TTV感染血清学、原位杂交及干扰素治疗研究

目的了解ＴＴＶ感染状况，探讨ＴＴＶ致病性及对干扰素治疗的应答。方法采用ＰＣＲ和原位杂交方法检测血清和肝组织中ＴＴＶ ＤＮＡ，回顾分析８例ＴＴＶ／ＨＣＶ感染者干扰素治疗后病毒及ＡＬＴ应答状况。结果各型肝病患者（３６．７％～４２．８％）和职业供血员（４３．２％）ＴＴＶ感染率均显著高于义务供血员（健康对照人群，５．６％）。部分感染者采用斑点杂交方法可自血清中检出ＴＴＶ ＤＮＡ（３／３０，１０．０％），提示存在较高的血清病毒负荷， １６例慢性非甲～戊型肝炎患者及１６例肝炎后肝硬化患者肝组织以原位杂交检测，各６例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性（３７．５％）。 ８例ＴＴＶ／ＨＣＶ混合感染者经２４周疗程干扰素治疗后，６例维持持久ＡＬＴ应答（停药后２４周ＡＬＴ正常），治疗１２周时， ８例血清ＴＴＶ ＤＮＡ均阴转，但 ２例停药后复阳， ＡＬＴ无应答的２例患者， ＨＣＶ ＲＮＡ呈阳性但ＴＴＶ ＤＮＡ阴怀；而ＴＴＶ ＤＮＡ阳转的２例患者ＡＬＴ均维持应答。结论 ＴＴＶ感染在肝病患者和职业供血员中较普遍， ＴＴＶ可在肝组织中活跃复制，其对干扰素治疗反应较敏感，ＴＴＶ／ＨＣＶ重叠感染时ＴＴＶ无明显致肝损伤作用。

免疫转印技术在分析流行性出血热患者血清循环免疫复合物组份中的应用

免疫转印技术在分析流行性出血热患者血清循环免疫复合物组份中的应用武汉同济医科大学附属同济医院临床免疫研究室，武汉４３００３０陈悦，杨东亮，李方和，喻植群，郝连杰关键词出血热．流行性；循环免疫复合物；免疫转印技术中图法分类号Ｒ５１２．８免疫转印技术是本...

流行性出血热患者循环免疫复合物组份的动态观察

应用聚乙二醇沉淀法对２７例１１４份流行性出血热病人血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）进行了检测，不同病期（ＣＩＣ）检出率分别为：发热期８８．８％、少尿期８２．５％、多尿期４７．８％、恢复期２１．４％。对流行性出血热ＣＩＣ组份的动态观察发现，在不同病期ＣＩＣ中绝不多数可检出流行性出血热病毒抗原、免疫球蛋白与补体Ｃ３，表明在流行性出血热患者体内检出的ＣＩＣ是特异性病毒抗原刺激机体免疫应答的结果。ＩｇＧ、ＩｇＭ型ＣＩＣ的形成在疾病早期清除病毒抗原及免疫损伤中可能起重要作用。

复合α干扰素治疗慢性丙型肝炎疗效与病毒负荷及合并TTV感染关系的随机对照研究

目的 评价复合α干扰素(CIFN)治疗慢性丙型肝炎的效果,以及重叠TTV感染对治疗的影响。方法 选择29例慢性丙型肝炎患者随机分成3组,A组(8例)给予CIFN15μg,B组(10例)给予CIFN9μg,C组(11例,对照组)给予IFNα2a,3MU,均为3次/周×24周,治疗结束后随访24周,于治疗结束时和随访结束时评价ALT及HCVRNA应答。采用套式聚合酶链反应方法对合并TTV感染情况进行回顾性研究。结果 A、B两组治疗结束时及停药24周时的ALT复常率、血清HCVRNA阴转率均较对照组高,因样本量少均未达到统计学意义水平。综合比较CIFN和IFNα2a的疗效,则前者随访结束时的持久应答率显著高于后者。2种剂量CIFN组间应答反应无明显区别。治疗前血清病毒含量与干扰素应答有关,CIFN对于高病毒负荷组患者的疗效优于IFNα2a组。合并TTV感染者(8/22,36.4%),重叠感染患者与非重叠感染者对干扰素应答反应无显著差别,8例TTV感染者CIFN治疗后6例血清TTVDNA阴转。结论 CIFN治疗慢性丙型肝炎远期疗效及高病毒负荷患者的疗效较好;重叠TTV感染对慢性丙型肝炎干扰素疗效无明显影响。TTV似对CIFN较敏感。

HBV核心蛋白和B7.1分子嵌合质粒的构建及体外表达的初步研究

目的 构建HBV核心蛋白和B7.1分子真核表达嵌合质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 利用亚克隆技术 ,将HBV核心基因片段和B7.1基因片段构建至真核表达质粒 pcDNA3中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用间接免疫荧光法检测两种蛋白的表达。结果 核酸序列测定证实实验所构建的质粒正确 ,嵌合质粒中所含的HBcAg和B7.1分子的核苷酸序列与HBVadr亚型标准株核心区及鼠B7.1分子的同源性分别为 98.18%和 99.89%。该嵌合质粒在体外转染细胞内可表达HBcAg和B7.1分子。 结论 实验所构建的HBcAg/B7.1嵌合质粒能在体外同时表达HBcAg和B7.1分子。

丙型肝炎病毒感染者肝组织中病毒抗原表达的免疫组化研究

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在肝组织中的表达状况，应用免疫组化方法以多克隆人抗－ＨＣＶ和单克隆鼠抗－ＨＣＶ－ＮＳ＿３检测一组ＨＣＶ感染者石蜡包埋肝组织中ＨＣＶ抗原（Ａｇ）和ＨＣＶ－ＮＳ＿３，并对抗原检出与血清ＨＣＶ标志的关系进行分析。结果：ＨＣＶＡｇ和ＨＣＶ－ＮＳ＿３检出率分别为３８．３％（２３／６０）和３０．０％（１８／６０）；所有ＨＣＶ－ＮＳ＿２，阳性者均同时表现ＨＣＶＡｇ阳性；阳性颗粒定位于肝细胞胞浆；阳性细胞分布呈散在、弥漫状和簇状，周围多天坏死及炎性细胞浸润；不同血清ＨＣＶ标志模式间抗原检出率存在明显差别。研究结果对认识ＨＣＶ致病机理有一定意义。

斑点杂交法检测肝病患者TTV感染状况初探

目的 探讨斑点杂交法在检测肝病患者TT病毒(TTV)感染状况中的应用价值。方法 提抽患者血清中DNA,分别采用聚合酶链反应(PCR)及斑点杂交技术检测其中的TTV病毒DNA。结果 在30份非甲～非戊型肝炎患者血清中,PCR方法检出11份为TTV阳性,检出率为36.7%。采用斑点杂交法检出3份阳性血清,阳性率为10%。制备的探针具有TTV特异性,可检出相当于106拷贝的病毒DNA。结论 以地高辛标记的TTV探针用于斑点杂交可以检出血清病毒滴度较高的TTV,其敏感度低于PCR方法。

输血后肝炎患者HCV感染及其病毒血症的研究

利用血清学ＥＬＩＳＡ方法和ＰＣＲ技术对１６９例输血后肝炎（ＰＴＨ）患者病因学进行了研究。结果表明，ＰＴＨ的主要致病原为ＨＣＶ（９８．２２％），其中部分患者（２４／１６９）同时合并有ＨＢＶ感染，３例ＰＴＨ患者病因仍不明确。ＨＣＶ感染所致ＰＴＨ患者抗ＨＣＶ检出时间为ＰＴＨ症状出现后７ｄ～１年，平均为５４．６２ｄ；ＨＣＶＲＮＡ在感染早期（６～２０ｄ）即可检出。对８４例ＰＴＨ患者１．５年～３年的随访观察结果表明，抗ＨＣＶ可长时间持续存在，而ＨＣＶ病毒血症可有三种表现形式；一过性、持续性和间歇性病毒血症。ＨＣＶ／ＨＢＶ重叠感染者，ＨＣＶＲＮＡ检出率为１００％（２４／２４），明显高于ＨＢＶＤＮＡ检出率（１６．６７％，Ｐ＜０．０１）。４例ＨＢＶＤＮＡ阳性者，ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ交替检出，似乎提示重叠感染时，ＨＣＶ可抑制ＨＢＶ复制，或两者之间相互干扰，对此应进一步研究证实。

胶固素ELISA检测流行性出血热循环免疫复合物

以牛胶固素建立固相酶联免疫吸咐试验用于检测循环免疫复合物（ＣＩＣ）。对２２８份流行性出血热、４０份慢性肝炎及３０份自身免疫性疾病患者血清标本进行检测，ＣＩＣ检出率分别为８０．２６％、８０．００％及８６．６６％，其相对平均含量分别为２１．４５±５．５６ｍｇ／Ｌ、３８．６６±７．２１ｍｇ／Ｌ及１５．９８±４．３４ｍｇ／Ｌ。胶固素用于检测ＣＩＣ不受ＤＮＡ、内毒素及肝素等影响，试验方法简便、敏感是其优点。

丙型肝炎病毒感染与免疫

丙型肝炎病毒感染与免疫杨东亮郝连杰本文仅就ＨＣＶ感染与免疫的研究进展作一综述。一、ＨＣＶ基因组及其产物的多样性［１～３］１．ＨＣＶ基因组结构与变异ＨＣＶ基因组全长约１０Ｋｂ，由一个大的开放读框（ＯＲＦ）及其两端各一个非编码区组成。ＯＲＦ分为结构基因区...

肝病患者肝组织中HCV抗原检测及意义

应用免疫组织化学方法对一组肝病患者石蜡包埋肝组织中丙肝病毒抗原进行了检测。２５２份肝组织中，采用多克隆抗ＨＣＶ检出ＨＣＡｇ阳性２５份（９．９２％），采用单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３检出ＨＣＶ－ＮＳ３蛋白阳性１９份（７．５４％）。１９份ＨＣＶ－ＮＳ３阳性肝组织均同时表现ＨＣＡｇ阳性，二者在肝细胞分布状况相似。另有６例肝组织中检出ＨＣＡｇ阳性，阳性细胞周围多无坏死灶和炎性。不同病理类型肝炎患者肝组织中丙肝病毒抗原检出率无明显差异。肝组织中抗原的检出和血清ＨＣＶ标志具有良好对应性，但不同血清ＨＣＶ标志模式抗原检出率存在明显差异。２５２份对应血清检出ＨＣＶ标志７１例，单独抗ＨＣＶ阳性者无一例肝组织中检出抗原，血清抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性者较单一，ＨＣＶＲＮＡ阳性者的抗原检出率低。有二例肝组织中检出抗原但其血清ＨＣＶ标志阴性。

近期ALT升高单采浆供血者戊型肝炎病毒感染状况的调查

对一组有近期ＡＬＴ升高史的单采浆供血者进行血清抗ＨＥＶ检测，并与同一地区无近期ＡＬＴ升高史供浆者及其单纯献全血者进行比较。三者抗ＨＣＶ检测阳性率分别为１４．０４％、４．１２％及４．７３％，前者检出率显著高于后两者（Ｐ均＜０．０１）。抗ＨＥＶ阳性率及阳性反应强度与ＡＬＴ升高次数之间未见明显的伴随关系。抗ＨＥＶ阳性与阴性组间抗ＨＣＶ及其部分ＨＢＶ标志检测阳性率间亦未见明显的差别。

丙型肝炎病毒在肝外组织复制状态和抗原表达

目的探讨丙型肝炎肝外组织丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）感染和复制状态及其意义。方法分别采用免疫组织化学和逆转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ， ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测９例丙型肝炎肾、心、胰腺和肠等肝外组织ＨＣＶ多种抗原和正链、负链ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ９例中６例（６６．７％）在肝外组织检出ＨＣＶ多种抗原。抗原定位于细胞浆内。组织内抗原表达阳性细胞数量较少，不同组织间阳性细胞种类、数量和分布略有差异。 ９例患者肝外组织经ＲＴ－ＰＣＲ法均检出ＨＣＶ ＲＮＡ； ３１份标本中２０份（６４５％）检出正链，１１份（３５５％）检出负链。组织中正链和负链ＨＣＶ ＲＮＡ检出与其细胞内病毒抗原表达阳性信号呈较好一致性（Ｋａｐｐａ＞０．４０）。结论ＨＣＶ可能感染肝外组织，但程度轻；还可能在其感染细胞内低水平复制。这种状况可能是肝外组织ＨＣＶ检出率低和检测结果不一致的主要原因之一。