菘蓝有效成分抗流感病毒作用的实验研究

目的研究菘蓝有效成分在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法体外用MTT法检测菘蓝有效成分对传代狗肾细胞(MDCK)的毒性浓度,观察菘蓝有效成分抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT法检测菘蓝有效成分对流感病毒的抑制率;建立在体流感病毒感染小鼠肺炎模型,通过观察小鼠肺病变程度指标,测定肺组织内流感病毒血凝滴度判定菘蓝有效成分对小鼠肺炎的治疗作用。结果菘蓝有效成分在体外主要抑制甲型流感病毒在细胞内的复制,其对病毒的半数抑制率浓度为64μg.mL-1,治疗指数达28.88;口服菘蓝有效成分能明显减轻小鼠肺组织病变程度,对肺组织内病毒的增殖有明显抑制作用。结论菘蓝有效成分具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且呈剂量效应关系。

夏桑菊抗呼吸道合胞病毒的实验研究

目的评价夏桑菊抗呼吸道合胞病毒(RSV)的疗效。方法以病毒唑为对照,通过体外观察病毒致细胞病变效应(CPE)、病毒滴度、抗病毒指数;在体内观察其对染毒小鼠的死亡保护作用以及对小鼠心、脑、肺内病毒增殖的影响,从而判定夏桑菊抗RSV作用。结果夏桑菊能抑制RSV的增殖,其有效浓度为544.59μg/ml,并显示出病毒的感染性滴度随药物浓度的增加而下降;治疗RSV感染鼠结果发现夏桑菊对RSV感染鼠有保护作用,10g/(kg·d)时,RSV感染鼠的存活率为50%,平均存活天数为(10.9±2.3)d,随着药物剂量增加,疗效增强,该药物还能降低组织内病毒滴度,阻止体内病毒复制,抗RSV作用类似于同剂量的病毒唑。结论夏桑菊是一种抗呼吸道合胞病毒的有效药物。

表没食子儿茶素没食子酸酯体外抗柯萨奇病毒的实验研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外抗柯萨奇病毒B3型(CVB3)的活性及作用机制。方法利用HEp-2细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活性,从药物抗病毒吸附、药物直接灭活病毒以及抑制病毒在细胞内的生物合成3个方面检测EGCG抗CVB3的作用方式,以治疗指数(TI)作为评价指标。结果 高浓度EGCG能阻止CVB3的吸附,EGCG具有较好的直接灭活病毒和抗CVB3生物合成的作用,TI分别为8.7和15.3,且随着药物浓度的增加,病毒所致CPE效应逐渐减弱而病毒抑制率则明显升高。结论 EGCG具有很好的体外抗CVB3的作用,其抗病毒方式是多途径的。

表没食子儿茶素没食子酸酯抗流感病毒作用的研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法:在体外用MTT法检测EGCG对狗肾传代MDCK细胞的毒性浓度,用CPE法观察EGCG抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用;在体内建立流感病毒感染小鼠模型,通过观察小鼠病死率、生命延长率及肺病变程度指标判定其对小鼠肺炎的抑制作用和染毒小鼠的死亡保护作用。结果:EGCG在体外能有效抑制甲型流感病毒CPE的产生;口服EGCG能减少流感病毒A H1N1病毒株感染小鼠的病死率,延长存活时间,减轻小鼠肺组织病变程度。结论:EGCG具有很好的抗甲型流感病毒的作用,呈剂量效应关系。

羧甲基茯苓多糖体外抗艾滋病病毒作用研究

目的观察羧甲基茯苓多糖(CMP)体外抗艾滋病病毒(HIV)作用。方法通过观察CMP对HIV-1ⅢB诱导感染C8166细胞致细胞病变的抑制实验及对HIV-1ⅢB感染MT4细胞的保护实验进行CMP抗HIV-1活性研究。结果同对照组相比,10.000,1.000和0.100 g.L-1CMP对C8166细胞培养上清液HIV-1ⅢB P24抗原的分泌有抑制作用(P<0.05),IC50为1.8 g.L-1,10.000和1.000 g.L-1CMP对感染HIV-1ⅢB的MT4细胞有保护作用(P<0.05),EC50为0.5 g.L-1。结论CMP体外有一定的抗HIV病毒的作用。

复方大黄抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的:观察复方大黄对HBV病毒复制的作用效果。方法:用MTT法测定复方大黄在不同浓度下对HepG 2.2.15细胞的毒性作用,ELISA法检测复方大黄对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg抗原的影响。结果:在用药后第4、8天,复方大黄对HepG 2.2.15细胞的半数毒性浓度(TD50)分别为346ng/ml和212ng/ml(P>0.05);对HBeAg的治疗指数(TI)分别为2.84和5.30(P<0.05);对HB-sAg的治疗指数分别为0.00和0.42(P>0.05)。结论:复方大黄可抑制HepG 2.2.15细胞分泌HBeAg,具有体外抗乙型肝炎病毒作用。

抗病毒药物及抗病毒策略研究进展

病毒性疾病一直是威胁人类健康的主要元凶之一，然而目前能够有效治疗病毒感染的药物却十分有限。因此，寻找拥有新的作用靶点和抗病毒策略的抗病毒药物是极为必要的。本文重点回顾了近年来国内外研究或应用的抗病毒药物，分析其抗病毒机制和所采用的抗病毒策略，介绍抗病毒药物的发展趋势。

汉滩病毒包膜糖蛋白假病毒的构建及特性研究

目的：研究汉滩病毒包膜糖蛋白与宿主细胞作用的分子机制,构建含有汉滩病毒（HTNV）标准株76-118株包膜糖蛋白的假病毒,并对其进行检测.方法：将表达汉滩病毒包膜糖蛋白的质粒和以VSVΔG为骨架的假病毒颗粒,与293T细胞共转染,构建汉滩病毒的假病毒,用中和实验,受体抑制实验,免疫共沉淀和Western Blot对其抗原性、中和反应、受体作用等进行检测.结果：汉滩病毒假病毒与活病毒有相似的抗原特性,汉滩病毒假病毒可以模拟活病毒进入细胞的方式,其糖蛋白是以二聚体形式存在的.结论：成功构建含有汉滩病毒标准株包膜糖蛋白的假病毒,它与活病毒的抗原特性和受体作用的方式相似,这为进一步研究汉滩病毒包膜糖蛋白与宿主细胞作用的分子机制提供了很好的工具.

Taqman PCR检测人博卡病毒的阳性率

目的:建立核酸特异、快速、敏感的Taqman探针实时定量PCR检测方法筛选疑似人博卡病毒(HBoV)感染者鼻咽拭子临床样本中的阳性样本。方法:比对编码HBoV-sh9的基因序列,选取保守区序列设计引物和探针,建立Taqman PCR检测人博卡病毒的阳性率的方法,进行特异性实验,检测214例临床样本。结果:所建立的Taqman PCR方法可以用于检测人博卡病毒的阳性率,对所收集得到的214例急性上呼吸道感染者的咽拭子标本进行检测,结果显示,荧光定量PCR检测出8例阳性,其阳性率为3.74%。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,可以快速灵敏的检测出阳性人博卡病毒,为临床治疗提供快速可靠的诊断依据。

P物质、神经激肽-1受体对人类免疫缺陷病毒的调节作用

生活紧张状态和抑郁是HIV感染各阶段直至发展为AIDS的重要辅助因素。Kopnisky等报道心理改变在HIV-1疾病进程中所起的作用．发现在免疫一神经传导中脑部趋化因子特别是SP的重要性。抑郁、焦虑和紧张状态与HIV发展相关，行为状态和脑力活动的改变所引起的免疫应答间接或至少有一部分是通过神经内分泌-免疫途径介导的。紧张状态反应导致神经肽的释放改变．

穿心莲内酯及其衍生物抗肠道病毒效果评价

目的:评价穿心莲内酯及其衍生物(XYP-1、XYP-2及XYP-3)抑制柯萨奇病毒B3型(CVB3)感染MA104细胞的效果。方法:采用MTT法检测3种中药注射液对MA-104细胞的细胞毒性,并通过感染阻断、直接杀伤、增殖抑制3种不同作用方式评价药物对CVB3感染细胞的体外抗病毒效果。结果:穿心莲内酯及其衍生物在阻断病毒感染细胞作用中,对CVB3的治疗指数(TI)分别为15.29,6.76,1.86;在阻止病毒增殖抑制作用中,对CVB3的TI分别为20.00,50.00,1.67;在直接杀伤病毒作用中,对CVB3的TI分别为7.65,25.00,1.83。结论:穿心莲内酯及其衍生物在不同作用方式下,对CVB3病毒具有不同程度的抑制效果,XYP-1主要阻断病毒的感染并抑制病毒增殖,XYP-2则能抑制病毒增殖并对病毒有杀伤作用,而XYP-3抗病毒效果较差。

盐酸阿比朵尔胶囊抗甲型H1N1流感病毒的体外实验研究

目的评价盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊(恩尔欣)、奥司他韦胶囊(达菲)对甲型流感病毒(H1N1)的抑制效率,检验盐酸阿比朵尔胶囊替代奥司他韦胶囊用于流感治疗的可能性。方法本实验以奥司他韦胶囊为阳性对照药物,采用细胞病变效应(CPE)抑制法、噻唑蓝(MTT)比色法和血凝滴度法对其抗甲型H1N1流感病毒的作用进行了观察。结果盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊、奥司他韦胶囊在安全浓度范围内,对100 TC ID50(病毒半数组织感染量)的甲型H1N1流感病毒均有一定抑制作用,且呈明显量-效关系。其中盐酸阿比朵尔原料药抗病毒生物合成作用、对病毒直接杀伤作用和抗病毒吸附、穿入作用三种方式的治疗指数(TI)分别为(3.08±0.34)、(3.55±0.54)、(3.26±0.32);盐酸阿比朵尔胶囊的分别为(3.12±0.40)、(3.41±0.23)、(4.20±0.43);奥司他韦胶囊的依次为(5.34±0.26)、(1.19±0.16)、(1.01±0.38)。结论盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊在阻断流感病毒吸附、穿入作用和直接杀伤作用方面较奥司他韦胶囊效果好(P<0.01)。奥司他韦胶囊的抗病毒生物合成作用较盐酸阿比朵尔和盐酸阿比朵尔胶囊强(P<0.01),因此盐酸阿比朵尔胶囊可以替代奥司他韦胶囊用于预防甲型H1N1流感病毒感染。

四种大黄多糖体外抗轮状病毒的实验研究

目的研究4种大黄多糖(A、B、C、D)以及其配伍体外抗轮状病毒(RV)作用。方法在体外用MTT法检测药物的毒性作用,从抗吸附、直接杀伤和抑制病毒增殖3方面检测4种大黄多糖抗RV的效果;并依中效原理,对大黄多糖A、C进行配伍,研究其体外抗病毒的作用,并探讨最适配伍比例。结果4种大黄多糖体外有预防RV感染和抑制病毒增殖作用。A、C以1∶1配伍后,对病毒的直接杀伤的合用效应与合用指数关系:当fa为≤0.68时,CI≤1,两药作用相加或协同。对病毒的增殖抑制的合用效应与合用指数关系:当fa为≤0.57时,CI≤1,两药作用相加或协同。结论4种大黄多糖体外具有较好地抗RV病毒作用,且大黄多糖A、C合用效果对病毒的直接杀伤作用和抑制病毒增殖作用优于其单独使用。

肾综合征出血热（HFRS）、汉坦病毒肺综合征（HPS）和汉坦病毒（HV）研究进展——记第八届国际HFRS/HPS和HV学术会议

第八届国际肾综合征出血热（HFRS）、汉坦病毒肺综合征（HPS）和汉坦病毒（HV）学术会议于2010年5月20-22日在希腊首都雅典举行.大会共收到学术论文157篇,其中大会报告51篇.主要包括有关近年来HFRS/HPS病原学、流行病学、发病机制以及诊断治疗等一些新的研究进展.会议学术报告相关内容简述如下.

湖北省武汉地区啮齿动物汉坦病毒S基因的特征分析

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本，采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列，构建系统发生树并进行基因分型。结果2000--2003年捕获啮齿类动物437只，HV抗原阳性鼠肺标本24份，病毒携带率为5．49％。2009--2011年捕获啮齿类动物173只，HV抗原阳性鼠肺标本7份，病毒携带率为4．05％。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠，4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt588-1147），分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615～1141），分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV，并发现新的基因亚型，SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。

抗疱疹病毒药物的研究

单纯疱疹病毒（herpes Simplex virus，HSV）是人类病毒性疾病中最常见的病毒，可引起口唇疱疹，生殖器疱疹，脑膜炎和角膜炎等一系列疾病［1，2］。在全球范围内，HSV 有着极高的感染率和发病率［3］。阿昔洛韦（acyclovir，ACV）及其相关的核苷类似物是临床上主要用于治疗疱疹性疾病的药物，并已取得了较好的疗效［4］。但是在免疫抑制患者中 ACV 耐药毒株的出现，为开发更安全更有效的抗疱疹病毒药物提出了更多的要求［5，6］。

大黄抗炎抗病毒作用的研究

大黄为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L.，唐古特大黄 Rheum tanguticum Maxim. ex Balf 或药用大黄 Rheum officinale Baill.的干燥去皮根茎及根入药，是-味疗效可靠，应用广泛的中药。现代药理研究发现大黄有抗肿瘤、抗菌消炎、抗动脉硬化、降血压、泻下利尿、保肝利胆、清除自由基等多种作用。研究发现大黄及其活性成分对多种细菌、病毒均有抑制作用［1］。

抗汉坦病毒药物的研究

汉坦病毒（Hantavirus）属于布尼亚病毒科（Bunya-viridae）汉坦病毒属，是一种有包膜的单负链 RNA 病毒［1］。黑线姬鼠、褐家鼠等小型啮齿动物是其主要宿主动物，人类通过呼吸道、消化道摄入或直接接触带病毒的宿主动物而感染，常引起肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）和汉坦病毒肺综合征（ Hantavirus pulmonary syndrome，HPS）两类疾病［2，3］。HFRS 多见于亚洲、欧洲，其中90%以上的病例在中国［3］，HPS 患者多见于美洲。毛细血管通透性增加和血小板减少是 HFRS 和 HPS 的共同病理特征，但 HFRS 以肾损害为主，HPS 侧重于心、肺损害，HPS 的病死率显著高于 HFRS，可达40%左右［4］。

湖北地区HFRS患者血清与欧洲汉坦病毒重组核抗原的反应性研究

目的 用欧洲汉坦病毒流行株制备重组核抗原，检测湖北地区HFRS患者血清中汉坦病毒特异性抗体，观察流行于不同地区汉坦病毒的相关性。方法 收集湖北地区34例HFRS患者急性／恢复期血清，以ELISA法检测血清标本对欧洲汉坦病毒重组核抗原（rNP）的反应性。结果 多不拉伐病毒（DOBV）-rNP对IgA抗体检出率最高，汉滩病毒（HTNV）-rNP对IgG抗体检出率最高，两者对IgM抗体检出率的差异无统计学意义；普马拉病毒（PUUV）-rNP对各种抗体检出率均低，但有3例患者急性期和恢复期标本对3种PUUV-rNP均有很强反应性。定量分析结果发现，IgM抗体水平急性期较高，IgA抗体水平急性期、恢复期均较高；IgA、IgG抗体水平恢复期均显著升高。结论 DOBV-rNP对湖北地区HFRS患者血清检出率高，IgA抗体水平在急性期和恢复期均较高，对疾病的监测具有重要意义；湖北地区可能存在PUU型和DOB型汉坦病毒流行。

EV71病毒感染的防治研究

人肠道病毒71型（human enterovirus 71，EV71）属于小 RNA 病毒科（picornaradae）肠道病毒属（ entero-virus）［1］。EV71病毒颗粒为二十面立体对称的球形结构，无包膜和突起，直径约为30 nm。病毒基因组为单股正链 RNA，全长7413 bp，基因组中仅有一个开放阅读框（ ORF），在其两侧为5＆#39;和3＆#39;-非编码区（UTRs），3＇非编码区的末端含有一个长度可变的多聚腺苷酸尾巴（poly - A）。病毒基因组编码2194个氨基酸，主要有 P1、P2和 P3这3种前体蛋白，P1前体蛋白被蛋白酶切割为 VP1、VP2、VP3和 VP4这4个病毒外壳蛋白，为组成病毒颗粒的结构蛋白；P2和 P3前体蛋白则被切割为7个有活性的功能蛋白，负责病毒RNA 的复制与蛋白组装［2］。病毒颗粒的衣壳由60个亚单位构成，每个亚单位由 VP1~ VP4拼装成五聚体样结构，其中 VPl 蛋白是最主要的衣壳蛋白，具有最多的型特异性中和位点，与病毒血清型相关性高，是EV71主要的中和决定因子，直接决定病毒的抗原性，成为 EV71基因分型和遗传进化分析的重要研究对象［3］，曾被多次报道用来研制病毒疫苗［4］。