精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

超声波辅助醇提法提取银杏叶中多种活性成分

采用超声波辅助醇提法综合提取银杏叶中多种活性成分,通过溶剂萃取法脱脂、去叶绿素,经DM130大孔树脂吸附脱附后,再对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮分阶段逐一分离纯化,并对工艺条件进行了优化。结果表明,在75%乙醇为提取溶剂、超声时间为2.0 h、石油醚为脱脂溶剂的最佳条件下,分别采用0.2%H 2O 2脱色法、石油醚沉淀法、酸碱除杂法对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮进行分离纯化,得到高纯度银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮,其纯度分别为85.20%、98.25%、35.72%,产率分别为4.67%、3.80%、0.77%。该方法工艺简单、成本低、资源利用度高,为银杏叶的综合开发利用提供了参考。

混合式教学在“制药工艺综合实训实验”上的探索与实践

“制药工艺综合实训实验”是一门紧密对接职业岗位的实践教学课程。为了提高“制药工艺综合实训实验”的教学质量,作者探索了线上线下相结合的实验教学模式。课前采用在线预习教学内容和规范化实验教学视频,课中采用线上线下相结合,并将思政理念贯穿于每个实验的教学方法。实践结果表明,线上线下混合式教学方法能有效利用学生的课余时间,规范学生的实验操作,提高学生的学习兴趣,教学效果显著,可为同类实践性课程改革提供新思路。

基于功能化金纳米颗粒检测农产品中Pb^(2+)的研究

研发一种基于对谷胱甘肽功能化金纳米颗粒(GSH @ AuNPs)比色法快速简便检测农产品中的重金属铅离子浓度的方法。消化处理后的农产品中有 Pb^(2+)存在时,Pb^(2+)可诱导功能化金纳米颗粒聚集而形成稳定的螯合物,体系颜色逐渐加深,由酒红色变为蓝色或紫色,从而实现比色检测。结果表明:在优化显色条件后,该方法具有良好的重现性、灵敏度和抗干扰性;功能化金纳米颗粒检测 Pb^(2+)的检测限可以达到 0.01 μmol·L^(-1),在 2.072-207.2 μg·L^(-1);范围内 Pb^(2+)质量浓度与吸光度的变化值呈良好的线性关系(R^(2)= 0.989 5);通过同石墨炉原子吸收光谱法测定农产品中 Pb^(2+)浓度的比较,两种方法的测定结果基本保持一致,无显著差异。该方法操作简单,无须大型仪器,非常适合基层实验室的快速筛查。