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Toll样受体4(TLR4)基因剔除小鼠构建及初步表型分析
被引量:
4
1
作者
郭洋
万颖寒
+7 位作者
王珏
龚慧
周宇
慈磊
万志鹏
孙瑞林
费俭
沈如凌
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1-9,共9页
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Toll样受体4(TLR4)基因敲除小鼠模型,并观察突变小鼠对革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)刺激响应的变化。方法:针对TLR4基因外显子2设计并合成1对sgRNA片段,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法,建立T...
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Toll样受体4(TLR4)基因敲除小鼠模型,并观察突变小鼠对革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)刺激响应的变化。方法:针对TLR4基因外显子2设计并合成1对sgRNA片段,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法,建立TLR4基因敲除小鼠,通过繁育获得基因敲除纯合子小鼠(TLR4-/-小鼠);通过LPS刺激,分析TLR4-/-小鼠对炎症应激的反应情况,并在分子和病理水平上和野生型对照(WT)进行比较。结果:PCR及测序检测表明TLR4基因外显子2在小鼠基因中被成功敲除;给予LPS刺激后,IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa等炎症因子的表达在野生型小鼠的心、肝和肺组织中显著上调,而在TLR4-/-小鼠中则几乎没有变化;血生化指标显示LPS刺激后WT小鼠血清中的尿素(Urea)和肌酐(Cre)水平显著升高,而TLR4-/-小鼠刺激前后无显著变化,病理分析同样发现TLR4-/-小鼠能够抵抗LPS对肾组织的损伤。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TLR4基因剔除小鼠模型,TLR4的缺失能够降低IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa炎症因子对LPS刺激的响应,抑制LPS引起的炎症反应及对组织的损伤。
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关键词
Toll样受体4(TLR4)
CRISPR/Cas9系统
基因敲除
LPS
原文传递
题名
Toll样受体4(TLR4)基因剔除小鼠构建及初步表型分析
被引量:
4
1
作者
郭洋
万颖寒
王珏
龚慧
周宇
慈磊
万志鹏
孙瑞林
费俭
沈如凌
机构
同济大学
生命科学
与技术
学院
上海
实验
动物
研究
中心
模式生物及比较医学联合实验室上海实验动物研究中心同济大学生命科学与技术学院
上海
市
模式
动物
工程
技术
研究
中心
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1-9,共9页
文摘
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Toll样受体4(TLR4)基因敲除小鼠模型,并观察突变小鼠对革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)刺激响应的变化。方法:针对TLR4基因外显子2设计并合成1对sgRNA片段,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法,建立TLR4基因敲除小鼠,通过繁育获得基因敲除纯合子小鼠(TLR4-/-小鼠);通过LPS刺激,分析TLR4-/-小鼠对炎症应激的反应情况,并在分子和病理水平上和野生型对照(WT)进行比较。结果:PCR及测序检测表明TLR4基因外显子2在小鼠基因中被成功敲除;给予LPS刺激后,IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa等炎症因子的表达在野生型小鼠的心、肝和肺组织中显著上调,而在TLR4-/-小鼠中则几乎没有变化;血生化指标显示LPS刺激后WT小鼠血清中的尿素(Urea)和肌酐(Cre)水平显著升高,而TLR4-/-小鼠刺激前后无显著变化,病理分析同样发现TLR4-/-小鼠能够抵抗LPS对肾组织的损伤。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TLR4基因剔除小鼠模型,TLR4的缺失能够降低IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa炎症因子对LPS刺激的响应,抑制LPS引起的炎症反应及对组织的损伤。
关键词
Toll样受体4(TLR4)
CRISPR/Cas9系统
基因敲除
LPS
Keywords
TLR4
CRISPR/Cas9 gene
Knock-out
LPS
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Toll样受体4(TLR4)基因剔除小鼠构建及初步表型分析
郭洋
万颖寒
王珏
龚慧
周宇
慈磊
万志鹏
孙瑞林
费俭
沈如凌
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
4
原文传递
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