微小RNA217靶向人沉默调节蛋白1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-217(miR-217)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响途径。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞SW620、RKO、HT-29、HCT116中miR-217表达水平。将miR-217模拟物(mimic)与阴性对照(mimic NC)分别转染于RKO细胞系, 检测miR-217表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)与平板克隆实验检测细胞增殖活力;采用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;采用RT-qPCR与蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默信息调节因子1(SIRT1) mRNA与蛋白表达水平。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 miR-217在人结直肠癌细胞系中表达水平降低, 其中RKO细胞系明显低于NCM460细胞系[(0.286±0.022)倍比(1.000±0.090)倍, t=13.360, P<0.01], 差异有统计学意义。RKO细胞系转染miR-217 mimic后, miR-217表达水平高于NC组[(5.276±0.437)倍比(1.000±0.168)倍, t=15.820, P<0.01], 差异有统计学意义。CCK-8实验表明miR-217 mimic组细胞24、48、72 h吸光度值低于NC组[(0.867±0.030)倍比(1.260±0.0222)倍, t=18.440, P<0.01], 差异有统计学意义。平板克隆实验表明miR-217 mimic组细胞集落形成能力低于NC组[(80.570±43.320)倍比(116.600±81.230)倍, t=3.823, P<0.01], 差异有统计学意义。划痕实验及Transwell实验证实miR-217 mimic组细胞迁移及侵袭能力低于NC组[划痕实验:(0.133±0.009)倍比(0.365±0.010)倍, t=29.960, P<0.01;Transwell迁移实验:(157.000±3.000)倍比(248.300±13.580)倍, t=11.380, P<0.01;Transwell侵袭实验:(149.000±7.937)倍比(287.000±5.568)倍, t=24.650, P<0.01], 差异有统计学意义。通过生物信息学分析并筛选出miR-217靶基因人SIRT1, RT-qPCR结果表明miR-217 mimic组细胞中SIRT1 mRNA表达水平低于NC组[(0.682±0.162)倍比(1.000±0.075)倍, t=3.090, P<0.05], 差异有统计学意义。Western blot表明, 转染miR-217 mimic后, 结直肠癌细胞中SIRT1蛋白表达水平发生显著下降。结论 miR-217在人结直肠癌中低表达, 且可能通过SIRT1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。

长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录本1通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路调控有氧糖酵解代谢促进胃癌细胞增殖

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)-肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对胃癌细胞增殖和有氧糖酵解的作用及其机制。方法使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、MKN45、AGS内lncRNA-MALAT1的表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)敲低SGC-7901细胞lncRNA-MALAT1的表达水平后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测胃癌细胞的增殖能力,酶标比色法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸水平和三磷酸腺苷(ATP)含量,RT-qPCR检测有氧糖酵解相关基因的mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的活化。两样本间的比较采用t检验。结果lncRNA-MALAT1在胃癌细胞中的表达量升高,其中SGC-7901组表达倍数明显高于GES-1组[(14.970±1.429)倍比1.000倍,t=16.880,P<0.01];转染靶向lncRNA-MALAT1的siRNA进入SGC-7901细胞后,沉默组lncRNA-MALAT1的表达倍数明显小于对照组[(0.560±0.110)倍比1.000倍,t=5.126,P<0.01];成功敲低lncRNA-MALAT1后,CCK-8实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.863±0.061比1.393±0.085,t=8.766,P<0.01),葡萄糖摄取率实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.563±0.097比1.010±0.105,t=5.399,P<0.01),ATP检测实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.583±0.155比1.037±0.120,t=4.003,P<0.05),乳酸产生率实验显示沉默组吸光度值低于对照组(0.573±0.127比0.973±0.083,t=4.572,P<0.05),沉默组己糖激酶2的mRNA表达明显低于对照组[(0.510±0.125)倍比1.000倍,t=5.980,P<0.01],沉默组M2型丙酮酸激酶的mRNA表达明显低于对照组[(0.573±0.160)倍比1.000倍,t=4.313,P<0.05],沉默组乳酸脱氢酶的mRNA表达明显低于对照组[(0.693±0.060)倍比1.000倍,t=4.400,P<0.05]和沉默组丙酮酸脱氢酶激酶1的mRNA表达明显低于对照组[(0.537±0.100)倍比1.000倍,t=5.408,P<0.01],沉默组p-PI3K/PI3K的蛋白相对表达量低于对照组[(0.519±0.070)倍比(0.805±0.071)倍,t=4.977,P<0.01],沉默组p-Akt/Akt的蛋白相对表达量低于对照组[(0.543±0.080)倍比(0.862±0.058)倍,t=5.590,P<0.01],沉默组p-mTOR/mTOR的蛋白相对表达量低于对照组[(0.341±0.075)倍比(0.853±0.040)倍,t=10.380,P<0.01]。结论lncRNA-MALAT1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路来促进胃癌细胞有氧糖酵解和体外增殖。