GC-MS与GC-MS/MS在灵芝农药残留分析中的应用

目的比较GC-MS和GC-MS/MS在灵芝农残分析中性能的差异,并考察时间锁定库对未知农药样品的定性筛查能力。方法灵芝样品加入一定量的农药标准品,分别采用GC-MS和GC-MS/MS进行分析,比较两种仪器的稳定性和灵敏度,同时采用GC-MS对含有未知农药的灵芝样品进行定性筛查和定量测定。结果在测试10 ppb以下低浓度化合物时,使用GC-MS/MS有较好的峰形和响应,不会受基质的干扰,而使用GC-MS时目标化合物会部分受基质干扰。研究还采用时间锁定库对68种农药进行了系统筛查。结论气质联用可以较好地进行灵芝农残的分析,其包含的时间锁定库可在缺少相应标准品的情况下,对各种农药成分进行定性筛查。本研究也为中药种植、生产企业准备2015年版《中国药典》有关中药安全性指标检测提供一些思路与参考。

荷叶水提取物的急性毒性及辅助降血脂功效研究

目的:评价荷叶水提取物的急性毒性及辅助降血脂功效,为荷叶水提取物在功能食品及药品中的开发利用提供依据。方法:通过大鼠急性经口毒性试验考察其安全性;通过考察荷叶水提取物对高脂血症模型大鼠体重、血脂、体脂、肝脏,以及肝脂肪变性HepG2细胞脂质代谢的影响,评价其辅助降血脂功效。结果:雄性大鼠LD50为7.5 g·kg^(-1) BW,雌性大鼠LD50为6.1 g·kg^(-1) BW,平均LD50为6.7 g·kg^(-1) BW,安全性良好。与模型对照组相比,各剂量荷叶水提取物大鼠的血清甘油三酯(TG)水平明显降低,高、低剂量组大鼠的血清总胆固醇(TC)水平均明显降低。此外,中、低剂量组大鼠1~4周体重、空腹体重降低,中剂量组大鼠肝脏重量降低。荷叶水提取物对肝脂肪变性HepG2细胞内脂质含量影响不显著。结论:荷叶水提取物安全性较高,为实际无毒级,具有较好的辅助降血脂功效,可以广泛应用于降脂产品中。

灵芝孢子粉质量标准提高研究

目的建立灵芝孢子粉的HPLC特征图谱及三油酸甘油酯的含量测定方法。方法采用ACCHROM Unitary-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-异丙醇(51∶49),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测器为蒸发光散射检测器。结果建立了灵芝孢子粉HPLC特征图谱,确定了10个共有峰,指认了其中8个共有峰的成分分别为三亚油酸甘油酯、二亚油酸油酸甘油酯、二亚油酸棕榈酸甘油酯、二油酸亚油酸甘油酯、棕榈酸油酸亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、二油酸棕榈酸甘油酯和二油酸硬脂酸甘油酯。三油酸甘油酯进样量在0.613 2~18.40μg(r=0.998 9)内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为104.1%(RSD=1.8%)。结论特征图谱结合三油酸甘油酯的含量测定,能更好地控制灵芝孢子粉的质量。

基于结肠癌HCT116细胞三维培养模型的灵芝水提物抗肿瘤活性研究

目的采用结肠癌HCT116细胞的二维(2D)和三维(3D)培养模型研究灵芝水提物(Ganoderma lucidum water extract,GLWE)的抗肿瘤作用。方法采用紫外-可见光分光光度法测定GLWE中灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)、三萜和甾醇的含量,HPLC分析GLP中水溶性单糖的组成和比例;以Matrigel基质胶为基质材料建立体外HCT116细胞3D培养模型,评价GLWE的抗肿瘤及辅助抗肿瘤活性;CCK-8法检测细胞活力;Real-time PCR检测细胞mRNA表达水平;Western blotting检测细胞蛋白表达水平。结果 GLWE中GLP和三萜及甾醇的含量分别为20.92%和7.18%,其中GLP主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖组成;GLWE和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)作用48 h可呈浓度依赖性抑制2D和3D培养的HCT116细胞增殖;与2D培养相比,3D培养的HCT116细胞中整合素β1(Integrin β1)和钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA的表达显著升高,并对GLWE和5-FU的敏感性降低;在HCT116细胞3D培养模型中,GLWE既可降低CDK2、CDK4和Bcl-2蛋白的表达,升高p21、p27、cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达,还可显著降低Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达,并加强5-FU的抗肿瘤活性。结论 GLWE通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制3D培养的HCT116细胞增殖,并通过抑制Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达增强5-FU的抗肿瘤活性。