LncRNA HOTAIR和miR-122在肝细胞癌循环外泌体中的表达及与AFP、PIVKA-Ⅱ的关系

目的检测肝细胞癌(HCC)患者循环血样中外泌体LncRNA HOTAIR和miR-122表达情况与患者临床病理特征以及血清肿瘤标志物的关系。方法收集2019年1月-2020年1月在本院确诊的97例HCC患者,并选取50例非恶性病变患者和50例健康人的血清样本分别作为良性对照和正常对照组。提取受试者血清外泌体,采用QPCR法检测外泌体LncRNA HOTAIR和miR-122相对表达量,并检测血清甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原Ⅱ(PIVKA-Ⅱ)水平。结果与健康对照组和良性对照组比较,HCC组患者外泌体LncRNA HOTAIR相对表达量升高,同时miR-122相对表达量相应降低(P<0.05);且HCC患者血清外泌体LncRNA HOTAIR和miR-122相对表达量呈负相关性,r=-0.740,P<0.001。此外,HCC患者血清外泌体LncRNA HOTAIR和miR-122相对表达量与血清AFP、PIVKA-Ⅱ有关(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清外泌体LncRNA HOTAIR和miR-122相对表达量对于HCC以及HCC患者肝外转移诊断的曲线下面积分别为0.773(95%CI:0.649-0.876)、0.818(95%CI:0.674-0.923)和0.878(95%CI:0.812-0.944)、0.765(95%CI:0.671-0.859),且对于HCC肝外转移的诊断效能则高于血清AFP和PIVKA-Ⅱ(P<0.05)。结论 HCC患者循环血外泌体LncRNA HOTAIR表达升高,同时miR-122表达降低;这与患者血清中AFP和PIVKA-Ⅱ水平及肝外转移风险有关。

乳腺癌组织中DNA修复蛋白Ku80的表达及其生物学意义

目的探讨乳腺癌组织中Ku80蛋白的表达及其生物学意义。方法选取武汉中核中核中同蓝博医学检验实验室2010年1月至2019年12月确诊的80例原发性乳腺癌患者的手术切除标本,采用免疫组织化学分析原发性乳腺癌组织Ku80的表达与细胞增殖相关活性蛋白(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、人表皮生长因子受体2(HER2)、P53的相关性;培养人乳腺癌细胞BT-474,分为siRNA-Ku80组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,应用Western Blot、Transwell法和MTT法分别检测各组Ki67、MMP-2、P53和HER2水平、细胞侵袭能力和增殖情况。结果乳腺癌组织中Ku80与HER-2、Ki67和MMP-2的表达呈正相关(P<0.05),与P53的表达无明显相关性(P>0.05);Western Blot结果显示siRNA-Ku80组乳腺癌细胞HER2,Ki67和MMP-2蛋白的表达下降,与对照组和空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),P53蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05);Transwell结果显示siRNA-Ku80组侵袭细胞计数明显减少,与对照组和空白对照组差异有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示siRNA-Ku80对乳腺癌细胞BT-474生长有抑制作用,在24h、48h和72h的抑制率分别为9.83%、39.71%和51.20%,与空白组和siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌组织中Ku80的表达与HER-2、Ki67和MMP-2的表达呈正相关;RNA干扰抑制Ku80后,乳腺癌细胞HER-2、Ki67和MMP-2的表达减少,乳腺癌细胞的增殖力和侵袭力降低;提示Ku80的异常表达可能与乳腺癌发生相关。

骨髓间充质干细胞浓度调节Treg/Th17表达的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)浓度对调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)表达的影响。方法贴壁法提取大鼠BMMSCs并传代培养至P4代,油红O染色法及钙盐染色法测定P3代成脂及成骨诱导能力。倒置显微镜下标记CD29、CD90、CD45荧光抗体。磁珠法分选大鼠CD4^(+)T细胞,流式细胞仪测定细胞纯度。将CD4^(+)T细胞与浓度不同的BMMSCs(0.5倍、1倍、2倍、4倍浓度组)共培养3 d,流式细胞仪测定Treg、Th17增值比例,流式微球分析法检测转化生长因子-β(TGF-β)及白介素(IL-6、IL-10、IL-17)水平。结果本研究P4代BMMSCs形态均匀,且呈梭形紧密排列,成脂诱导后镜下呈现橘红色脂肪小滴,成骨诱导后镜下呈现黑钙盐结节。CD90、CD29于BMMSCs表面阳性表达,CD45弱表达。磁珠法分选出CD4^(+)T细胞约(5.75±0.36)×10^(6)个/ml,细胞纯度>95%。共培养后,在Treg增殖比例上,2倍>1倍>0.5倍>4倍浓度组,2倍浓度组与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在Th17增殖比例上,1倍>2倍>0.5倍>4倍浓度组,0.5倍浓度组与各组组间比较,4倍浓度组与1倍、2倍浓度组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在TGF-β水平上,1倍>2倍>4倍>0.5倍浓度组,1倍浓度组与0.5倍、4倍浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在IL-10水平上,2倍>1倍>4倍>0.5倍浓度组,0.5倍浓度组与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在IL-6、IL-17水平上,各组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论BMMSCs具多向分化潜能,CD4^(+)T细胞分化成Treg、Th17的增殖比例受到BMMSCs浓度的影响,较高浓度时增殖效应最强,高浓度时抑制增殖,两者增殖比例变化与相关因子表达水平并不同步。