磁珠吸附法定量检测乙型肝炎病毒的效能

目的建立磁珠吸附定量检测HBV DNA的方法,并评价该方法的检测效率。方法将病毒载量为10~7IU/mL的血清样本,倍比稀释成不同浓度的HBV DNA作为血清标准品（理论值）,分别用磁珠吸附定量法（试剂1）、磁珠法（试剂2）、煮沸法（试剂3）3种方法提取HBV DNA,从灵敏度、定量线性关系方面比较本实验方法与国产磁珠法核酸自动提取法和传统煮沸法的提取效果,并对本实验方法进行稳定性验证。结果灵敏度：HBV DNA定量的检测下限理论值为10^1IU/mL,试剂1为3.520×10^1 IU/mL,试剂2为9.123×10^3 IU/mL,试剂3为6.195×10^1 IU/mL。相关性：试剂1、试剂2、试剂3提取HBV DNA定量与理论值相关性分析的r值分别为0.986、0.950、0.979（均P〈0.01）。稳定性：3种方法检测的相对偏差均值分别为0.243±0.405（试剂1）、1.189±0.855（试剂2）、-0.439±0.618（试剂3）,试剂1对同一样本在不同时间检测结果的相对偏差均值为0.505±0.659。结论本实验所设计的血清HBV DNA提取方法灵敏,定量线性关系好,结果稳定准确,为定量检测HBV DNA奠定了基础。

国产磁珠核酸自动提取系统对HBV-DNA检测前处理的研究

目的:比较国产磁珠法核酸自动提取系统和传统的沉淀离心提取法提取血清HBV DNA的效果,探讨其应用潜力。方法:以两种方法平行提取50份血清HBV DNA,荧光定量PCR检测其提取核酸的拷贝数及CT值,进行方法对比试验;配制成不同浓度的HBV应用血清,用国产自动提取系统提取HBV DNA,评价方法的灵敏度、重复性及线性范围;向已知浓度的HBV阳性血清中定量加入溶血及脂血的阴性血清,再同样提取HBV DNA,观察方法的抗干扰特性。结果:两种方法平行提取血清HBV DNA,方法对比试验显示无显著差别;国产自动提取系统的重复性良好,定量检测的灵敏度及线性范围与现行方法一致;抗干扰能力强,溶血及脂血等常见干扰物对HBV DNA提取无干扰。结论:国产磁珠法核酸自动提取系统对血清HBV DNA的提取效果良好,操作简单,自动化程度高,重复性好,适宜用于临床HBV DNA检测前处理的核酸提取。