CRISPR-Cas技术用于核酸检测的现状和前景

高效、经济的核酸检测方法在基因分型和病原体检测等领域的需求在不断增长。研究人员利用人工合成的生物分子组分已经开发了许多用于核酸检测的方法[1-3];但是,现有的检测方法无法同时满足特异性、灵敏度、速度、成本和简单性的需求,例如,最常用的检测方法实时定量逆转录聚合酶链反应(q PCR),被推荐为新冠肺炎和非洲猪瘟的分子诊断金标准[4-5],但是其需要精密的仪器和专业的操作人员,无法进行现场检测,限制了它的应用。近年,CRISPR-Cas系统为基因组编辑提供了新的工具[6]。

富硒蛹虫草对非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299和NCI-H1975增殖凋亡的影响研究

目的观察富硒蛹虫草对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系NCI-H1299和NCI-H1975增殖和凋亡的影响及机制。方法将不同浓度的富硒蛹虫草作用于体外培养的NCI-H1299和NCI-H1975细胞,采用CCK-8实验检测富硒蛹虫草对NCI-H1299和NCI-H1975细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)和Western Blot分别检测促凋亡因子Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2、TP53基因mRNA和蛋白,PARP的mRNA和cleaved PARP蛋白表达情况。结果富硒蛹虫草水提物对NCI-H1299和NCI-H1975增殖有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;富硒蛹虫草以浓度依赖性促进NCI-H1299和NCI-H1975的凋亡;促凋亡因子Bax的mRNA和蛋白表达上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调;TP53仅在富硒蛹虫草浓度最高时表现出蛋白表达量下降;PARP的mRNA表达水平在富硒蛹虫草浓度最高时变化不明显,但cleaved PARP的蛋白表达随着富硒蛹虫草的浓度升高而增加。结论富硒蛹虫草能显著抑制NCI-H1299和NCI-H1975增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过调节Bcl-2家族蛋白,上调cleaved PARP的蛋白表达水平实现。