免疫分析方法,为免疫分析试剂盒的研发奠定基础。