转录因子E2F-3靶向FOSB对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究转录因子E2F-3对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法在体外培养人的结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、LOVO和人的结肠正常上皮细胞NCM460,并用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480、RKO、DLD1、LOVO中E2F-3的转录水平。分别将E2F-3的siRNA-E2F3和siRNA-NC阴性对照转染于细胞系RKO中,设为实验组(si-E2F3)与阴性对照组(NC)。采用平板克隆实验细胞与细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。Transwell迁移和侵袭实验与细胞划痕实验用来检测细胞的迁移及侵袭能力。RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别可以检测E2F-3靶向蛋白FOSB的表达水平。两样本间对比采取t检验,多组间差异采用单因素方差分析。结果miR-210-3p在结直肠癌细胞系中表达均高于人正常结肠上皮细胞,其中以RKO中升高最为明显,相较NC[(2.349±0.095)倍比(1.000±0.013)倍,t=65.82,P<0.01],差异有统计学意义。转染si-E2F3后,敲降组si-E2F3表达水平显著降低[(0.394±0.010)倍比(1.000±0.013)倍,t=66.38,P<0.01],差异有统计学意义。CCK-8实验表明si-E2F3组在不同时间段吸光度值均低于NC组[(0.720±0.110)倍比(1.210±0.015)倍,t=19.65,P<0.01],差异有统计学意义。细胞克隆实验结果显示,si-E2F3组细胞克隆形成能力低于NC组[(171.000±4.000)倍比(317.000±8.000)倍,t=19.75,P<0.01],差异有统计学意义。划痕愈合实验结果表明,si-E2F3组划痕愈合百分比低于NC组[(0.163±0.004)倍比(0.244±0.013)倍,t=9.39,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell侵袭实验结果显示,si-E2F3组细胞中穿出的细胞数低于NC组[(53.667±4.667)倍比(161.67±4.333)倍,t=30.89,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移实验结果表明:si-E2F3组细胞迁移细胞数低于NC组[(52.333±5.333)倍比(99.333±5.333)倍,t=11.79,P<0.01],差异有统计学意义。通过生物信息学分析筛选出E2F-3靶蛋白FOSB,Western blot结果表明转染了si-E2F3后,结直肠癌细胞中FOSB表达量显著降低。结论E2F-3在人的结直肠癌细胞系中显著高表达,其中以RKO最为显著,并可能通过靶向FOSB促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。