旅行生活与寄生虫病课程教学模式的探讨与实践

旅行生活与寄生虫病为武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室面向全校各年级、各专业大学生开设的通识课程,旨在向大学生传授与旅行生活相关寄生虫病的致病、流行和防治等基础知识,使大学生认识到不良的旅行习惯对健康危害的严重性,引导大学生能够自主建立起主动预防寄生虫病的卫生保健意识,倡导大学生文明健康的旅行生活习惯,增进大学生对自身、社会、自然及其相互关系的了解,从而达到提升高校大学生的公共健康卫生素养。文章对该课程的教学内容与教学过程、教学方法与教学手段、考核方式等方面进行介绍,探讨如何更好发挥医学寄生虫学师资力量,服务学校和社会。

医学吸虫抗氧化酶家族的研究进展

需氧生物体在正常生理代谢过程中会产生活性氧族(reactive oxygen species,ROS),但过多的ROS可引起体内多种氧化损伤,因此这类生物体都具备一套完善的防御体系,抗氧化酶是其中一个重要的组成部分。对于医学吸虫,不仅需要抗氧化酶清除正常生理代谢中产生的ROS,还要抵抗宿主免疫系统来源的ROS引起的损伤。了解医学吸虫抗氧化酶家族的结构和特性,有助于对其生殖生理的研究,以及新型药物和疫苗的开发。本文综述近年来对医学吸虫谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及抗氧化蛋白(peroxire-doxin,PRx)等抗氧化酶家族的研究进展。

武汉某“985”高校在校大学生食源性寄生虫病知信行调查

目的了解武汉某高校在校大学生食源性寄生虫病知识、行为及态度情况,为高校开设食源性寄生虫病相关选修课的必要性及其制定大学生的健康教育方案提供依据。方法采用单纯随机抽样的方法,调查武汉某高校大学生共1 460人。通过问卷了解其对食源性寄生虫病知识的了解、行为习惯和态度表现,对回答问题情况进行描述性分析和卡方检验。结果本调查大学生对食源性寄生虫病及其危害和传染途径的知晓率分别为66.78%、75.96%和77.7%;知晓食源性寄生虫病的途径主要来源于媒体网络(34.6%);不同居住地学生对食源性寄生虫病及其危害的知晓率差异有统计学意义(P均<0.05);不同专业学生对该疾病危害的知晓情况差异有统计学意义(P<0.05)。"不吃生的或半生不熟食物"、"不喝生水"和"生熟砧板分开"3项的健康行为形成率均低于50%。不同性别的大学生对"饭前便后洗手"、"不吃生的或者半生不熟的食物"和"不喝生水"等健康行为形成率差异有统计学意义(P均<0.01),女同学均高于男同学。不同年级大学生"生熟砧板分开"和"不养宠物"等行为差异有统计学意义(P均<0.05)。不同民族、籍贯、居住地的大学生在"不喝生水"和"生熟砧板分开"方面的健康行为形成率有统计学意义(P均<0.05),来自城镇学生均高于来自农村的大学生。不同学部大学生"不吃生的或者半生食物"和"不养宠物"等行为的差异有统计学意义(P均<0.05)。在正确态度形成方面,58.1%学生表示不会再去吃可能感染食源性寄生虫病的食物,13.4%的学生表示还想去尝尝,46.4%学生表示建议他人不要去吃。82.9%的学生计划改掉一些可能感染食源性寄生虫的饮食习惯。结论大学生对食源性寄生虫病知晓率偏低,并且存在高危行为;在高校开设有关食源性寄生虫病的相关课程十分必要。

日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察

目的 探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法 应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性 ,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性最强 ;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱 ,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质 ,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位 ;ACP的活性均较强 ,尤其是体积较大的培养细胞 ,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中。结论 日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标。

日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究

目的 研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法 将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论 体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。

弓形虫(RH株)慢性感染小鼠空间学习记忆能力的初步研究

目的探讨弓形虫所致慢性感染对小鼠空间学习记忆能力的影响。方法将同系雌性昆明小鼠20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。RH株弓形虫速殖子经-20℃贮存15d后取出,37℃快速复苏,腹腔接种实验组小鼠(7.7×105个/只);对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.5ml/只;2月后作莫里斯水迷宫实验,记录游泳轨迹;并作脑组织匀浆涂片和病理学检查。结果①实验组小鼠脑组织匀浆涂片可见弓形虫包囊,平均密度为15个/HP;海马及邻近脑区未见明显病理改变。②实验组和对照组小鼠逃避潜伏期、距离隐藏站台的累积距离、游泳总路程均随训练次数的增加呈明显下降趋势(P<0.01);实验组的潜伏期、距离隐藏站台的累积距离均长于对照组(P<0.01)。③实验组小鼠在60s内搜索策略与对照组有明显区别。结论腹腔接种经处理的RH株弓形虫可以致小鼠慢性感染;慢性感染在一定程度上损害了小鼠的空间学习记忆能力。

日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学的研究

目的 :研究日本血吸虫成虫培养细胞内的糖类物质。方法 :将 32d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液 ,接种在小盖玻片上 ,置含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的RPMI 16 4 0培养基中培养 ;至培养第 6d ,用高碘酸雪夫 (PAS)法显示培养细胞中的糖类物质 ;阿新蓝 PAS法显示培养细胞中的酸性粘多糖 ;用淀粉酶处理后的PAS染色以鉴定细胞内的糖原。在Olympus BH2 显微镜下观察 ,统计细胞类型 ,拍照 ;HPIAS 2 0 0 0图像分析仪测定含量 ,统计分析不同细胞类型间的差异。结果 :日本血吸虫成虫培养细胞的类型不同 ,所含的糖类成分有所不同 ,有较多培养细胞内既有糖原 ,也有酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等其它糖类物质 ;大多数细胞几乎不含糖原和酸性粘多糖 ;另有少数细胞仅含糖原和酸性粘多糖 ,以糖原为主 ,极少数细胞以酸性粘多糖为主。结论 :日本血吸虫成虫培养细胞内既含糖原 ,也含酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白。

日本血吸虫培养细胞磷酸酶细胞化学的动态变化

目的 :研究体外培养的日本血吸虫成虫细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的变化规律。方法 :将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI16 4 0含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,培养 7,14 ,2 1,35和 4 9d时 ,分别运用改良的Gomori钙 -钴法和Gomori硫化铅法进行AKP和ACP染色。结果 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫成虫培养细胞的AKP和ACP活性均渐减弱。培养 2 1d后 ,所有培养细胞的AKP活性开始减弱 ;培养至 4 9d ,AKP阴性反应细胞所占比例增大 ,但仍有较多细胞具AKP活性 ;而ACP活性在培养 14d时 ,有的细胞显著增强 ,有的却明显减弱 ;培养至 35d ,所有细胞的ACP活性减弱 ,并出现ACP阴性反应的空泡状细胞 ;至 4 9d ,大部分细胞的ACP反应为阴性。结论 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫培养细胞的AKP、ACP活性均减弱 ,AKP、ACP活性的强弱可以作为评价血吸虫细胞培养条件优劣的指标 ;培养细胞呈分批、逐步退化。

刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析

目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。

丙烯硫脲对日本血吸虫酚酶抑制作用的组织化学研究

目的 通过组织化学方法研究丙烯硫脲对小鼠体内、体外日本血吸虫成虫酚酶 (phenol oxidase,PO)活性的抑制作用。方法 将 4 2 d日本血吸虫活成虫置于含 2 5 mmol/L 邻苯二酚的磷酸盐缓冲液 (p H6 .8)中 ,2 8℃下孵育 30 min,取出虫体置载玻片上 ,加 2滴含 0 .1%戊巴比妥钠的 PBS溶液 ,置 L eica荧光显微镜下 ,分别在普通光照和紫外光激发下观察酚酶在虫体内的组织学定位。体外抑制实验时 ,加底物前先将成虫置于含 5mm ol/L 丙烯硫脲的 PBS溶液中 ,2 8℃下孵育 10 min;体内抑制实验时 ,在小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 0 d后 ,按30 0 m g/kg隔日 1次腹腔注射丙烯硫脲。结果 体外抑制实验组雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳和雄虫体壁表层的桔黄色荧光或赭褐色颜色反应均基本消失 ;体内抑制实验组雌虫子宫内未见虫卵或虫卵样物质 ,仅见大量泥沙样卵黄颗粒 ,其荧光或颜色反应也基本消失。结论 通过一种更灵敏的显示酚酶活性的组织学定位方法 ,观察到不仅雌虫含有酚酶 ,雄虫也有酚酶活性。证明丙烯硫脲对血吸虫成虫的酚酶活性有明显的抑制作用 。

肝基质与MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片（实验1组）和铺敷有肝基质的小盖玻片上（随机分为实验2组和3组），培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。培养第4d，实验1组和3组细胞分别在含3μg/ml MNNG的常规培养基中培养48h，彻底清洗后继续用常规培养基培养；实验2组细胞用不含MNNG的常规培养基处理相同时间。培养第4w。均换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。培养第5～7w，每周取各组细胞进行高碘酸雪夫（PAS）染色和唾液淀粉酶处理后的PAS染色，观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化。取培养第6w（MNNG作用后第5w）的各组染色细胞，用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的光密度，并作统计学分析。结果实验3组细胞与实验1、2组比较，PAS染色显示的四种类型细胞其着色均显著增强，淀粉酶处理后的PAS染色显示细胞内糖原含量增多，差异均具显著性（P〈0．01）。培养过程中，第二类细胞数目逐渐增多，体积增大；分裂细胞增多。这种状况在MNNG处理后第5w最为明显。结论肝基质和MNNG联合可显著增强日本血吸虫培养细胞的糖代谢和分裂增殖能力，二者具协同作用能力。

化学诱变剂对日本血吸虫成虫作用的初步研究

化学诱变剂MNNG诱导对日本血吸虫成虫形态结构变化(畸变)具有一定的影响.本文主要对其影响程度进行初步研究.具体方法是将虫龄为28天的日本血吸虫成虫,随机分成二组.一组分别用不同浓度的MNNG(1、2、3、4、5、6μg/ml)诱导24hrs;另一组用不同浓度的MNNG(1,2,3μg/ml)分别诱导24,36、48hrs.随后均被彻底清洗,并用851培养基培养,每周在光镜下观察虫体形态结构、活力等的变化,记录虫体死亡率以及虫体畸变率,对畸变成虫拍照并做扫描电镜观察.……

肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.培养第4天,实验Ⅰ组和Ⅲ组细胞分别在含3μg/ml MNNG的培养基中培养48小时,彻底清洗后继续用含20%小牛血清的RPMI-1640培养.实验Ⅱ组细胞用不含MNNG的培养基处理相同时间.……

日本血吸虫立体教学模式的构建

日本血吸虫是武汉大学医学整合课程病原生物学的主要教学内容之一。为了达到培养高素质创新型医学人才的目标,课程组对其教学方法进行了改革和创新。将血吸虫理论教学调整为大课课堂教学和小组讨论两部分,实验教学调整为血吸虫形态学、动物感染实验和课外科研训练三部分,新增加血吸虫病流行区现场实践教学,构建了一种包括理论教学、实验教学和流行区现场教学在内的三维立体式教学模式,使理论与实践、基础与临床、课内与课外紧密结合。

武汉市江夏区山坡街道农村居民肠道寄生虫感染及其危险因素调查

目的了解武汉市江夏区山坡街道农村居民肠道线虫感染现况和危险因素,为制定有针对性的防治措施提供依据。方法按照《全国人体重点寄生虫病现状调查方案》要求,2014年10月于武汉市江夏区山坡街道随机选取农村居民检查粪便中蛔虫、钩虫和鞭虫虫卵,阳性粪便进行感染度评估。设计问卷,随机对9个村中的600名村民进行肠道寄生虫感染情况与危险因素调查。结果对236名农村居民进行的粪检仅检获钩虫卵,阳性者18例,阳性率为7.63%。对600名居民进行肠道寄生虫感染情况及危险因素调查显示,疑似蛔虫感染、钩蚴性皮炎、钩虫感染和鞭虫感染者分别为397、355、295例和145例。Logistic回归分析显示,居民疑似蛔虫感染的危险因素包括未坚持便后洗手、农家肥与化肥混合使用和干农活时不常穿鞋,保护因素包括知道蛔虫感染途径、不使用新鲜粪便施肥;疑似钩虫感染的危险因素包括饮用水源为井水和池塘水、捡食掉在地上的食物、农家肥与化肥混用、一块砧板切菜时不洗砧板,保护因素包括饮用水源为自来水和井水、知道蛔虫感染途径、有时用或不用新鲜粪便施肥;疑似鞭虫感染的危险因素有捡食掉在地上的食物。结论武汉市江夏区山坡街道农村居民钩虫感染率较高,并存在肠道寄生虫感染的危险因素。应加强开展健康教育工作,提高农村居民的自我防护意识;同时应定期检查,积极进行驱虫治疗,以有效控制肠道寄生虫病的传播与流行。

日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究

目的 观察日本血吸虫成虫酚氧化酶 ( phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性。方法 将 42 d活成虫置含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI16 40培养基中 2 3℃孵育 8h后 ,分别收集雌、雄成虫 ,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清 (含 PO) ,再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)及酶染色后分析其酶谱 ;同时在紫外分光光度计下检测前后 2个时点的 A488值 ( A1,A2 ) ,PO活性相对值 =( A2 - A1) / ( min· m g样品蛋白 ) ,其活性值用每分钟每毫克蛋白 A488变化值表示。设立酚酶抑制剂 (丙烯基硫脲 )组 ,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果。结果 雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带 ;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱。日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为 0 .16 5 m in- 1· mg- 1和 0 .0 80 5 min- 1· m g- 1 ;加入酚酶抑制剂后 ,酶活性被明显抑制。终浓度为 5 mm ol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为 85 .0 3%。当丙烯基硫脲终浓度达 2 5 m mol时 ,酚酶活性被完全抑制。结论 不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶 ,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究。

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的影响。方法 将虫龄 2 6 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,在RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第 7天时 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组用含浓度为 3μg/ ml MNNG的常规培养基处理 48h,对照组用不含 MNNG的常规培养基处理同样时间 ,随后换用常规培养基培养 3周 ,当再换用含 5 %小牛血清的培养基培养 1周时 ,分别用 Gomori钙钴法和 Gom ori硫化铅法对两组培养细胞进行 AKP和 ACP细胞化学染色 ,用Olym pus BH- 12显微镜观察并拍照 ,用 HPIAS- 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 实验组培养细胞的 AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性 (P<0 .0 1)。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞 AKP、ACP的活力 ,对培养细胞有促生长或 /和诱导其转化的作用。

肠球菌溶血素与其致病力的关系

目的 探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法 分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果 临床菌株的溶血素检出率为 5 8.9% ,健康人群分离株的溶血素检出率为 19.3 % (P <0 .0 0 5 ) ;β溶血株对抗生素的耐药性明显高于非 β溶血株 (P <0 .0 1)。

肺生物基质及鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞影响的研究

目的 研究细胞外基质 (ECM)对日本血吸虫培养细胞生存、生长的影响 ,佐证 ECM有利于培养细胞的生存、生长。方法 将虫龄 2 1d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肺生物基质、鼠尾胶的培养瓶和小盖玻片上常规培养 ,分别在光镜及扫描电镜下观察、拍照 ,并运用酶细胞化学方法进行培养细胞的乳酸脱氢酶 (L DH)染色。对照组未涂生物基质。结果 与对照组相比 ,实验组细胞饱满 ,弹性好 ,立体感强 ,存活时间长 ,L DH活性强 ,对高温具一定的耐受性 ;尤其是肺基质中培养的细胞 ,酶活性最强 ,培养 6 0 d的细胞仍观察到具有分裂能力。结论 ECM能改善日本血吸虫培养细胞生存、生长的微环境。实验组间比较 。

日本血吸虫成虫培养液中氨基酸及葡萄糖含量的动态变化

目的 观察培养过程中日本血吸虫成虫细胞培养液中氨基酸 (AA)、葡萄糖 (Gluc)及甘油三酯 (TG)含量的动态变化。方法 用氨基酸自动分析仪、自动生化分析仪分别测定培养液在培养 0～ 6d过程中AA、Gluc及TG含量变化。结果 精氨酸 (Arg)、苏氨酸 (Thr)、蛋氨酸 (Met)、赖氨酸 (Lys)及Gluc含量有不同程度下降 ;天门冬氨酸 (Asp)、丙氨酸 (Ala)及游离氨 (Amm)有明显上升 ;TG变化不明显。结论 在日本血吸虫成虫细胞培养液中适当增加Arg、Thr、Met、Lys和Gluc ,同时减少Asp和Ala的含量 。