内质网应激对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21 mRNA表达的调节作用

目的在m RNA水平探讨内质网应激对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21表达的影响。方法利用经典鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,再用毒胡萝卜内酯分别按照剂量梯度(0、6.25、12.5、25、50和100 nmol/L)和时间梯度(0、1、3、6和12 h)进行处理,实时PCR检测内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白和葡萄糖调节蛋白78以及成纤维细胞生长因子21 m RNA的表达水平。结果毒胡萝卜内酯能诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激,促进C/EBP同源蛋白、葡萄糖调节蛋白78和成纤维细胞生长因子21 m RNA水平显著升高,且与毒胡萝卜内酯的剂量和处理时间呈正相关。当用100 nmol/L毒胡萝卜内酯处理6 h后,成纤维细胞生长因子21 m RNA水平显著增高,为对照组的114.55倍(P<0.05)。蛋白激酶C抑制剂钙磷酸蛋白C能阻断由毒胡萝卜内酯诱导的内质网应激,并伴随成纤维细胞生长因子21 m RNA水平的下降。结论内质网应激能上调3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21 m RNA表达,且可被蛋白激酶C抑制剂钙磷酸蛋白C阻断。

“新筛”干血斑在耳聋基因检测中的应用

目的将新生儿遗传代谢病筛查(简称“新筛”)后剩下的干血斑继续用于耳聋基因提取和飞行质谱检测,从而减少耳聋基因检测过程中的取样频次并缩短检测周期。方法在碱水煮沸法提取耳聋基因的基础上优化碱水的pH值和用量,使“新筛”干血斑DNA提取浓度达到新鲜血斑水平。结果用pH值为9、10、11、12的碱水从干血斑中提取DNA时,DNA的浓度与碱水pH值呈正相关(r=0.906,P=0.094),20个耳聋基因位点均能被正常检出;当pH值达到12时,质谱峰图信号响应值减小,检测质量下降。用60、70、80、90μL pH值为11的碱水从“新筛”干血斑中提取DNA时,DNA浓度与碱水体积呈负相关(r=-0.988,P=0.012);用90μL pH值为11的碱水时,有1例样本547G>A位点基因被漏检,用80μL pH值为11的碱水时,DNA提取浓度和新鲜血斑最接近(t=0.035,P=0.974),同时质谱峰图良好。结论用80μL pH值为11的煮沸碱水从“新筛”干血斑中提取DNA,可获得较好的耳聋质谱检测结果,为搭建“新筛”和耳聋自动化检测平台提供一定的技术参考。

浅析高通量测序过程质量监督管理

近年来随着高通量测序技术的不断发展和检测成本的持续下降,高通量测序也已经发展成为重要的临床基因分析技术。因此,对专业的技术人才、临床专家和信息分析人员的综合素质要求较高,同时也对实验室硬件设施及管理水平要求也提出了更高要求。为了保证检测结果的准确性,应建立测序全过程的质量控制体系,同时实施质量监督管理,及时识别检测过程中的质量风险。

含何首乌制剂致药物性肝损伤患者TCR免疫组库特征研究

探索含何首乌制剂致药物性肝损伤患者的免疫状态,分析其免疫特征。研究采用病例对照设计,通过重点专科监测收集含何首乌制剂致药物性肝损伤的病例,控制含何首乌制剂品种、性别、年龄、基础疾病和合并用药5个匹配因素,按照1∶1从前瞻性医院集中监测患者中匹配使用含何首乌制剂但未发生肝损伤的病例,记录2组患者的人口学信息、疾病信息、用药信息及实验室检查信息,并采集静脉血,应用高通量测序技术检测基因序列并分析2组患者T细胞受体(TCR)免疫组库特征。研究共纳入46对患者,结果显示含何首乌制剂致药物性肝损伤患者与未发生肝损伤患者TCR免疫组库在CDR3数量及克隆种类、CDR3区氨基酸序列长度、V基因与J基因丰度、V-J基因交联,以及免疫组库的多样性上均存在显著性差异,研究发现了含何首乌制剂致药物性肝损伤患者的免疫组库多样性特征及高频率V-J交联特征,为筛选用药人群以降低含何首乌制剂致肝损伤的发生提供了参考。

长沙市不同唐氏综合征筛查策略的性能以及卫生经济学分析

目的比较无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)与孕中期血清学筛查对于胎儿染色体数目异常的筛查效果并评估4种筛查策略对于预防唐氏综合征的卫生经济学价值。方法对长沙市妇幼保健院2018年3月1日至2019年12月31日的54026例同时完成NIPT和孕中期血清学筛查的单胎孕妇的临床资料进行回顾分析,为NIPT高风险孕妇提供产前诊断,通过电话或民生系统随访妊娠结局。从卫生经济学角度模拟4种筛查策略,并对其进行成本效果分析。结果NIPT的灵敏度、特异性和阳性预测值均高于孕中期血清学筛查。策略1~4分别成功预防了71、29、52和54例唐氏综合征患儿的出生;安全指数分别为0.0036、0.3944、0.2215和0.1281。NIPT费用降至600元/例时,成本效果比分别为46.33万元、60.55万元、44.30万元和39.49万元。策略1与策略4的增量成本效果比为68.04万元。结论NIPT各项检测性能均显著优于孕中期血清学筛查。当NIPT费用降至600元/例时,策略1在具有效果最好、安全性及准确率最高优势的同时也具备了更好的卫生经济学价值。

大规模检测平台在新型冠状病毒防控中的作用:基于新型数值模型的实证研究

目的为应对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的大规模流行,依托有资质、有能力的检测机构,建立了每日万人份的应急核酸检测及千人份高通量测序实验室(武汉“火眼”实验室)。运用数学模型分析武汉“关闭离汉通道”后检测能力快速扩大对于疫情防控效果的影响。方法在2020年1月23日武汉“关闭离汉通道”后,依据湖北省卫健委通报的疑似病例数据,以及“火眼”实验室每日检测数据,通过建立非线性、竞争性微分方程模型,模拟检测能力对实现疑似病例“清零”和“日清日结”的影响。结果在万人级病原检测实验室没有建成的情况下,疑似患者高峰数量将从23000例上升到33700例(增长47%),疑似患者数量下降的转折点将延后6 d,实现“日清日结”将延迟11 d,疑似患者隔离成本将增加124%;万人级病原检测实验室饱和运转的情况下,疑似患者例数高峰将减少56%,超过22800例疑似患者能够提前获得诊断和收治,疑似患者数量下降转折点将提前1周到来,实现“日清日结”可提前约12 d,隔离成本可减少72%;理想情况下,若“关闭离汉通道”时立即将日检测能力超过10500例的规模化检测平台投入使用,则可始终保证疑似病例“日清日结”。为让“关闭离汉通道”持续时间和隔离成本最小化,需将规模化、标准化检测平台建设与“关闭离汉通道”、床位扩容、加强救治能力等措施同步执行,并向检测平台持续送样,保证饱和运行。结论建设“平战结合”的精准检测平台是新发传感染病防控的关键一环,应作为重要基础设施统筹配置加以保障。

GJB2相关感音神经性耳聋防治

耳聋是严重威胁人类健康的重大疾病,全球4.6亿人存在听力障碍,每年约花费7,500亿美元.在我国,听障人群占所有残疾人群33%,是全球听障人群最多的国家.GJB2基因突变是排名首位的先天性感音神经性耳聋致聋病因,在我国不同年龄阶段聋人群体中,GJB2基因突变检出率高达21.52%,在人群中GJB2突变携带率高达1.66%.由于GJB2突变引起耳聋的机制仍不清楚,目前国内外防治手段对已出生GJB2相关聋儿进行"声-电"耳蜗植入,实现"聋而不哑",每例患儿花费20万以上;对已生育聋儿及父母进行基因检测,明确病因后可行产前诊断,采用第三代试管婴儿技术避免聋儿再次出生.