外源性胰岛素样生长因子1基因在大鼠骨髓基质细胞中的表达及对其生物学行为的影响

目的:观察人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因转染大鼠骨髓基质细胞(BMSC)后产物的表达及对BM-SC特征的影响。方法:构建hIGF-1逆转录病毒载体并转染BMSC,嘌呤霉素筛选,RT-PCR和ELISA法检测hIGF-1表达,MTT及美蓝、碱性磷酸酶钙钴、苏丹Ⅲ染色观察转染后BMSC增殖、集落形成及分化,并分析药物筛选对其增殖的影响。结果:转染BMSC经筛选后,IGF-1表达的增幅高于未经筛选者(10.7倍∶6.7倍)。与空质粒转染组比较,未经筛选的BMSC增殖加快,而经筛选者增殖和集落形成能力降低,向脂肪及成骨细胞分化增强。结论:基因修饰可成功构建高表达IGF-1的BMSC,并促进其增殖和自然分化,但嘌呤霉素筛选对其自我更新能力有负面作用。

纤维素-大豆蛋白混合膜与内皮细胞生物相容性的实验研究

目的:研究和评价纤维素-大豆蛋白混合膜与内皮细胞的生物相容性,为其作为人工生物支架材料应用于组织工程提供实验依据。方法:将内皮细胞株ECV304与不同组分、碱处理前后的纤维素-大豆蛋白混合膜共培养,分别以四氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以扫描电镜(SEM)观察细胞形态和生长状态。结果:与阴性对照组和单纯纤维素组相比,ECV304在纤维素-大豆蛋白混合膜上生长良好,大豆蛋白加入到纤维素膜中显著提高了ECV304的细胞活力;在碱处理后的混合膜表面,细胞长出许多足突伸入膜孔隙,明显促进细胞在膜表面粘附。结论:初步表明纤维素-大豆蛋白混合膜与内皮细胞ECV304生物相容性良好,在血管组织工程领域具有应用潜能。

正交设计实验研究苯与苯并(a)芘的联合毒作用

目的 :研究苯与苯 (a)芘对大鼠骨髓细胞的联合毒作用。方法 :采用正交设计试验设计方法安排处理因素苯、苯并 (a)芘及时间 ,每个处理因素取 3个水平各为 0 ,5 ,10 m M;0 ,5 ,10 μM;2 ,4,6h,共 18个试验样本。以流式细胞仪检测各样本的细胞凋亡率。结果 :仅时间因素与苯因素的主效应有统计学意义 ,且苯诱导大鼠骨髓细胞的凋亡效应呈浓度效应和时间效应关系 ,以苯终浓度为10 m M处理 6h的细胞 ,检测凋亡率达 11.5 %。正交分析苯并 (a)芘与苯之间无交互作用。结论 :在本实验研究水平下体外原代培养的细胞 ,苯诱导大鼠骨髓细胞凋亡呈剂量效应关系 ,但未能发现苯并 (a)芘对苯诱导骨髓细胞凋亡效应产生影响。

100例临床肾穿刺样品超微结构观察及分析

对近年来 1 0 0例肾穿刺病例的超微结构观察的结果进行了总结 ,并初步统计和分析了这些病例的年龄、性别、职业分布等 ,为临床治疗积累了资料。

凝固体系对纤维素/大豆蛋白膜结构的影响

分别以浓度均为5%的醋酸、硫酸、磷酸、草酸和氯化钙水溶液为凝固体系制备一系列纤维素/大豆分离蛋白共混膜,表征了不同凝固体系对共混膜的结构与力学性能的影响。结果表明,共混膜为多孔网络结构,表面和内部孔径随着大豆分离蛋白含量增加而增加,且以5%醋酸为凝固体系制备的共混膜在干态和湿态下均具有最高的力学强度和最大的表面与内部孔径。由此,5%醋酸溶液是制备具有较好力学强度和较大孔径共混膜最适合的凝固体系。

弹性K锉清理和成形弯曲根管的能力

目的 :通过离体牙研究 ,比较不锈钢普通K锉 (K file)和弹性K锉 (K flexofile)清理和成形弯曲根管的能力。方法 :选取新近拔除的带有弯曲根管 (1 0～ 2 5°)的磨牙 30颗 ,根据被选根管的弯曲度、弯曲半径将 30颗牙随机分为 2组 ,分别行不同器械的预备。预备完成后将各样本去冠后沿牙根长轴纵剖 ,在扫描电子显微镜 (scanningelectronmicroscope ,SEM)下对碎屑和玷污层评分并行Wilcoxon,s检验评价两种K锉的清理能力 ;通过双曝光技术和四格表确切概率法分析根管偏移发生率 ,评价器械的成形能力。结果 :两组根管中部的清洁度相当 (P >0 .0 5 ) ,根管尖部的清洁度K flexofile组强于K file组 (P <0 .0 5 ) ;K flexofile组根管偏移发生率低于K file组 (P <0 .0 5 )。结论 :弹性K锉联合改良双敞技术清理和成形弯曲根管的能力显著优于普通K锉 ,在临床值得推广。

新辅助动脉化疗治疗中晚期宫颈癌的疗效和安全性分析系统评价

目的系统评价新辅助动脉化疗(neoadjuvant intraarterial chemotherapy,NIC)治疗中晚期宫颈癌的疗效和安全性。方法采用Cochrane系统评价方法,搜索PubMed、EMbase、Cochrane图书馆、VIP、CNKI、CBMdisc、会议论文、Ongoing Controlled Trial等数据库。检索从建库至2009年10月,NIC治疗中晚期宫颈癌的随机对照试验(RCT)和半随机对照试验(quasi-RCT),对符合纳入标准的临床研究进行质量评价和资料提取后,采用RevMan5.0进行Meta分析。结果共纳入15个研究,合计1331例患者。12个研究结果显示,NIC组的疗效是传统治疗组的6.72倍;多项研究结果发现,NIC组患者的一年以上生存率高于传统治疗组;同时,NIC组治疗的不良反应低于传统治疗组。结论本系统评价结果表明,NIC在疗效方面优于传统治疗方法,同时能够有效减少不良反应,为当前中晚期宫颈癌的临床治疗提供了一种新的辅助手段,在临床上有较好的应用前景。但是由于目前临床对于本病的治疗是多种放化疗方案并存的状况,因此,进行更高质量更有针对性的临床研究,提供NIC与各种传统放化疗方案相互对比的重要数据,是下一步需要深入研究的问题。

培养血管平滑肌细胞收缩蛋白表达与表现型转变及细胞增殖的关系

目的 探讨体外血管平滑肌细胞 (SMC)的失分化与其表现型转变及增殖的关系。 方法 采用电镜形态定量及蛋白印迹 (Westerblot)方法检测家兔主动脉SMC在原代培养过程中肌丝体密度及收缩蛋白表达的动态变化 ,并分析这些变化与细胞增殖状态的关系。 结果 根据对细胞生长曲线的分析 ,原代培养SMC的增殖可分为 3个阶段 ,即潜伏期 (第 1～ 6d)、对数增殖期 (第 6～ 12d之间 )和增殖后静止期 (第 12d以后 )。电镜定量显示 ,胞质中肌丝的体积密度均值由培养前的 (32 14± 1 4 4 ) %下降至潜伏期末的 (18 36± 2 0 1) % (P <0 0 5 ) ;然后逐渐增高 ,到细胞进入增殖后静止期第 3d恢复至培养前水平 [(32 5 0± 1 2 1) % ;与培养前相比 ,P >0 0 5 ]。Westernblot分析显示 ,培养过程中平滑肌特异型收缩蛋白 ,如α SM肌动蛋白、SM肌球蛋白重链随培养时间逐渐降低 ,其中作为血管SMC成熟标志的SM肌球蛋白重链亚型 2在培养第 9d后消失 ;而非肌细胞型收缩蛋白 ,β NM肌动蛋白则随培养时间逐渐增高。上述蛋白含量的变化不随细胞增殖状态及肌丝的消涨而波动。 结论 体外培养血管SMC的表现型转变和失分化是两个相对独立的过程。前者与SMC的增殖状态密切相关 ,可能是肌丝系统为适应细胞分裂而发生的可逆性重组 ;而?

PI法和Annexin V/PI法检测蓝舌病毒HbC_3诱导人肝癌细胞的凋亡

利用流式细胞仪比较PI法和AnnexinV/PI法检测不同时间人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC3的凋亡率分析。结果:PI法在24h、36h、48h的凋亡率分别为10.8±3.05、21.7±6.28、28.3±10.6;AnnexinV/PI法的凋亡率分别为20.42±3.70、49.3±8.11、79.6±11.5。二种方法及不同时间感染病毒细胞的凋亡率之间有显著差异(P<0.01)。证明了AnnexinV/PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞,BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞凋亡是致肿瘤细胞病变、死亡的重要表现形式之一。

区域采样稀释分光光度法测定人体血清中氯离子的含量

利用区域采样在线稀释技术与光度检测联合测定了人体血清中氯离子的含量。该法可分析血样 10 0个 /h,测定方法的相对标准偏差 RSD为 1.7%(n=10 ) ,线性范围为 10 0 0～ 10 0 0 0 mg/L,方法的回收率为 97%～ 10 8%。

线粒体在蓝舌病毒HbC_3株诱导人肝癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨BTV-HbC3对人肝癌Hep-3B细胞线粒体功能和膜电位的影响及其与细胞凋亡关系。方法:利用透射电镜和荧光显微镜观察Hep-3B细胞感染BTV-HbC3在24,36,48 h的凋亡情况与其线粒体形态变化;噻唑蓝(MTT)法检测其线粒体功能;流式细胞仪检测经Rh123/PI染色的BTV-HbC3诱导该细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)和Annexin V/PI染色的细胞凋亡率。结果:Hep-3B细胞感染病毒在24,36,48 h时可导致线粒体功能下降,同时使线粒体膜电位显著降低,细胞凋亡率显著增加。结论:BTV-HbC3通过诱导凋亡来抑制人肝癌细胞的生长,其机制与线粒体跨膜电位下降有关。

蓝舌病毒HbC_3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡

采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化。结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡。本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能。

动情周期中大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的表达

目的 初步鉴定大鼠输卵管中存在与植物凝集素BS 1结合的糖蛋白 ,并研究其在输卵管中的定位和不同动情周期中糖蛋白的表达变化。方法 根据阴道涂片检查将大鼠分为 :间情期 (DE)组、动情前期 (PE)组、动情期 (E)组和动情后期 (ME)组。用冰冻切片法、荧光组化技术和共聚焦显微镜技术观察大鼠输卵管中与BS 1结合糖蛋白的分布及表达变化。结果 大鼠输卵管中存在与BS 1结合的糖蛋白 ,并呈节段性分布 ,即峡部 >壶腹部。动情周期中大鼠输卵管糖蛋白的表达 :动情期 >动情前期 >动情后期 >间情期。结论 大鼠输卵管与植物凝集素BS 1结合的糖蛋白在动情期 (E)峡部上皮表达最明显 ,具有雌激素依赖性。

科研仪器共享平台开设实验技术课程的探索

科研仪器共享平台不仅是高等院校重要的科研硬件资源,也是高等院校培养高层次人才的教学资源。文章介绍了如何依托科研仪器共享平台开设生物医学实验技术课程,从教学目标、组织实施、教学反馈等几个方面详细介绍了课程建设情况,总结了课程开设十余年在师资队伍建设、研究生创新能力培养、提高大型仪器使用效率等方面取得的成效,并探讨了课程优化方向。

混合式实验教学在大型仪器共享服务平台的应用

为探讨混合式教学在大型仪器共享服务平台实验课程的实践效果,针对平台开设的医学八年制本科生和研究生的生物医学前沿技术课程,从教学过程、方法构建、教学效果等方面着手改革,设计了混合式教学。结果表明,多数学生认为混合式教学效果明显,对今后的研究工作思路提升有很大帮助。对于少数学生反馈教学中互动不频繁、气氛不够活跃等问题,文中也探讨了混合式教学优化的方向。

多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用

目的:研究多西紫杉醇联合顺铂对人骨肉瘤细胞的增殖抑制作用。方法:应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法检测和观察分别及联合应用多西紫杉醇和顺铂对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制。结果:多西紫杉醇和顺铂分别及联合用药,在一定范围内均对骨肉瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且联合用药组作用明显强于单独用药组(抑制率≥59.34%,P<0.05;凋亡率18.31%,P<0.01)。结论:多西紫杉醇和顺铂联合用药比单独用药对骨肉瘤细胞株增殖抑制作用更强。

干燥综合征患者外周血CD5^+ B细胞、CD5 mRNA变化的研究

目的:了解干燥综合征患者外周血中CD5+B细胞的变化及其B淋巴细胞CD5在基因水平上的表达,探讨CD5+B细胞与干燥综合征的关系。方法:采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪检测了20例干燥综合征患者和10例健康对照者外周血中CD5+B细胞(CD5+CD19+)的百分率。应用流式细胞仪分选B淋巴细胞的基础上,运用Real-time RT-PCR方法检测7例干燥综合征患者外周血CD5 mRNA的表达水平。结果:干燥综合征患者外周血CD5+B(CD5+CD19+)细胞的百分率高于健康对照组(P<0.05)。86%的患者CD5 mRNA高于正常人水平。结论:干燥综合征患者外周血CD5+B细胞及CDS转录水平和干燥综合征的发病有一定的关联。

阻断细胞信号传导子和转录激活子6基因表达对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨细胞信号传导子和转录激活子6(STAT)信号传导通路与结肠癌细胞凋亡的关系。方法构建4个STAT6特异的shRNA质粒载体,应用阳离子脂质体瞬时转染人结肠癌细胞HT-29,以阻断Stat6信号通路;分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测STAT6mRNA表达和运用流式细胞术检测磷酸化STAT6蛋白(pSTAT6)表达来筛选有效的小发夹RNA(shRNA);运用流式细胞术分析细胞凋亡变化;RT-PCR和Western印迹观察Bcl-2和Bax基因表达。结果成功构建并筛选出两个STAT6特异的shRNA质粒载体;STAT6基因沉默的结肠癌细胞中凋亡细胞明显增加,空白对照组细胞早期凋亡率为0.4%,pshRNA-STAT6-1组和pshRNA-STAT6-4组分别为13.0%和8.8%(P<0.05);Stat6信号通路被阻断的结肠癌细胞中Bcl-2基因表达明显减少,而Bax蛋白基因表达明显增多(P<0.01)。结论Stat6信号传导通路能抑制结肠癌细胞凋亡,可能是通过调节Bcl-2和Bax基因的表达发挥作用。