油菜附加系EE抗根结线虫的蛋白质组学初步研究

【目的】通过蛋白质组技术寻找抗线虫油菜附加系EE和感病油菜接种根结线虫后根系表达蛋白的差异,筛选出抗根结线虫相关蛋白。【方法】以抗根结线虫的油菜附加系EE和感根结线虫的油菜根系为材料,通过蛋白质组学双向电泳技术和Image Master 5.0软件分析筛选差异表达蛋白,经MALDI-TOF-TOF/MS质谱测序鉴定蛋白。另外,通过Gene Ontology,KEGG,WoLF PSORT和STRING生物信息学分析对鉴定蛋白进行功能分类、代谢途径分析、亚细胞定位和蛋白互作分析。【结果】Madora和油菜附加系EE分别有1184和1163个蛋白点。21个差异蛋白质经MALDI-TOF/TOF MS质谱测序成功鉴定,其中一半以上定位于细胞外(52.38%),其次为细胞质(28.57%),叶绿体(4.76%),线粒体(4.76%),内质网(4.76%),液泡(4.76%)。蛋白质相互作用分析表明,与抗病相关的上调蛋白内源性α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂与3-异丙基苹果酸脱水酶大亚基,微管蛋白α-6链,表皮特异性分泌糖蛋白EP1,BnaC04g03560D和BnaC06g34210D 5个蛋白质具有一定的相关性。【结论】筛选的抗线虫相关蛋白对于将来克隆抗性基因和用分子标记培育新的抗性品种奠定基础。

油萝卜抗胞囊线虫基因的染色体定位及其在油菜附加系中的稳定性

【目的】油萝卜(2n=18,9条染色体分别被称作a～i)具有抗甜菜胞囊线虫的基因。探索油萝卜携带的抗甜菜胞囊线虫基因所在的染色体和外源的油萝卜染色体在油菜中的遗传稳定性。【方法】9个油菜附加系进行自花受粉,分别获得附加系的自交F2代。利用筛选的分子标记检测和原位杂交(FISH)检测附加染色体在F2代中的遗传稳定性;通过对9个油菜附加系F2代接种甜菜胞囊线虫的2龄幼虫,鉴定携带抗甜菜胞囊线虫基因所在的染色体。【结果】9个附加系自交F2代中的附加染色体遗传表现不一,5个油菜附加系的F2代中均有2条附加染色体,能稳定遗传;4个附加系的自交后代中附加染色体的遗传表现不稳定,部分后代中无附加染色体。FISH检测9个附加系自交F2代中的附加染色体表明:与分子标记检测的结果相符,并且4个不稳定的附加系中,有的自交后代虽然有附加染色体,但有1或2条。接种甜菜胞囊线虫测定结果表明,含有油萝卜染色体DD的油菜附加系对甜菜胞囊线虫的抗性水平与附加染色体的供体油萝卜相当,而其它8个附加系的自交后代未表现出抗性,与受体油菜相近。【结论】油萝卜的9条染色体分别附加到油菜中后,其遗传稳定性因附加的染色体而异,有的能稳定遗传,有的在自交后代中丢失1或2条;抗甜菜胞囊线虫的基因在d染色体上。