CTRP6对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumour necrosis factor-related protein 6,CTRP6)对阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤的影响及其相关作用机制。方法建立H9C2心肌细胞损伤模型,设置对照组(NS组)、DOX(1μmol/L)组和DOX(1μmol/L)+浓度梯度CTRP6组(CTRP6浓度分别为0.5、1、3、5μg/ml),培养24h后检测心肌细胞生存率,结果表明,CTRP6浓度为3μg/ml时,心肌细胞的生存率提高最显著,因此后续实验CTRP6浓度选择3μg/ml。后续H9C2心肌细胞实验分组为对照组(NS组)、CTRP6组、DOX(1μmol/L)组和DOX(1μmol/L)+CTRP6(3μg/ml)组。荧光实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测DOX刺激后CTRP6转录及翻译水平改变,Tunel法检测细胞凋亡水平,使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot法检测脂联素受体1(adiponectin receptor 1,AdipoR1)蛋白水平改变,检测蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,Akt/GSK-3β)信号通路蛋白表达改变情况。结果与对照组(NC组)比较,DOX组细胞CTRP6蛋白表达水平及mRNA水平显著降低(分别降低46.26%及67.74%,P<0.05);与DOX组比较,DOX+CTRP6组CTRP6蛋白表达水平显著提高(P<0.05);加入不同浓度梯度的CTRP6蛋白,其中DOX+3μg/ml CTRP6处理组心肌细胞存活率显著提高了26.48%(P<0.05);Tunel染色显示凋亡减少,Bcl-2表达升高;抗氧化分子GSH-Px及SOD活性分别升高20.49%及36.89%,MDA水平受到显著抑制(降低47.09%,P<0.05);AdipoR1蛋白水平显著提高(P<0.05);Akt/GSK-3β信号通路蛋白磷酸化水平显著升高。结论CTRP6改善DOX诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤,可能是通过Akt/GSK-3β信号通路发挥的保护作用。

TLR9敲除可减轻阿霉素诱导的心肌损伤

目的探究TLR9对阿霉素性心肌损伤的影响及机制。方法选取8周龄健康雄性C57B/6J、TLR9-KO小鼠,分为WT组、TLR9-KO组、WT+DOX组、TLR9-KO+DOX组,阿霉素皮下注射建立DOX模型;分别检测心肌细胞损伤标志物、心功能及血流动力学指标,HE染色观察心肌细胞面积,TUNEL染色及Western blot法检测细胞凋亡;H9C2细胞传代爬片后,分为PBS组、PBS+ODN2088组、DOX组、DOX+ODN2088组,TUNEL染色观察细胞凋亡。结果予以DOX刺激后,野生型小鼠的心功能、心肌细胞横截面积均降低,细胞凋亡增加,而TLR9敲除组的心功能、心肌细胞横截面积比野生型小鼠增加,细胞凋亡也有所降低;TLR9抑制剂ODN2088可明显降低DOX所致的H9C2细胞凋亡。结论TLR9敲除可通过抑制凋亡减轻阿霉素诱导的心肌损伤,改善心功能。